新型降钙素的基因合成与克隆表达

借助计算机辅助设计了一种新的人降钙素类似物 (新型降钙素 )。根据密码子偏爱性原理及基因工程操作原则设计了它的基因 ,运用化学法和酶法相结合的技术合成了该基因 ,并克隆到质粒 pUC19中 ,DNA测序验证正确。该基因被克隆到融合型表达载体pGEX 2T中 ,重组融合型表达载体nCT/ pGEX 2T转化E coliBL2 1,培养表达 ,SDS PAGE分析可见Mr 约 310 0 0的融合蛋白带 ,融合蛋白占细胞内总蛋白的 34%。WesternBlotting分析证明该新型降钙素获得表达。

鲑鱼降钙素与降钙素基因相关肽融合基因植物表达载体的构建

根据基因工程操作方法和植物偏爱密码子原则,设计了鲑鱼降钙素与降钙素基因相关肽融合基因,并在融合基因前端加上AMVRNA45'-UTR序列和6×His标签,在融合基因后边加上一个甘氨酸。通过SacI和SmaI双酶切pUC(AMV/CGRP/msCT)获得融合基因,用T4DNA连接酶连到植物表达载体pBI121上,构建重组质粒pBIAMV/CGRP/msCT,再转化到E.coliDH5α中保存。通过DNA测序验证表达载体构建成功。