钙结合蛋白Calbindin-d28k在雌(女)性生殖中的作用

钙结合蛋白Calbindin-d28k(CaBP-d28k)是一种维生素D依赖性钙结合蛋白,参与了多种生殖事件。本文综述了CaBP-d28k的结构特点,在雌(女)性生殖系统的表达、作用及其调节。

Calbindin-D28k在小鼠肾脏输尿管芽的表达规律和定位

目的观察Calbindin-D28k在小鼠肾脏输尿管芽的表达规律和定位。方法应用免疫组织化学技术结合图像分析方法对各组小鼠肾脏输尿管芽Calbindin-D28k的表达进行观察。结果胚龄12d,Calbindin-D28k在输尿管芽微弱表达;胚龄14d在输尿管芽分支表达增强。胚龄16d在输尿管芽壶腹表达强烈,且在S小体与输尿管芽壶腹连接处表达。此后Calbindin-D28k表达逐渐增强。结论在小鼠肾脏发育过程中,Calbindin-D28k在胚龄12d胎鼠肾脏输尿管芽微弱表达,之后随胚(日)龄增加其表达量逐渐增加,表达部位为输尿管芽上皮细胞胞浆内。

Calbindin-D28k在胚胎期小鼠肾组织的表达

目的观察Calbindin-D28k在胚胎发育不同时期小鼠肾组织中的表达规律,探讨Calbindin-D28k在胚胎小鼠肾发育中的作用。方法应用免疫荧光技术及蛋白印迹技术(Western blotting)对胚龄10、12、14、16、18 d小鼠肾组织中Calbindin-D28k的表达进行定性观察和半定量分析。结果Calbindin-D28k在胚龄12 d胎鼠肾输尿管芽开始微弱表达,之后随胚龄增加其表达量逐渐增加。胚龄12 d在输尿管芽表达;胚龄14 d在输尿管芽Y型分支表达;胚龄16 d在输尿管芽壶腹表达,且在S小体与输尿管芽壶腹连接处有少量表达;胚龄18 d定位于连接小管、皮质集合管上皮细胞胞浆内。结论推测Calbindin-D28k可能对胚胎小鼠肾集合管系的发育有一定作用。

钙结合蛋白calbindin-D28k在人输卵管组织的表达(英文)

本研究旨在探讨育龄妇女输卵管中钙结合蛋白calbindin-D28k(CaBP-D28k)的表达和变化。33例月经规律、有正常生育史的育龄妇女,因子宫肌瘤、子宫腺肌症行子宫切除术(一并切除输卵管),输卵管取材均包括峡部、壶腹部和伞部,按月经周期分为增生早期组6例,增生中期组5例、增生晚期组5例,分泌早期组7例,分泌中期组5例和分泌晚期组5例。采用免疫组织化学法和逆转录聚合酶链反应法检测CaBP-D28k在人输卵管组织中的表达。结果显示,人输卵管组织中存在CaBP-D28k蛋白及mRNA表达。CaBP-D28k蛋白表达于输卵管上皮细胞的胞浆中,在月经周期同一时期,输卵管峡部、壶腹部、伞部的表达无明显差别(P>0.05)。在月经周期中,CaBP-D28k蛋白表达在增生早、中期最低,而在增生晚期和分泌早期明显增高(P<0.05),分泌中、晚期显著下降(P<0.05)。CaBP-D28k蛋白阳性表达分布在月经周期中出现再分布,在增生早、中期呈灶状或片状弥散分布在胞浆中,增生晚期和分泌早、中期CaBP-D28k蛋白呈聚集的颗粒状集中在细胞顶部,至分泌晚期则仍呈灶状或弥散状分布;CaBP-D28kmRNA表达也随月经周期发生变化,在增生晚期和分泌早期明显增高(P<0.05)。结果表明,人输卵管组织中存在CaBP-D28k蛋白及mRNA表达,且具有周期性变化。

Calbindin－D28k mRNA在大鼠三叉神经节和背根节初级传入神经元中的表达

用原位杂交组织化学技术，用同位素标记的寡核苷酸探针，对Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ｋｍＲＮＡ在大鼠三叉神经节和背根节初级传入神经元中的表达进行了观察．结果发现：在大鼠三叉神经节中，约１６．１％的神经元为ＣａｌｂｉｎｄｉｎＤ２８ｋ阳性神经元，而在背根神经节中，阳性神经元占节细胞总数的２０．６％．这两个神经节中的阳性神经元主要集中在大型细胞（８．１％和１２．３％）及小型细胞（４．２％和６．８％）．从而提示Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ｋ可作为上述两种神经细胞的标志物，在此类初级传入神经元的某些生理功能中可能有重要作用．

钙结合蛋白Calbindin-D28K在人健康和龋坏牙齿中免疫定位

目的 :探讨Calbindin -D2 8K(CaB)在牙髓损伤修复过程中的作用。方法 :用免疫组化ABC法观察CaB在健康和龋坏人恒牙牙髓中的表达 ,并用图像分析系统进行半定量分析。结果 :CaB在正常和龋病牙髓中成牙本质细胞、前期牙本质、血管内皮细胞及神经纤维中均有表达。在中龋和深龋组部分牙髓细胞CaB弱阳性表达。中龋组成牙本质细胞数目增多 ,胞浆、胞突及部分胞核强阳性。深龋组前期牙本质层变薄 ,成牙本质细胞空泡变性 ,见单层扁平的成牙本质样细胞 ,胞浆及核染色强阳性。成牙本质细胞浆中CaB含量在中、深龋组明显增加。血管内皮细胞中三组间CaB含量无显著性差异。结论

1,25(OH)_2D_3对培养人牙乳头细胞Calbindin-D28K表达和矿化能力的影响

目的 :研究 1,2 5 (OH) 2 D3 对培养人牙乳头细胞Calbindin -D2 8K(CaB)表达和矿化能力的影响。方法 :用 10 -8mol/L 1,2 5 (OH) 2 D3 矿化液处理长期培养的第 2 8天细胞 2 4h ,用放射免疫和免疫组化方法 ,观察CaB表达和碱性磷酸酶 (ALP)、骨钙蛋白 (OC)的变化。同位素示踪方法观察 1,2 5 (OH) 2 D3 对胞外基质4 5Ca2 + 的影响。结果 :加入1,2 5 (OH) 2 D3 后ALP活性约为对照组的 4倍 ;OC含量约为对照组的 1.5倍。CaB在培养 2 8d牙乳头细胞及其胞外基质中表达 ,而在培养 14d牙乳头细胞中CaB免疫反应阴性。 1,2 5 (OH) 2 D3 可加强CaB表达 ,并使胞外基质对4 5Ca2 + 摄取量增加 1.5倍。结论 :1,2 5 (OH) 2 D3 有促进人牙乳头细胞矿化作用 ,表现在不仅能刺激OC、ALP的活性 ,而且可刺激具有分化表型的牙乳头细胞中CaB的合成 ,增加基质对Ca2 + 的摄取。证实促进牙乳头细胞的钙转导是CaB在矿化过程中的作用之一 ,推测CaB被“俘获”在基质中时有诱导Ca2 + 聚集和直接贮存的作用。

人卵巢组织中钙结合蛋白Calbindin-d28k蛋白和基因的表达

目的:分析钙结合蛋白Calbindin-d28k(CaBP-d28k)在人卵巢组织中的表达。方法:收集人卵巢组织标本23例,采用免疫组织化学方法和逆转录聚合酶链反应法检测CaBP-d28k在人卵巢中的蛋白及mRNA表达。结果:人卵巢中存在CaBP-d28k蛋白及其mRNA表达,CaBP-d28k蛋白定位于卵泡中的卵母细胞、颗粒细胞,以及少量的卵泡膜细胞和黄体中的粒黄体细胞和膜黄体细胞的胞浆中。卵泡各时期CaBP-d28k蛋白阳性表达强度由弱渐强依次为原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡。结论:人卵巢中多种细胞表达钙结合蛋白CaBP-d28k,其表达随卵母细胞成熟而增强。

上皮钙通道基因在维生素D受体和Calbindin-D28k双基因敲除鼠中的变化

目的研究上皮钙通道TRPV5和TRPV6基因与维生素D受体(VDR)和钙结合基因Calbindin-D28k的关系,以及肾钙的重吸收减少是否与TRPV5和TRPV6基因表达减少有关。方法制备VDR和CaBP-D28k双基因敲除小鼠,普通和高钙食物喂养下,检测野生型鼠(WT),CaBP-D28(-/-),VDR(-/-),和VDR(-/-)/CaBP-D28k(-/-)鼠的体重、摄食量及血尿参数值,用实时RT-PCR的方法检测各种鼠肾脏TRPV5和TRPV6的mRNA水平。结果普通饮食下,双基因敲除小鼠尿钙的分泌和血清甲状旁腺激素水平更高。TRPV5和TRPV6两者的表达在CaBP-D28k敲除鼠中均无变化,而在VDR敲除鼠和双基因敲除鼠中下调的幅度相当。高钙饮食下,VDR及双基因敲除小鼠的血离子钙水平正常。所有小鼠这两个基因的表达普遍降低,而在VDR和双基因敲除鼠中的表达更低。结论这些结果证实了上皮钙通道基因受钙和维生素D的调节,CaBP-D28k的缺失对两者无影响。肾钙的重吸收减少与TRPV5和TRPV6基因表达无明显关系。

钙结合蛋白Calbindin-D28K在人牙胚发育过程中的表达

目的 :研究人牙胚不同发育时期Calbindin -D2 8K(CaB)的表达 ,以期分析CaB在人牙体硬组织形成过程中的作用 ,为探明人牙齿矿化过程中经细胞钙转导机制提供实验依据。方法 :免疫组化ABC染色。结果 :人牙胚蕾、帽状期成釉器无CaB的表达 ;钟状早期成釉器的内釉细胞及部分牙乳头表面处于分化状态的细胞弱阳性染色 ;钟状晚期成釉器的成釉细胞、成牙本质细胞及部分胞核呈现强阳性染色。结论 :CaB参与了人釉质及牙本质的形成过程 ,并且在人牙胚发育过程中的CaB表达具有时间特异性及细胞特异性。

辛伐他汀诱导K562细胞凋亡过程中细胞内钙离子浓度、Calbindin-D28K和calpain基因的变化

目的:观察辛伐他汀诱导K562细胞凋亡时细胞内Ca2+浓度、Ca2+调节蛋白(Calbindin-D28K,D28K)和Ca2+激活蛋白(calpain)基因变化,以探讨K562细胞凋亡机制。方法:常规培养细胞24 h,20μmol/L辛伐他汀处理K562细胞48 h;流式细胞技术检测细胞凋亡率和Ca2+浓度,PCR技术检测D28K和calpain基因。结果:20μmol/L辛伐他汀作用K562细胞24、48、72 h凋亡率改变分别为(6.10±0.35)%、(14.15±0.42)%、(30.70±0.65)%,随药物作用时间延长细胞凋亡率增加;辛伐他汀作用K562细胞12、24、48、72 h,游离钙荧光强度变化为52.93±2.85、19.63±1.56、13.81±1.05、7.84±0.98,各处理组荧光强度与对照组相比升高(P<0.05);与相同时间对照组比较,calpain和D28K基因分别在辛伐他汀作用K562细胞24 h和48 h后上调(P<0.05)。结论:辛伐他汀诱导K562细胞凋亡时细胞内Ca2+浓度显著升高,细胞内Ca2+浓度调节蛋白D28K和calpain基因上调,这些改变可能是辛伐他汀诱导K562细胞凋亡的机制之一。

MPTP诱导的帕金森病鼠脑内Calbindin-D28k表达的免疫组化研究

目的探讨Calbindin-D28k在帕金森病发病过程中的作用。方法健康C57BL/6J小鼠采用MPTP腹腔注射建立帕金森病动物模型,动物存活期分别为14d和28d。应用ABC免疫组化结合图像分析技术观察Calbindin-D28k在不同脑区的表达。结果帕金森病鼠脑内黑质和腹侧被盖区Calbindin-D28k的表达在28d比对照组增加,造模后海马CA1区Calbindin-D28k的表达在14d和28d两个时间点均比对照组增加;而在脑皮质Calbindin-D28k的表达在造模14d和28d均较对照组降低。结论不同脑区神经元可能由于Calbindin-D28k含量的不同而对MPTP的敏感性不同;帕金森病鼠不同脑区Calbindin-D28k表达的变化,可能是脑内神经元启动自我保护机制引起Calbindin-D28k在不同脑区重新分配,以达到保护损伤神经元的目的。

Calbindin-D28k与肌动蛋白在人健康及龋坏牙齿中的分布

目的 探讨Calbindin -D2 8k与肌动蛋白在健康和龋坏人恒牙中的分布相关性及意义。方法 用免疫组化方法分别检测Calbindin -D2 8k与肌动蛋白在正常、中龋和深龋人牙中的表达并观察比较。结果 正常组Calbindin -D2 8k在前期牙本质远髓 2 / 3区域染色阳性 ,肌动蛋白在成牙本质细胞及位于矿化牙本质中的细胞突呈阳性 ;中龋组位于前期牙本质中的成牙本质细胞突Calbindin -D2 8k与肌动蛋白均呈强阳性 ,Calbindin -D2 8k在病损区前期牙本质全层呈阳性且较正常组明显增强 ;深龋组Calbindin -D2 8k染色部位主要位于成牙本质细胞核。结论 在第三期牙本质形成活跃的成牙本质细胞中Calbindin -D2 8k与肌动蛋白的分布变化具有一致性 ,均与牙本质基质的分泌有关。

大鼠腰髓内Calbindin D-28K样、SP受体样及Fos阳性神经元向臂旁外侧核的投射

目的 观察大鼠腰髓向臂旁外侧核 (LPB)投射的CalbindinD 2 8K(CB)样阳性神经元与外周伤害性刺激信息传递和SP受体 (SPR)样阳性神经元之间的关系。 方法 四甲基罗达明 (TMR)逆行追踪与CB、SPR或Fos免疫荧光组织化学染色相结合的三标方法 ,在激光共聚焦显微镜下进行观察。 结果 1 将TMR注入一侧LPB后 ,大量的TMR逆标神经元主要见于同侧腰髓背角Ⅰ层、外侧脊核 (LSN)和中央管周围灰质 (X层 )。Ⅱ层内也可见少量散在分布的TMR逆标神经元。 2 CB样阳性神经元主要分布于腰髓背角Ⅰ、Ⅱ层 ,尤其在Ⅱ层内可见大量的CB样阳性细胞呈密集分布。 3 SPR样阳性神经元主要见于腰髓背角Ⅰ层、LSN和X层。Ⅱ层内也可见少量的SPR阳性神经元。 4 5 %福尔马林注入大鼠同侧足底后诱导的Fos阳性神经元主要见于腰髓背角Ⅰ、Ⅱ层、Ⅴ～Ⅶ的外侧部。 5 TMR CB SPR和TMR CB Fos三标神经元均主要分布于背角Ⅰ层 ,Ⅱ层内也有少量的三标神经元。其中位于Ⅰ、Ⅱ内的TMR CB SPR三标神经元数分别各占TMR、CB和SPR单标神经元数的 10 3%、9 8%和 14 6 % ,而TMR CB Fos三标神经元数分别各占TMR、CB和Fos单标神经元数的 11 8%、10 6 %和 15 8%。 结论 腰髓背角Ⅰ、Ⅱ层内 ,传递外周伤害性刺激信息并向LPB投射的部分CB样阳性神?

含Calbindin-D28K mRNA的神经元在大鼠前脑中的分布—原位杂交组织化学法观察

本实验应用原位杂交组织化学技术,利用同位素标记的寡核苷酸探针,对大鼠前脑含Calbindin-D28 K mRNA的神经元的分布状况进行了详细的观察。结果发现在不同脑区或核团中,标记神经元的数量和标记强度各不相同。某些部位含许多强阳性神经元,如:前嗅核、大脑皮质、尾壳核、缰核、下丘脑、齿状回及中脑和杏仁复合体中的部分核团;然而,在另外一些脑区中,标记细胞呈中等阳性,如:嗅球的球旁细胞、盖带、梨状区内核、海马的CA1区中的锥体细胞层以及丘脑和杏仁核复合体中的部分核团。少数脑区中的标记细胞呈弱阳性,且数量较少,如;嗅结节、隔区、斜角带核等。这些结果表明含Calbindin-D28K mRNA的神经元在大鼠前脑中具有区域特异性分布特点,从而提示Calbindin-D28K在神经系统中的某些部位可能具有重要的作用。

Calbindin-D28k在出生前人海马本部及下托神经元的表达及其变化

本实验采用免疫组织化学方法研究了１３～３８ 周人胎儿海马本部及下托含Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ｋ 神经元的分布和发育。结果表明：在１３～１４ 周时，许多含Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ｋ 锥体细胞可见于ＣＡ１ 区锥体细胞层中部及深部，随着胎龄增大，ＣＡ１ 区含Ｃａｌ－ｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ｋ 锥体细胞的数量及密度逐渐下降，最终消失，并且这种下降及消失首先从含Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ｋ 锥体细胞区浅部开始，然后向深部推进；在１３～２８ 周期间，ＣＡ２ 和ＣＡ３ 区也有许多含Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ｋ 锥体细胞，但至３２ 周以及其后，ＣＡ３ 和ＣＡ２ 区则不见含Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ｋ 锥体细胞，仅在ＣＡ２ 与ＣＡ１ 交界区见到少量弱染的含Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ｋ 锥体细胞。此外，在２８～３８ 周期间，ＣＡ３ 和ＣＡ２ 区锥体细胞层周围可见许多含Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ｋ 的苔藓纤维，其密度随胎龄增大而增加。１４～３８ 周期间，许多含Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ｋ 的锥体细胞也出现于下托锥体细胞层全层及前下托锥体细胞层浅部（细胞岛区）及中部。这些区域含Ｃａｌ－ｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ｋ 锥体细胞的数量及染色强度在１４～２４

含Calbindin－D28K mRNA神经元在大鼠脊髓中的分布──原位杂交组织化学法观察

用原位杂交组织化学技术，对大鼠脊髓内含Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ＫｍＲＮＡ的神经元的分布状况进行了观察。发现含Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ＫｍＲＮＡ的神经元见于脊髓灰质的各层，但是，不同区域或核团中所含阳性神经元的数量和标记强度各不相同。其中含强阳性神经元的部位有：Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ层及前角外侧运动柱的内侧部；含中等阳性神经元的部位有：Ⅲ、Ⅷ层及中间带；有的区域仅含弱阳性神经元，如：Ⅵ层及中央区，而中间带外侧核及前角的大型运动神经元未见到阳性杂交信号。Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ＫｍＲＮＡ在大鼠脊髓内的区域特异性分布特点，提示其在神经系统的某些生理功能中可能有重要作用。

大鼠三叉神经脊束间质核内接受面口部躯体伤害性信息的calbindinD-28k神经元向孤束核的投射

为探讨三叉神经脊束间质核内的 calbindin D-2 8k神经元是否接受并传递面口部躯体伤害性信息到孤束核 ,本研究应用荧光金逆行束路追踪结合 FOS和 calbindin D-2 8k免疫荧光组织化学技术 ,观察了三叉神经脊束间质核的 calbindin D-2 8k和FOS双重免疫反应阳性的神经元向孤束核的投射。向右侧孤束核内注射荧光金并向右侧上、下唇皮下注射福尔马林 ,发现荧光金逆标细胞和 FOS免疫反应阳性细胞主要分布于注射侧的三叉神经脊束间质核的背侧边缘旁核和三叉旁核 ;大量的 calbindinD-2 8k免疫阳性细胞分布于双侧三叉神经脊束间质核内。此处的大部分荧光金逆标细胞 (约 74.4% )呈 calbindin D-2 8k免疫反应阳性。在此二者的双重阳性细胞中 ,又有一部分 (约 41.0 % )为同时呈 FOS免疫反应阳性的三重阳性神经元。结果提示 ,三叉神经脊束间质核内接受面口部躯体伤害性信息的 calbindin D-2 8k神经元可直接投射至孤束核 ,calbindin D-2

小鼠肾发育中Calbindin-D28k的定量分析

目的观察Calbindin-D28k在小鼠肾发生发育中的表达规律。方法应用蛋白印迹技术对各组小鼠肾Calbi-ndin-D28k的表达进行定量检测。结果胚龄12 d Calbindin-D28k表达量极低;胚龄14 d到胚龄16 d表达量增加;胚龄16 d到胚龄18 d表达量无显著性变化;胚龄18 d到生后7 d表达量明显增加;生后7 d到生后14 d,Calbindin-D28k表达量减少。生后14 d到生后40 d,Calbindin-D28k表达量无显著性差异。结论从胚龄12 d到生后7 d期间Calbindin-D28k表达的逐渐增强与小鼠肾钙离子转运能力的完善可能有一定的关系。

PTD-Calbindin D28K融合蛋白的表达、纯化及其穿膜功能的鉴定

目的 构建融合蛋白PTD CalbindinD2 8K(CaBP2 8)的表达质粒 ,并进行诱导表达、纯化 ,在体外初步鉴定其跨膜转运功能。方法 提取大鼠脑组织总RNA ,反转录后用聚合酶链反应 (PCR)法扩增编码CaBP2 8的全长cD NA序列 ,重组入 pET 32a及含有PTD的pTransVector表达载体中 ,测序鉴定后转化大肠埃希菌BL2 1(DE3) ,构建重组体的表达菌株。IPTG诱导表达后 ,以NTA Ni亲和层析柱进行分离纯化 ,SDS PAGE以及Westernblot鉴定。纯化的CaBP2 8及PTD CaBP2 8用FITC标记 ,分别以一定的浓度孵育体外培养的cos7细胞 ,最后荧光显微镜下观察两者在细胞中的分布情况 ,并用流式细胞仪 (FCM)做定量分析。结果 成功地构建了含有及不含有PTD的CaBP2 8表达载体 ,插入片断 783bp ,表达产物相对分子质量分别约 30 0 0 0、5 0 0 0 0 ,经Weternblot鉴定 ,与抗CaBPD2 8K抗体均有特异性反应。孵育培养的cos7细胞后 ,CaBP2 8 FITC仅少量吸附于细胞膜表面 ,而PTD CaBP2 8 FITC则分布于胞质内 ;FCM定量分析发现 ,细胞荧光强度随着目的蛋白的孵育浓度或孵育时间增加而增加 ,并且孵育时间为 1h时荧光达到最强。结论 重组PTD CaBP2