Antidiabetic activity of Callicarpa nudiflora extract in type 2 diabetic rats via activation of the AMPK-ACC pathway

Objective:To evaluate the antidiabetic effect of Callicarpa nudiflora extract in streptozotoc-ininduced diabetic rats.Methods:The chemical constituents in Callicarpa nudiflora extract were identified by UPLCQ-TOF-MS.Callicarpa nudiflora extract(0.15 and 0.3 g/kg)was orally administered to streptozotocin-induced diabetic rats for 42 d.The effects of Callicarpa nudiflora extract on body weight,blood glucose,serum insulin,total cholesterol,triglyceride,LDL-C and HDL-C were investigated,and its effect on liver and pancreatic pathology was assessed by histopathological analysis.Moreover,the expression levels of adenosine 5’-monophosphate-activated protein kinase(AMPK),glucose transporter type 4(GLUT4),phospho-AMPK/AMPK,and p-acetylcoA carboxylase(P-ACC)/ACC in the skeletal muscles and liver were determined by reverse transcription-polymerase chain reaction,Western blotting,and immunohistochemistry.Results:A total of 34 compounds,including 8 iridoids,14 phenylpropanoids,and 12 flavonoids,were identified from Callicarpa nudiflora extract.Callicarpa nudiflora extract significantly reduced blood glucose and significantly restored all other biochemical parameters to near normal levels,including serum insulin,total cholesterol,triglyceride,LDL-C,and HDL-C.Callicarpa nudiflora extract improved insulin resistance and reversed the damage in the liver and pancreas caused by diabetes.Furthermore,Callicarpa nudiflora extract increased the expression levels of phospho-AMPK,GLUT4,P-ACC,and insulin receptor substrate-1 and decreased the expression level of PPAR r in diabetic rats.Conclusions:Callicarpa nudiflora extract improved oral glucose tolerance,lipid metabolism,insulin resistance,and reversed the diabetes-related damage in the liver and pancreas by activating the AMPK-ACC pathway.

裸花紫珠醇提物UPLC指纹图谱建立及抗呼吸道合胞病毒谱效关系研究

目的建立裸花紫珠醇提物的指纹图谱,分析其体外抗呼吸道合胞病毒(RSV)活性并进行谱效关系研究。方法以10%、30%、50%、70%、90%乙醇为溶剂,制备4批裸花紫珠药材的20批醇提物。采用超高效液相色谱法,利用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》绘制20批裸花紫珠醇提物的指纹图谱并进行相似度评价;采用致细胞病变效应法和MTT法考察裸花紫珠醇提物对RSV的体外抑制活性;运用Pearson相关性分析、灰色关联度分析、正交偏最小二乘(OPLS)分析进行谱效关系研究。结果20批裸花紫珠醇提物有25个共有峰,相似度为0.912~0.998,共有峰峰面积的RSD为33.54%~162.28%。20批裸花紫珠醇提物对RSV的平均半数抑制浓度为9.55~272.23μg/mL;Pearson相关性分析、灰色关联度分析、OPLS分析结果表明,共有峰8、10、12、16、18~19、22~24与药效指标的Pearson相关系数(P<0.05)和回归系数均为负值,关联度均大于0.6,变量重要性投影值均大于1。结论20批裸花紫珠醇提物成分相似但含量差异明显,且具有不同程度的体外抗RSV活性,其中共有峰8、10、12、16、18~19、22~24对应成分可能是裸花紫珠抗RSV的特征成分。

裸花紫珠提取物及其主要成分抗氧化活性研究

裸花紫珠是海南一种道地药材,具有消炎止血的功效。裸花紫珠富含黄酮类和苯乙醇苷类化学成分,它们已经被证实是天然抗氧化剂的主要来源之一。为了考察裸花紫珠药材的抗氧化活性,该研究采用DPPH·自由基清除法测定裸花紫珠醇提物、4个不同极性部位(石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水)及其7个主要成分的抗氧化作用。结果表明:裸花紫珠醇提物、醇提物的水部位、正丁醇部位、乙酸乙酯部位和化合物木犀草素、木犀草苷、毛蕊花糖苷具有较强的抗氧化活性,而5-羟基-3,7,3',4'-四甲氧基黄酮的抗氧化活性则较弱。该研究结果为裸花紫珠的保健功能开发提供了依据。

优化提取裸花紫珠总黄酮含量及对表皮伤口易感染菌抑菌性的研究

为了选出裸花紫珠总黄酮提取的最优方法,比较了ASE、超声、微波萃取和多功能浓缩4种提取方法在裸花紫珠总黄酮提取率上的差异,并利用微孔刃天青法测定总黄酮对表皮易感染菌的MIC值。结果发现ASE法总黄酮提取率最高,约为1.26%,其次为超声和微波萃取法,总黄酮提取率分别约为1.03%和0.98%,多功能浓缩法提取率最低,约为0.36%,且耗时最长。而且研究发现,ASE的MIC值最低。最终得出ASE提取效率最高,且提取物有较好的抑菌性,是裸花紫珠总黄酮提取的最优方法。

Box-Behnken响应面法优化裸花紫珠有效成分提取工艺

为研究裸花紫珠浸膏得率、总黄酮、总酚酸及总皂苷的最佳提取工艺,以浸膏得率和有效成分总含量(总黄酮、总酚酸及总皂苷含量之和)的加权评分值(加权评分值=浸膏得率×0.7+总有效成分含量×0.3)为指标,通过单因素和响应面设计相结合的方法,以提取方法、提取时间、料液比、乙醇浓度、提取次数为考察因素,优化裸花紫珠有效成分提取工艺。结果表明裸花紫珠有效成分的最佳提取工艺为:超声提取时间为42min,料液比1∶17,乙醇体积分数为62%,提取2次。此条件下加权评分值为119.27,预测加权评分值为120.47,两者相差较小。优化后的裸花紫珠有效成分提取工艺简单可行,重现性和可预测性较好。

UPLC-MS/MS法同时测定裸花紫珠药材中9种农药残留

目的采用固相萃取(SPE)前处理技术净化样品,建立超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定裸花紫珠药材中9种农药残留的方法。方法裸花紫珠样品用乙腈提取,通过Cleanet-TPH固相萃取柱净化,采用安捷伦1290~6460超高效液相色谱质谱联用仪测定,流动相为乙腈-水(含0.1%甲酸),扫描方式为多反应离子监测(MRM)模式。结果多菌灵、敌百虫、敌敌畏、灭线磷、倍硫磷、甲拌磷、丙溴磷、辛硫磷、丁硫克百威等9种被测物质的线性关系良好,相关系数为0.997 8~0.999 7,各农药的定量限为0.003~3.1μg/kg,测试精密度和重复性良好,RSD值均<3.0%;高、中、低3个浓度的样品加标回收率范围为92.7%~103.9%。3批裸花紫珠样品检出了多菌灵、敌百虫、辛硫磷等3种农药残留。结论所建立的方法简便、准确度及灵敏度高、分析速度快、专属性好,可用于裸花紫珠药材中9种农药残留的测定。

裸花紫珠总皂苷提取工艺研究

目的:探讨裸花紫珠总皂苷的最佳提取方案。方法:测定裸花紫珠中总皂苷的含量,并对样品进行测定,通过对不同提取方法和影响因素的比较,得出最佳方案。将样品进行处理后,用5%香草醛冰醋酸溶液、高氯酸、冰醋酸显色,再采用可见分光光度法(检测波长为551 nm)测出吸光度,以三七皂苷为标准品绘制的标准曲线求出总皂苷含量。结果:方法学考察中精密度、重现性、回收率良好,该方法在10~50分钟内稳定,线性范围0~428.4 mg,探究影响因素确定乙醇浓度>乙醇倍量>提取时间。结论:总皂苷的提取工艺中超声工艺优于回流工艺,根据回归曲线测定正交试验中皂苷含量,得出最佳提取方案:用10倍量的75%乙醇常温下超声提取30分钟。

黎药裸花紫珠止血散剂的制备研究

目的:在前期完成水提物止血药效研究基础上,完成黎药裸花紫珠外用止血用散剂的制备研究。方法:采用现代制剂技术,筛选裸花紫珠外用散剂制备的辅料比例、干燥时间进行了优化;并对制备的散剂粒度、外观均匀度、水分含量、装量差异等项目进行检查。结果:筛选出该散剂的优化工艺为干浸膏∶淀粉∶滑石粉=1∶2∶3.5混合均匀,70℃烘箱干燥3 h,成功制备了裸花紫珠外用止血散剂。制备的裸花紫珠散剂粒度、外观均匀度、水分含量、装量差异均符合药典剂型要求。结论:成功的完成了黎药裸花紫珠外用止血用散剂制备工艺研究,研制的散剂符合2015版药典的剂型要求。

正交试验优化裸花紫珠水提取工艺及外用止血作用的评估

目的:优化裸花紫珠茎叶水提取的工艺及初步考察水提取物的外用止血作用。方法:以浸膏得率和毛蕊花糖苷得率为评价指标,考察浸泡时间、加水倍量、提取时间和提取次数等因素,采用正交试验优选最佳水提取工艺。采用家兔耳缘静脉出血模型,外用0.5、1.0、2.0 g·mL^(-1)(按生药量计)三种浓度的水提取物,以出血量和出血时间为指标,评价裸花紫珠的外用止血效果。结果:裸花紫珠最佳水提取工艺为浸泡时间2 h,提取次数3次,加水倍量为12、10、10,每次提取时间为1 h;与空白组相比,裸花紫珠低、中、高剂量组出血量均显著减少(P<0.01),并且高剂量组相较空白组出血时间显著缩短(P<0.01)。结论:优选出的水提取工艺简单可行,且裸花紫珠水提取物有一定的外用止血作用,有进一步开发为外用止血贴的潜力。

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS的裸花紫珠水提物化学成分分析

为了对裸花紫珠水提物的化学成分进行分析鉴定,本研究以加热回流提取法制备裸花紫珠水提物,并采用超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱法(UPLC-Q-TOF-MS/MS)通过高分辨质谱数据并结合相关文献,分析鉴定水提物的化学成分。最终从裸花紫珠药材水提物中共鉴定出37个化学成分,包括5个黄酮类化合物,16个苯乙醇苷类化合物及16个环烯醚萜类化合物。其中,京尼平苷酸、连翘脂苷E、肉苁蓉苷F为首次从裸花紫珠中报道。并推测木犀草苷、连翘酯苷B、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷为裸花紫珠的标志性成分,可为裸花紫珠后续药效物质基础研究及中成药二次开发和质量控制提供参考。

近红外光谱法测定裸花紫珠提取液中木犀草苷和毛蕊花糖苷含量

目的:建立裸花紫珠提取液中木犀草苷和毛蕊花糖苷快速检测方法。方法:近红外光谱技术结合高效液相色谱法,利用偏最小二乘法建立裸花紫珠提取液中木犀草苷和毛蕊花糖苷的定量分析模型。结果:木犀草苷和毛蕊花糖苷的定量分析模型的相关系数(r)分别为0.9476,0.963;交叉验证均方根(RMSECV)分别为0.00689,0.156。验证集的相关系数(r)分别为0.9854,0.9924;预测误差均方差(RMSEP)分别为0.0051,0.094,定量校正模型预测性能良好。结论:近红外光谱技术建立测定裸花紫珠提取液中木犀草苷和毛蕊花糖苷的含量方法快速、简便、准确,为中药提取液的含量测定和质量控制研究提供了科学合理的方法。

响应面法优化裸花紫珠叶中苯乙醇苷的醇提取工艺

以裸花紫珠叶中苯乙醇苷的提取得率为指标,在单因素实验的基础上,考察药材粉碎粒度、浸泡时间、提取时间、提取次数、乙醇浓度及溶剂用量等因素对苯乙醇苷提取得率的影响,应用响应面法优化苯乙醇苷的提取条件,得到最佳提取工艺条件为提取时间120 min、乙醇浓度89%、溶剂用量20倍,在此条件下所得苯乙醇苷的提取得率为11.83%,与模型预测值11.86%偏差较小,表明优选的提取工艺稳定可行,优化后的工艺参数可为其产业化提供指导。

紫珠提取物联合七氟烷对心肌缺血再灌注损伤的预防效果观察

目的:观察紫珠提取物联合七氟烷对大鼠心肌缺血再灌注损伤的预防作用。方法:选取健康清洁级SD大鼠37只,采用随机数字表法将其分为假手术组(Sham)、心肌缺血再灌注组(I/R)、七氟烷后处理组(I1)、紫珠提取物联合七氟烷后处理组(I2)。预处理:I2组给予紫珠提取物灌胃处理,Sham组、I/R组、I1组给予等量生理盐水灌胃;2周后建立心肌缺血再灌注损伤模型:Sham组仅分离左冠状动脉前降支,I/R组缺血30 min后恢复灌注,I1和I2组缺血再灌注前1 min开始吸入3%七氟烷15 min。术后3 d,比较各组左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短分数(LVFS)、心脏梗死面积、MDA含量、SOD活性和显微结构变化。结果:I2组LVEF及LVFS均明显大于I/R和I1组,心肌梗死面积明显小于I/R和I1组,心肌组织病理改变结果显微状态明显优于I/R和I1组,MDA含量明显低于I/R和I1组,SOD活性明显高于I/R和I1组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:紫珠提取物联合七氟烷有效预防心肌缺血再灌注损伤的效果优于单用七氟烷的效果。

裸花紫珠乙酸乙酯提取物对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探究裸花紫珠(CN)提取物调控10号染色体上缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)对结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法体外培养人结肠癌细胞SW480,随机分为对照组、CN乙酸乙酯100 mg/L组、CN乙酸乙酯150 mg/L组、CN乙酸乙酯200 mg/L组、CN乙酸乙酯200 mg/L+si-NC组、CN乙酸乙酯200 mg/L+si-PTEN组。MTT法、Transwell实验分别检测增殖、迁移及侵袭能力;western blot检测Cyclin D1、N-cadherin、p21、E-cadherin、PTEN蛋白表达量。结果与对照组比较,CN乙酸乙酯200 mg/L组细胞活力和Cyclin D1、N-cadherin蛋白水平降低,迁移及侵袭细胞数明显减少,而p21、E-cadherin、PTEN蛋白水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与CN乙酸乙酯200 mg/L+si-NC组比较,CN乙酸乙酯200 mg/L+si-PTEN组细胞活力升高,Cyclin D1、N-cadherin蛋白水平升高,迁移及侵袭细胞数增多,PTEN、p21、E-cadherin蛋白水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论裸花紫珠在人结肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭中发挥重要作用,其可能通过调控PTEN的表达影响结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

裸花紫珠提取物预防大鼠术后腹腔粘连的实验研究

目的探讨裸花紫珠提取物抗大鼠术后腹腔粘连的作用。方法将SD大鼠60只,随机分为模型对照组,玻璃酸钠(阳性药物)组,裸花紫珠低、中、高剂量组共5组,采用纱布法进行造模。术后观察大鼠一般情况,各组于术后14 d观察粘连情况,采用Phillips评分法对腹腔粘连进行分级。结果各组分级评分与对照组比较,裸花紫珠高、中、低剂量组和阳性药物组均能显著降低大鼠术后腹腔粘连(P<0.05,P<0.01),尤其以裸花紫珠高剂量组和阳性药物组预防粘连作用最强。结论裸花紫珠提取物具有较好的抗术后腹腔粘连作用。

紫珠提取物通过抑制HMGB1水平改善小鼠宫颈上皮细胞炎症反应的机制

目的探讨紫珠提取物通过抑制高迁移率族蛋白框1(HMGB1)水平改善小鼠宫颈上皮细胞炎症反应的机制。方法30只CD-1远交的孕鼠用于实验研究,通过脂多糖诱导早产小鼠模型。将成功怀孕的小鼠按照随机数字表法分成3组:对照组(正常孕鼠,等量0.9%氯化钠溶液灌胃,n=10),炎症模型组(早产模型,等量0.9%氯化钠溶液灌胃,n=10)和紫珠提取物组(早产模型,100 mg·kg^(-1)·d^(-1)紫珠提取物灌胃,n=10),共干预7 d。通过蛋白印迹分析小鼠宫颈组织HMGB1/TLR4/NF-κB的蛋白表达。通过酶联免疫吸附试验检测小鼠宫颈阴道粘液中细胞因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8]的水平。通过RT-PCR分析小鼠宫颈组织焦亡相关蛋白iNOS、NLRP3和caspase-4的mRNA表达。通过水溶性荧光探针和可溶性E-钙粘蛋白(SECAD)水平评估上皮细胞通透性。结果炎症模型组HMGB1、TLR4和NF-κB的蛋白表达较对照组升高,紫珠提取物组HMGB1、TLR4和NF-κB的蛋白表达较炎症模型组降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。炎症模型组TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的水平较对照组升高,紫珠提取物组TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的水平较炎症模型组降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。炎症模型组iNOS、NLRP3和caspase-4的mRNA表达较对照组升高,紫珠提取物组iNOS、NLRP3和caspase-4的mRNA表达较炎症模型组降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。炎症模型组SECAD水平和荧光强度较对照组升高,紫珠提取物组SECAD水平和荧光强度较炎症模型组降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论脂多糖可以激活小鼠宫颈上皮细胞的炎症反应,这种炎症反应会导致宫颈上皮屏障受损,紫珠提取物通过抑制HMGB1表达降低小鼠宫颈上皮炎症反应,改善宫颈上皮屏障受损。

水提工艺对裸花紫珠主要有效成分的影响

本文主要进行水提工艺对裸花紫珠主要有效成分的影响研究,在考察料液比、煎煮次数对木犀草苷和毛蕊花糖苷含量影响的基础上,设计正交试验,研究裸花紫珠最佳水提工艺。试验结果表明,料液比对木犀草苷和毛蕊花糖苷含量无显著影响(P>0.05);煎煮次数对木犀草苷和毛蕊花糖苷含量的影响显著(P<0.05),其中煎煮次数为3次时提取液中毛蕊花糖苷和木犀草苷的含量最高。正交试验结果表明,提取次数对毛蕊花糖苷和木犀草苷含量的影响最大,其次是提取时间,料液比对其的影响最小,最佳水提工艺为14倍水提取3次,每次1小时。

裸花紫珠正丁醇提取物止血作用及其机制研究

目的:研究裸花紫珠(Callicarpa nudiflora)正丁醇提取物的止血活性及其可能的作用机制。方法:雌性KM小鼠50只,随机分为空白对照组、云南白药组(1.33g/kg)、裸花紫珠低(0.188 g提取物/kg)、中(0.375g提取物/kg)、高剂量组(0.750g提取物/kg),连续给药3d后测定受试动物的出血时间(Bleeding time,BT)和凝血时间(Clotting time,CT)。取雄性SD大鼠50只,随机分为空白对照组、云南白药组(0.93 g/kg)、裸花紫珠低(0.131g提取物/kg)、中(0.261g提取物/kg)、高剂量组(0.523g提取物/kg),连续给药10d。给药结束后分别测定血小板(Platelet,PLT)计数、二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)诱导的血小板聚集以及血小板中P-选择素(P-Selectin)含量,观察裸花紫珠提取物对血小板数量及活性的影响。采用Western Blot法,检测裸花紫珠提取物对血小板中p-Akt表达的影响。结果:给药后,裸花紫珠正丁醇提取物可显著缩短小鼠的出血时间和凝血时间。与正常组相比,0.131、0.523g裸花紫珠提取物/kg BW均可显著增加大鼠血小板计数。裸花紫珠正丁醇提取物可显著促进ADP诱导的血小板聚集;进一步研究表明,裸花紫珠提取物可显著增加血小板内P-selectin的表达,并促进Akt蛋白的磷酸化。结论:裸花紫珠提取物具有明显的止血作用,促进血小板PI3K/Akt信号转导、刺激血小板的活化可能是其止血作用的机制之一。

基于WorldView-3影像特征空间优化的随机森林算法在裸花紫珠信息提取中的研究

以海南省白沙县细水乡为研究区,采用在特征选择和分类提取等方面都具有明显优势的随机森林算法,对研究区内的裸花紫珠种植信息进行提取。首先基于World View-3数据生成4类不同特征变量,包括光谱特征、主成分特征、植被指数和纹理特征;其次通过随机森林分类算法对研究区裸花紫珠空间分布进行遥感提取研究;最后基于特征重要性对随机森林分类算法的特征空间进行优化,以得到最佳的随机森林分类结果,并与未优化特征空间的随机森林算法的分类结果进行比较。结果表明:①利用World View-3影像提取的裸花紫珠总体精度为89. 97%,Kappa系数为0. 84,表明随机森林算法在海南裸花紫珠识别中具有较高的分类精度和较好的适用性;②利用降维的分类特征提取裸花紫珠的总体精度为90. 4,Kappa系数为0. 85,表明随机森林算法可以有效地进行特征选择,在特征变量数据挖掘的同时,仍能保证裸花紫珠信息提取的精度,提高运行效率。该研究为栽培类药用植物资源的信息提取在特征选择和方法选择方面提供了一种新思路、方法和技术手段。

应用ICP-MS同时测定裸花紫珠干浸膏中6种重金属元素的含量

目的建立电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)同时测定裸花紫珠干浸膏中6种重金属元素铬(Cr)、铅(Pb)、镉(Cd)、汞(Hg)、砷(As)、镍(Ni)的含量。方法采用微波消解法处理样品,以锗(Ge)、铟(In)、铋(Bi)作为内标,紫菜标准物质作为质控,通过ICP-MS同时测定6种重金属元素。结果 6种重金属元素的线性范围为0~40 ng/m L,相关系数在0.998 2~0.999 9之间;定量限(LOQ)在0.004 9~0.065 9 ng/m L;精密度、重复性和稳定性良好,相对标准偏差(RSD)均<2.0%;低中高3个水平的加样回收率在90.0%~101.6%之间。依据本方法检验了3批样品,铬(Cr)的含量为0.198 3~0.2132 mg/kg、铅(Pb)的含量为0.498 7~0.706 5 mg/kg、镉(Cd)的含量为0.032 5~0.061 3 mg/kg、汞(Hg)的含量为0.006 4~0.008 4 mg/kg、砷(As)的含量为0.148 6~0.286 3 mg/kg、镍(Ni)的含量为0.685 7~0.710 1 mg/kg。结论该方法操作简便、结果准确、重复性好,可用于同时测定裸花紫珠干浸膏中6种重金属元素的含量。