绿原酸通过基因编码基质相互作用分子/钙释放激活钙调节蛋白通路改善糖尿病小鼠动脉粥样硬化的机制

目的探讨绿原酸(CGA)通过基因编码基质相互作用分子1(Stim1)/钙释放激活钙调节蛋白1(Orai1)通路改善糖尿病小鼠动脉粥样硬化(AS)的机制。方法将30只C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组、模型组、CGA组,每组各10只。采用高脂饲料饲养加腹腔注射50 mg/kg的链脲佐霉素(STZ)建立糖尿病AS小鼠模型,对照组采用普通饲料+等量生理盐水,CGA组建立模型后给予CGA干预,模型组给予等量生理盐水。HE染色、油红O染色观察动脉斑块情况;CCK-8检测主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖活力;qPCR检测Stim1、Orai1表达水平。结果CGA组、模型组的斑块沉积面积大于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);而CGA组的斑块沉积面积小于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组、CGA组的VSMCs增殖率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);而CGA组的VSMCs增殖率低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组、CGA组的Stim1、Orai1水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);而CGA组的Stim1、Orai1水平低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论CGA能够改善糖尿病AS及VSMCs增殖,其机制可能与调节Stim1/Orai1通路有关。

产蛋鸡子宫部钙离子转运及调控的研究进展

鸡蛋蛋壳品质下降会造成经济效益损失和食品安全风险。产蛋鸡子宫部无机钙离子(Ca^(2+))的转运涉及不同的跨膜途径、离子稳态、相关转运基因和载体的表达,是蛋壳矿化及调控的重要环节。本文综述了子宫部Ca^(2+)转运途径、Ca^(2+)转运对蛋壳矿化和蛋壳品质的影响、营养因素对Ca^(2+)转运的调控作用,旨在为通过调节蛋壳矿化,改善鸡蛋蛋壳品质提供参考。

TACI融合蛋白对免疫球蛋白A肾病大鼠肾脏损害的影响

目的探讨TACI融合蛋白(TACI-Ig)对免疫球蛋白A肾病(IgAN)大鼠肾脏损害的影响。方法将24只SD大鼠随机分为对照组、模型组、TACI-Ig组、药物对照组,每组6只。正常对照组、模型组给予生理盐水,TACI-Ig组给予TACI-Ig(14.36 mg/kg),药物对照组给予醋酸泼尼松(5 mg/kg)。比较各组24 h尿蛋白定量(24h-UP)、血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、低半乳糖基化IgA1(Gd-IgA1)、Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核转录因子κB(NF-κB)蛋白及mRNA水平,并分析TACI-Ig对肾脏损害的影响。结果模型组24h-UP水平显著高于正常对照组,而TACI-Ig组、药物对照组24h-UP水平显著低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。TACI-Ig组血清Scr水平低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。TACI-Ig组、药物对照组肾组织系膜区沉积免疫复合体的增加受到明显抑制。模型组大鼠血清Gd-IgA1水平高于正常对照组,而低于TACI-Ig组,差异有统计学意义(P<0.01)。药物对照组血清Gd-IgA1水平低于模型组,而高于TACI-Ig组,差异有统计学意义(P<0.01)。TACI-Ig组TLR4、MyD88、NF-κB蛋白水平低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。药物对照组TLR4、MyD88蛋白水平高于TACI-Ig组,差异有统计学意义(P<0.05)。TACI-Ig组TLR4、MyD88、NF-κB mRNA水平低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TACI-Ig对IgAN有较好的治疗作用,可改善IgAN大鼠肾功能,抑制肾小球系膜基质扩张和系膜细胞增殖。

Anoctamin家族中钙激活氯离子通道调节剂筛选及应用研究进展

钙激活氯离子通道(CaCC)是一类能通过胞内钙离子激活转运氯离子的通道蛋白,其主要在神经元和肌细胞中参与调节膜电位、细胞内钙平衡和细胞兴奋性等重要的生理作用。Anoctamin(Ano)家族中Ano1是最经典的CaCC,Ano1的靶向调节剂对癌症、囊性纤维化、高血压、腹泻和哮喘等疾病具有潜在治疗作用。自2008年Ano1首次被发现后,先后出现了多种CaCC特异性调节剂的筛选方法,主要包括基于荧光蛋白的高通量初级筛选、电生理膜片钳技术和虚拟筛选,进而发现了多种药理学作用不同的小分子调节剂。本文综述了目前较为主流的筛选方法的原理和优缺点,并对迄今发现的Ano1特异性调节剂的化学结构和潜在的应用进展进行综述。

非小细胞肺癌患者PRX1、CACNA2D1表达与调强放疗疗效的相关性研究

目的 分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者硫氧还原蛋白过氧化物酶1(PRXl)、钙通道α2δ1亚基(CACNA2D1)表达与调强放疗效果的相关性。方法 选取2020年1月至2022年1月于陕西省肿瘤医院接受调强放疗的112例NSCLC患者的癌组织为NSCLC组,并根据放疗疗效,将112例NSCLC患者分为有效组(74例)和无效组(38例),以60例接受手术治疗的NSCLC患者的癌旁正常肺组织为对照组。采用免疫组织化学及蛋白免疫印迹检测组织中PRX1、CACNA2D1表达。采用Spearman秩相关分析PRX1与CACNA2D1表达的相关性。采用多因素Logistic回归分析NSCLC患者调强放疗疗效的影响因素。结果 NSCLC组PRX1、CACNA2D1阳性率高于对照组(χ^(2)=46.615、46.456,P<0.05)。NSCLC组PRX1、CACNA2D1相对灰度值高于对照组(t=9.357、9.509,P<0.05)。NSCLC癌组织PRX1与CACNA2D1表达呈正相关(r=0.724,P<0.001)。TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、低分化程度、淋巴结转移患者癌组织PRX1、CACNA2D1阳性率均高于TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移患者(P<0.05)。无效组TNM分期Ⅲ~Ⅳ期占比、淋巴结转移占比、PRX1阳性率、CACNA2D1阳性率均高于有效组(P<0.05)。TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、淋巴结转移、PRX1阳性、CACNA2D1阳性是影响NSCLC患者调强放疗疗效的危险因素(P<0.05)。结论 NSCLC患者PRX1、CACNA2D1阳性率增加,与TNM分期、分化程度及淋巴结转移有关,均是影响NSCLC患者调强放疗疗效的危险因素。

钙拮抗剂对大鼠缺血性脑损伤后Bcl-2和Bax基因表达的作用

目的 探讨大鼠实验性脑缺血后海马组织Bcl 2和Bax基因的表达及尼莫地平预处理对Bcl 2和Bax基因表达的影响。方法 采用线栓法建立大鼠脑缺血模型 ;尼莫地平预处理 ;逆转录聚合酶链式反应(RT PCR)法测定其海马组织中Bcl 2和BaxmRNA。结果 大鼠大脑中动脉阻断 (MCAO)后 ,海马组织Bcl 2和Bax基因均被诱导表达 ,Bcl 2表达量持续升高 ,而Bax表达量在脑缺血 2 4h达高峰 ,随后逐渐下降。在脑缺血后 6h和 2 4h ,经尼莫地平预处理 7d的大鼠 ,海马组织Bcl 2基因的表达水平较未经预处理的大鼠明显上调 ,而Bax基因表达水平则较未经预处理的大鼠明显下调。结论 钙拮抗剂尼莫地平能有效地调控大鼠缺血性脑损伤后海马组织Bcl 2和Bax基因表达的水平 ,为干预脑卒中后基因表达提供依据。

HKC细胞损伤前后对草酸钙晶体吞噬能力的差异

采用人类肾脏近端小管上皮细胞系(HKC)建立氧化性损伤模型,研究损伤前后HKC调控草酸钙(CaOxa)结晶的差异。采用CCK-8法检测HKC的细胞活性;利用激光共聚焦显微镜观察HKC损伤后表达的晶体粘附分子骨桥蛋白(OPN);采用倒置显微镜观察HKC的形态变化;采用扫描电子显微镜(SEM)观察HKC微结构及其诱导的晶体;采用X射线衍射分析(XRD)表征晶体的组分。在CaOxa过饱和溶液中,正常HKC主要诱导形成二水草酸钙(COD)晶体,而损伤HKC则同时诱导了COD和一水草酸钙(COM)晶体。正常HKC对COD晶体有较强的吞噬能力,而损伤HKC的这种能力较弱;HKC损伤后表达OPN,促进CaOxa晶体的成核和聚集,从而增加了肾结石形成的危险性。

高苛性化系数铝酸钠溶液深度脱硅

研究了高苛性化系数铝酸钠溶液的深度脱硅．对加入CaO和C3AH6（3CaO·Al2O3·6H2O）的脱硅反应进行了热力学计算，并对NawO浓度、脱硅反应温度对脱硅精制液中SiO2浓度、脱硅率、硅量指数的影响进行了研究。结果表明，添加C3AH6一步脱硅，精制液硅量指数可达10000以上．

钙离子信号蛋白TRPC1及Orai1参与了HUVEC经SOC和ROC介导的钙内流和NO生成

目的研究瞬时受体电位通道1(TRPC1)及钙释放激活钙通道调节分子1(Orai1)在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)经钙池操纵性钙通道(SOC)和受体操纵性钙通道(ROC)介导的Ca2+内流和一氧化氮(NO)生成中的作用。方法取2~3代HUVEC进行随机分组,将构建的TRPC1、Orai1干扰质粒(sh TRPC1、sh Orai1)分别转染入HUVEC,采用real-time PCR和Western blot检测TRPC1、Orai1 mRNA和蛋白的表达及转染抑制效率。将各组细胞分别与钙敏感受体(CaR)激动剂精胺、ROC模拟剂(TPA)+CaR负性变构调节剂Calhex231、蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro31-8220与经典型PKCs和PKCμ抑制剂Go6967孵育后,荧光探针Fura-2/AM及DAF-FM负载方法同步检测[Ca2+]i和NO生成的变化。结果与对照组比较,sh TRPC1组和sh Orai1组mRNA表达(抑制率分别为84.50%、76.10%)和蛋白的表达(抑制率分别为83.98%、71.73%)明显降低(P<0.05)。在4种不同药物作用下,sh TRPC1组和sh Orai1组[Ca2+]i△ratio值和NO净荧光强度值均明显降低(P<0.05)。结论 TRPC1、Orai1参与了人脐静脉内皮细胞SOC和ROC介导的钙内流和NO生成。

剪切流定量调控细胞钙信号的研究进展

细胞内的钙信号活动受细胞所处微环境的调控,与细胞的自我更新、分化、增殖和凋亡密切相关。研究细胞钙信号的定量调控不仅有助于精确掌握在微环境影响下细胞内钙信号的动力学规律,更能在细胞的命运控制、行为模拟、系统仿生等方面发挥至关重要的作用。本文总结了剪切流调控细胞钙信号的定量研究进展,包括:(1)剪切流刺激细胞钙响应的实验现象与机制;(2)剪切流刺激细胞钙响应的数学建模与仿真;(3)剪切流对细胞钙信号的反馈控制。

钙离子信号调节亲环素配体研究进展

钙离子信号调节亲环素配体(CAML)作为亲环素B的结合蛋白于1994年被首次发现,尽管其具体作用机制目前还不十分清楚,但许多研究已证实其在T细胞受体及钙离子信号转导、细胞凋亡、免疫调节以及病毒感染等方面具有重要作用.目前已经报道与其相互作用的蛋白主要有:跨膜激活剂及钙调亲环素配体相互作用分子(transmembrane activator and CAML interactor,TACI)、EGF受体,血管紧张素ⅡⅠ型受体相关蛋白(AT1 receptor-associated protein,ATRAP)、人立早基因(immediate early geneX-1,IEX-1)、淋巴细胞特异蛋白质酪氨酸激酶(p56Lck)、常染色体隐性遗传性多囊肾疾病的相关基因PKHD1编码的蛋白fibrocystin,以及霍普金氏肉瘤相关疱疹病毒K7蛋白(KSHV)等.本文就CAML相关研究进展作简要综述.

钙稳态调节蛋白1在痛性糖尿病神经病变大鼠脊髓背角的表达变化

目的研究钙稳态调节蛋白1(CALHM1)在痛性糖尿病神经病变(PDN)大鼠脊髓中的表达。方法构建PDN大鼠模型,检测其行为学改变;利用免疫组织化学法、Western blot及实时荧光定量核酸扩增反应(q RTPCR)检测CALHM1在大鼠脊髓背角神经元上的分布、表达及m RNA转录;用统计学分析CALHM1 m RNA表达与缩足反应阈值(PWT)的相关性。结果 PDN大鼠的CALHM1及m RNA表达高于对照组,差异有统计学意义,且CALHM1 m RNA表达与50%PWT呈负相关。结论 CALHM1在PDN大鼠脊髓背角神经元中表达增高。

弥漫性轴索损伤对大鼠脑皮质钙释放激活钙通道调节分子1表达的影响

目的研究弥漫性轴索损伤(DAI)对大鼠脑皮质钙释放激活钙通道调节分子1(ORAI1)表达的影响。方法利用瞬间旋转损伤装置,建立大鼠DAI模型,分为DAI组及对照组,DAI组又分为DAI组伤后6 h、1 d、3 d、7 d、14 d等5个亚组。运用苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠DAI后脑皮质的病理生理变化;运用免疫组化检测大鼠脑皮质ORAI1的分布及表达。结果 HE染色显示,DAI伤后6 h^1 d神经元变性、坏死、崩解数量增多,轴索的断裂和紊乱明显;DAI伤后3~14 d,开始恢复期改变,神经元的变性、水肿和坏死现象逐渐减少。免疫组化检测显示,与对照组比较,DAI伤后6 h大鼠脑皮质ORAI1的表达即开始增加,伤后1 d达高峰,伤后3~14 d逐渐降低,至伤后14 d时仍高于对照组(P<0.05)。结论 DAI后大鼠脑皮质ORAI1的表达水平呈先增加后降低的趋势,这一变化与大鼠DAI后脑皮质的病理生理变化有关,ORAI1可能参与DAI后的病理生理过程。

修复前后Vero细胞调控草酸钙晶体生长的差异

采用扫描电子显微镜(SEM)和流式细胞仪等多种方法研究了降解大豆多糖(SPS)对损伤的非洲绿猴肾上皮细胞(Vero)的修复作用;研究了修复前后Vero调控草酸钙(CaOxa)晶体形成的差异。经H2O2氧化损伤的Vero在被SPS修复后,其细胞活力、细胞外SOD活性及细胞内线粒体膜电位均增加,细胞形态逐渐恢复到接近正常细胞。在诱导草酸钙(CaOxa)晶体生长过程中,修复细胞可以减少棱角尖锐的一水草酸钙(COM)晶体生成,诱导更多的二水草酸钙(COD)晶体。三种状态Vero诱导的晶体尺寸从小到大顺序为:正常细胞<修复细胞<损伤细胞。本文结果表明,降解大豆多糖可以修复受损伤的Vero细胞,降低肾结石形成的危险性,提示SPS有可能是一种潜在的绿色防石药物。

老年男性增龄与骨密度、钙调节激素的关系

目的 探讨老年男性增龄与骨密度（BMD）和钙调节激素的关系。方法85名老年男性按年龄分为两组，A组（60-69岁）32例、B组（〉70岁）53例。常规测定L2-L4、股骨颈（Neck）、大转子（Troch）、Ward＇s区的骨密度，静脉血清甲状旁腺激素（PTH）、降钙紊（CT）骨钙素（BGP）和血清钙（Ca）磷（P）。结果随着增龄，BMD逐渐下降，B组的BMD较A组明显减低（P〈0．05），Ward’s的BMD下降最明显（P〈0．01），两组腰椎L2-L4的BMD值无显著变化。血钙调激素：B组与A组比较PTH明显升高（P〈0．05）。BGP明显减低（P〈0．05），CT下降更为显著（P〈0．01）。结论老年男性随着增龄，BMD下降，PTH增高，BGP和CT下降。提示，老年男性骨质疏松的发病与年龄和钙调激素的异常有明显关系。

基于飞秒激光激发纳米金棒的细胞内钙离子水平调控

纳米金棒可以增强飞秒激光对细胞生命活动的调控能力,这主要是源于纳米金棒与匹配波长的飞秒激光作用产生了表面等离子体共振效应,而飞秒激光与细胞相互作用的主要机理仍不明确,一般认为同时存在非线性效应和热效应.通过建立数学模型定量描述了飞秒激光的热效应,并通过实验对比不同参数下飞秒激光调控含有纳米金棒的细胞内钙水平的效果,证明了非线性效应和热效应同时影响飞秒激光对细胞内钙水平的调控,且热效应起主导作用.

胞外钙对豚鼠耳蜗Deiters细胞钾电流的调制

为观察胞外钙对豚鼠耳蜗单个离体Deiters细胞钾电流的调控作用并探讨其机制,实验记录了:Deiters细胞在正常细胞外液和无钙外液中的全细胞钾电流(whole cell K+ currents,Ik),并分析了其电生理学特性的改变。结果观察到,Deiters 细胞与在正常细胞外液中相比,在祛除细胞外液中的Ca2+后,IK电流幅值明显增加,弦电导值亦明显增加,但其平衡电位未明显改变。在无钙外液中,Ik电流的反转电位向超极化方向明显移位,更接近于按照Nernst方程得出的K+理论平衡电位;而且其稳态激活曲线亦向超极化方向明显移位,但其激活趋势与正常相比无明显改变。此外,观察了Deiters细胞中钙抑制性钾电流的电流-电压关系和电导-电压关系,发现两者均呈“S”形,提示此钙抑制性钾电流可能存在2种不同的钾电导成分。由此,推测可能有两种机制参与胞外钙对Deiters细胞钾电流的调控:(1)Deiters细胞中的IK通道可能存在一个Ca2+敏感结构域,胞外Ca2+可能通过改变此结构域而对IK电流产生调制;(2)Deiters细胞中可能存在一种新型的双相门控性钾通道或钾通道耦联型受体或是一种新型的钾通道亚型,祛除胞外Ca2+可激活此新型钾电导而对IK电流产生调制。由此推测,在听觉形成过程中,胞外钙浓度下降可以对Deiters细胞的全细胞钾电流产生调制,从而更有利于Deiters细胞内K+外流,进而有效地缓冲外毛细胞周围的K+浓度;而且还可以使Deiters细胞产生更快的复极化并有利于维持其静息状态。

小鼠脑动脉平滑肌钙激活钾通道基本特性和动力学调控研究

目的采用膜片钳技术记录小鼠脑动脉平滑肌细胞上的大电导钙激活钾通道(BKCa)和自发瞬时外向电流(STOCs),研究了其基本特性以及钙离子对通道动力学的调控。方法采用两步法急性酶分离小鼠脑动脉,得到单个平滑肌细胞。使用200μg/mL两性霉素B为穿孔剂进行穿孔全细胞膜片钳实验,包括全细胞宏观电流记录和STOCs记录,采用inside-out和outside-out构型进行单通道电流记录。结果 BKCa宏观电流和STOCs能够被BKCa的特异性阻断剂IbTX(200nmol)阻断。BKCa单通道具有明显电压依赖性(半数最大激活电压V1/2=78.09mV)、K+选择性和钙敏感性(Ca2+解离常数Kd=0.881μmol),能够被胞外IbTX阻断。胞内Ca2+调控通道动力学特性主要表现为减少了开放时间常数,促进了通道由关闭向开放的转变。结论 BKCa宏观电流和STOCs非常容易记录,单通道活性好,具有BKCa的电生理学特性。小鼠脑动脉平滑肌是研究BKCa功能活动和血管活性药物作用机制的良好实验标本。

氧化胁迫对骨骼肌型钙释放通道与相关蛋白作用的影响

利用[3H]-ryanodine结合实验,SDS-PAGE和Western Blotting,光子相干光谱法(PCS)和DPH荧光偏振法,考察氧化胁迫条件下氧化型通道调控剂1,4NQ和Na2SeO3对RyR1通道活性,SR膜蛋白分布,RyR1的平均粒径和SR膜流动性的影响.结果显示,高浓度的1,4NQ和Na2SeO3处理使RyR1通道活性和SR膜的流动性降低,并且导致SR上的膜蛋白交联形成大分子交联复合物,而RyR1参与了它的形成,DTT可以逆转交联复合物的的形成.结果提示,高浓度氧化剂对RyR1通道的抑制作用,可能是由于氧化了负责关闭通道的职能巯基导致蛋白间错误交联,从而影响了钙释放通道和钙释放单元的结构和功能.

弱磁场对骨骼肌肌质网钙调控作用的研究

目的:探讨弱磁场对提取的骨骼肌肌质网系(SR)Ca^(2+)转运、钙泵(Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATPase)及钙释放通道(RyR)活性的影响,从分子水平和细胞信号系统的角度来解释生物电磁效应。方法:利用动态光谱法检测0.4 mT弱磁场辐照过的SR Ca^(2+)转运、Ca^(2+)-ATPase活性,还原型辅酶(NADH)的氧化初速率和超氧(O_2^-)产率,以及用同位素标记方法检测[~3H]-Ryanodine与RyR的平衡结合度。结果:弱磁场辐照引起SR的Ca^(2+)摄取功能和Ca^(2+)-ATPase的活性明显下降,Ca^(2+)释放和[~3H]-Ryanodine平衡结合度上升,同时上调了NADH的氧化初速率和O_2^-的产率。结论:提示0.4 mT弱磁场辐照30 min对SR Ca^(2+)-ATPase活性有明显抑制,对RyR有一定的激活效果。