hPOT1基因过表达对HeLa细胞细胞周期和凋亡的影响

目的观察人POT1(protectionoftelomeres1)基因过表达对HeLa细胞细胞周期和细胞凋亡的影响。方法利用本课题组构建的hPOT1基因真核表达重组质粒pcDNA3-hPOT1,经脂质体介导瞬时转染HeLa细胞;通过RT-PCR和EMSA法(电泳迁移率改变分析)检测外源基因的表达效果,流式细胞术分析细胞周期,Hoechst33342荧光染色检测细胞凋亡。结果pcDNA3-hPOT1重组质粒转染HeLa细胞48h后,mRNA和蛋白质分析表明,外源性hPOT1基因能在HeLa细胞中有效表达,HeLa细胞阻滞于细胞周期S期,而对凋亡无明显影响。结论hPOT1基因可能参与了高等真核细胞细胞周期调控过程,但与细胞凋亡无密切关系。

朝天罐提取物体外抗肿瘤活性研究

目的:研究朝天罐(Osbeckia opipara,CTG)水提取物体外抗肿瘤活性。方法:采用CCK-8法和细胞克隆形成实验,研究不同浓度CTG水提取物对人肝癌细胞7721、人鼻咽癌细胞CNE-2增殖抑制作用;通过Hoechst33342荧光染色法检测细胞核染色质的变化来评价CTG对肿瘤细胞凋亡的影响。结果:CCK8和细胞克隆形成实验显示,CTG水提取物体外显著性抑制SSMG-7721和CNE-2细胞增殖; Hoechst 33342检测发现细胞核染色质发生明显改变。结论:CTG水提取物具有一定的抗肿瘤活性。

重组bcl-xL腺病毒对心肌细胞凋亡的影响

【目的】探讨转染人类抗凋亡基因bcl-xL能否提高心肌细胞对缺氧的耐受性,评价它对心肌细胞的抗凋亡作用。【方法】体外培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,建立模拟心肌缺氧模型;将携带人类bcl-xL基因的重组腺病毒感染心肌细胞;免疫细胞化学染色法分析bcl-xL蛋白的表达;TUNEL法检测凋亡指数;荧光显微镜下观察心肌细胞表达绿色荧光蛋白,用Hoechst33342染色观察细胞核的形态变化。【结果】转染rAd-bcl-xL/s的心肌细胞表达bcl-xL蛋白阳性单位(PU)(17.84±3.42)明显高于正常对照组(11.02±2.56)与rAd-bcl-xL/as转染组(8.53±2.25)(P<0.01);缺氧诱导后心肌细胞凋亡指数为(45.67±8.47)%,而转染rAd-bcl-xL/s后的细胞凋亡指数减少至(9.42±2.48)%,有显著性差异(P<0.01),未见典型的凋亡小体。【结论】腺病毒介导的bcl-xL基因能高效转染心肌细胞,并表达目的基因;外源性bcl-xL基因对体外培养的心肌细胞具有抗凋亡作用,能够提高心肌细胞对缺氧的耐受性,促进损伤心肌的恢复。

不同管径注射针对脂肪细胞活性的影响

目的检测不同管径注射针注射的脂肪细胞活性,研究注射针管径对脂肪细胞活性的影响。方法采用传统负压抽吸方式获得脂肪颗粒悬液200 ml;经双层纱布过滤并漂洗后,转入20支5 ml注射器,随机分为4组,每组5支注射器,其中1组为对照组。余3组以5 ml注射器连接不同管径注射针(12 G、16 G、18 G)匀速推出脂肪颗粒,每组分别注入5个15 ml离心管中。以Calcein-AM/Hoechst33342荧光染色法检测对照组及注射出的脂肪细胞活性,计算细胞成活率,比较注射针管径大小对脂肪细胞活性的影响。结果经12 G、16 G、18 G注射针注射过程顺利,无明显阻力。通过Calcein-AM/Hoechst33342染色法检测经不同管径注射针注射的脂肪颗粒中细胞成活率,对照组、12 G、16 G、18 G注射针管组细胞成活率分别为(83.53±7.92)%、(82.62±8.09)%、(75.78±10.94)%、(68.45±11.24)%,注射针管各组间差异具有统计学意义(P<0.05),12 G注射针管组细胞成活率与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论单位时间内注射一定量的脂肪颗粒随着注射针管内径减小,脂肪颗粒细胞成活比将随之降低,增大注射针管径可增高注射后细胞成活比。

星点设计-效应面法优化牛樟芝总三萜提取工艺及其抗肿瘤活性研究

目的研究牛樟芝总三萜（ACTT）提取工艺及其抗肿瘤活性。方法采用星点设计-效应面法（CCD-RSM）优化ACTT的提取工艺；通过MTT法检测其对人肝癌HepG2细胞体外增殖抑制作用；以最佳质量浓度的ACTT提取物（ACTTE）处理HepG2细胞，应用荧光显微镜进行形态学观察；应用AnnexinV凋亡检测试剂盒进行流式细胞分析，应用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果优化的工艺为加20倍量的90％乙醇，超声提取2次，每次40min，超声功率400W，ACTT提取率达11．87％，实际值与预测值的偏差为1．56％；不同质量浓度（12．5-200μg／mL）的ACTTE对HepG2细胞的增殖均有明显的抑制作用（P〈0．01）；直接形态显微观察及Hoechst33342荧光染色可观察到核浓缩及核碎裂等典型细胞凋亡特征及凋亡小体；流式细胞仪结果显示，给药组细胞凋亡率与空白组相比，有显著差异（P〈0．01）。结论CCD-RSM优化牛樟芝的超声醇提工艺，实际值与预测值吻合度高，预测性良好，是可行的；ACTTE体外对HepG2细胞有明显的增殖抑制及诱导凋亡的作用。

水动力吸脂系统中水流喷射强度对自体脂肪成活率的影响

目的探讨水动力吸脂系统中不同喷射水流强度作用对脂肪细胞活性的影响。方法选取水动力辅助腹部脂肪抽吸12例女性患者。水动力组,将水流喷射强度分别设定为1级(30 bar)、2级(50 bar)、3级(70 bar)、4级(90 bar),分别记为R1、R2、R3、R4组。对照组为注射器组。将所采集的脂肪组织经棉纱过滤后低速离心,观察各组水脂构成比。用Calcein-AM/Hoechst 33342染色对经酶消化法处理的脂肪细胞进行荧光染色,于倒置荧光显微镜下观察并计算各组活脂肪细胞比例。结果棉纱过滤低速离心后的脂肪组织分为油脂层、纯化脂肪组织层、液体层、底层沉淀4层。R1、R2、R3、R4及注射器组油脂比例分别为(8.9±2.3)%、(9.6±2.1)%、(10.3±1.3)%、(14.2±1.6)%、(9.5±1.8)%。R1、R2、R3与注射器组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。R4组与其余各组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。R1、R2、R3、R4及注射器组活脂肪细胞比例分别为(88.1±2.8)%、(89.9±1.9)%、(84.8±2.3)%、(78.0±1.7)%、(91.1±2.9)%。R1、R2与注射器组测得活脂肪细胞比例差异无统计学意义(P>0.05),与R3、R4组测得活脂肪细胞比例比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论低喷射水流强度作用下(1级、2级),采集的脂肪细胞活性比喷射水流强度组(3级、4级)高。