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柴胡皂苷D对人乳腺癌MCF-7细胞株迁移、凋亡及Calnexin/Calreticulin循环的影响 被引量:15
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作者 赵炜 刘睿 +2 位作者 修俊青 姜翠红 赵志正 《现代中药研究与实践》 CAS 2018年第6期16-19,共4页
目的探讨柴胡皂苷D对乳腺癌MCF-7细胞株内质网应激(ERS)所致的凋亡及Calnexin/Calreticulin循环的影响。方法将乳腺癌MCF-7细胞分为对照组、低、中、高剂量组;检测各组细胞增殖、迁移及凋亡情况;Western blot检测各组细胞Calnexin、Calr... 目的探讨柴胡皂苷D对乳腺癌MCF-7细胞株内质网应激(ERS)所致的凋亡及Calnexin/Calreticulin循环的影响。方法将乳腺癌MCF-7细胞分为对照组、低、中、高剂量组;检测各组细胞增殖、迁移及凋亡情况;Western blot检测各组细胞Calnexin、Calreticulin、GRP78、CHOP的表达。结果与对照组相比,低、中、高剂量组细胞增殖率、迁移能力降低,细胞凋亡率增加,且细胞中Calnexin、Calreticulin、GRP78、CHOP蛋白表达增高。结论柴胡皂苷D可能通过影响MCF-7细胞Calnexin/Calreticulin循环,加重乳腺癌细胞ERS,引发细胞凋亡,从而降低细胞增殖率及迁移能力。 展开更多
关键词 乳腺癌 柴胡皂苷D calnexin/Calreticulin循环 内质网应激 凋亡
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番茄calnexin基因的克隆及胁迫表达分析 被引量:3
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作者 李明辉 孙颖 +3 位作者 赵春梅 孙爱清 胡小然 刘箭 《武汉植物学研究》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期100-105,共6页
Calnexin是内质网中重要的类凝集素分子伴侣,其主要作用是辅助糖基化蛋白的折叠和装配,调节内质网中的Ca2+稳态平衡和Ca2+信号传导过程。从番茄(Lycopersicon esculentum)的cDNA文库中克隆到calnexincDNA全序列,将其命名为Lecnx61.0,并... Calnexin是内质网中重要的类凝集素分子伴侣,其主要作用是辅助糖基化蛋白的折叠和装配,调节内质网中的Ca2+稳态平衡和Ca2+信号传导过程。从番茄(Lycopersicon esculentum)的cDNA文库中克隆到calnexincDNA全序列,将其命名为Lecnx61.0,并以其3’端DNA片段为探针对番茄基因组进行Southern分析,结果表明Lecnx61.0在该基因组中仅有一个拷贝;Northern和W estern分析表明,Lecnx61.0的表达还受热激、冷害、盐害和内质网应激诱导剂衣霉素的诱导,但对干旱胁迫没有明显的反应。LeCNX 61.0蛋白对Ca2+亏缺胁迫的响应呈现组织特异性,但高浓度Ca2+并不影响各组织中LeCNX 61.0蛋白的含量,实验结果表明LeCNX 61.0蛋白可能在植物抵抗特定的环境胁迫中发挥作用。 展开更多
关键词 calnexin 分子伴侣 Ca^2+胁迫 环境胁迫
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人Calnexin基因慢病毒载体及稳定表达Calnexin蛋白的宫颈癌细胞株构建 被引量:1
3
作者 李宏帅 王鑫廷 +1 位作者 王媛 杨洁 《山东医药》 CAS 2018年第35期46-49,共4页
目的构建人Calnexin基因慢病毒载体及稳定表达Calnexin蛋白的人宫颈癌Hela细胞株,为进一步探讨Calnexin基因对宫颈癌潜在的调控作用提供细胞模型。方法采用TRIzol提取宫颈癌细胞Hela细胞株总RNA,RT-PCR法逆转录出含有目的基因Calnexin的... 目的构建人Calnexin基因慢病毒载体及稳定表达Calnexin蛋白的人宫颈癌Hela细胞株,为进一步探讨Calnexin基因对宫颈癌潜在的调控作用提供细胞模型。方法采用TRIzol提取宫颈癌细胞Hela细胞株总RNA,RT-PCR法逆转录出含有目的基因Calnexin的cDNA序列;根据Calnexin的cDNA序列,选择EcoR1、Bam H1限制性酶切位点作为目的位点,设计FLAG-Calnexin基因的PCR引物;利用PCR法从Hela细胞cDNA中扩增出FLAG-Calnexin基因片段,连接到慢病毒载体pLVX-IRES-puro中,得到重组慢病毒pLVX-FLAG-Calnexin质粒。将慢病毒包装质粒与pLVX-FLAG-Calnexin重组质粒共转染到人肾上皮293T细胞中,获得携带FLAG-Calnexin基因序列的重组慢病毒。将慢病毒感染Hela细胞24 h,在细胞培养基中加入1.0μg/m L嘌呤霉素,药筛48 h。最后筛选出稳定表达FLAG-Calnexin蛋白的Hela细胞,采用Western blotting法、Real-time PCR法检测该细胞内的Calnexin蛋白及mRNA。结果构建完成的重组质粒经菌落PCR、重组质粒的双酶切、质粒PCR验证后,条带位置对应片段大小与目的基因大小一致,且经质粒测序后与Calnexin基因片段比对一致。经过慢病毒感染、药物筛选后得到的Hela细胞中的Calnexin蛋白及mRNA的相对表达量分别为2.14±0.25、6.15±0.21,高于野生型Hela细胞及转入空载的对照细胞(P均<0.01)。结论成功构建了人Calnexin基因慢病毒载体,同时建立、筛选出了能够稳定表达Calnexin蛋白的Hela细胞株,为进一步探讨Calnexin在宫颈癌发生发展中的作用提供了细胞模型。 展开更多
关键词 calnexin基因 慢病毒载体 宫颈癌细胞 HELA细胞
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沉默calnexin对舌鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响 被引量:1
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作者 钟齐健 金婷婷 +2 位作者 彭毓 陈伟雄 李劲松 《口腔疾病防治》 2021年第8期535-540,共6页
目的探讨沉默内质网应激相关蛋白calnexin对舌鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法将calnexin siRNA转染到舌鳞状细胞癌细胞SCC9和SCC25中,采用qRTPCR检测calnexin表达情况;Western blot实验进一步验证calnexin siRNA沉默效果... 目的探讨沉默内质网应激相关蛋白calnexin对舌鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法将calnexin siRNA转染到舌鳞状细胞癌细胞SCC9和SCC25中,采用qRTPCR检测calnexin表达情况;Western blot实验进一步验证calnexin siRNA沉默效果。通过CCK8实验检测沉默calnexin对舌鳞状细胞癌细胞增殖的影响;运用Transwell法检测沉默calnexin对细胞侵袭和迁移能力的影响。结果qRTPCR显示calnexin siRNA能够有效沉默calnexin的表达;Western blot实验进一步证实calnexin siRNA对calnexin的沉默效果。CCK8实验显示沉默calnexin表达的第4天,第5天能够抑制舌鳞状细胞癌细胞的增殖,差异有统计学意义(P<0.01);Transwell实验提示沉默calnexin的表达能够抑制舌鳞状细胞癌细胞的侵袭和迁移(P<0.001)。结论沉默calnexin可抑制舌鳞状细胞癌细胞的增殖、侵袭和迁移。 展开更多
关键词 内质网应激 calnexin 舌鳞状细胞癌 SCC9细胞株 SCC25细胞株 增殖 侵袭 迁移 SIRNA 治疗靶点
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沉默Calnexin基因表达对胃癌细胞SGC-7901内质网应激凋亡及其信号通路的影响 被引量:2
5
作者 张晓海 张洪涛 +1 位作者 胡孝定 钟华 《浙江医学》 CAS 2017年第4期259-262,276,共5页
目的探讨沉默钙连蛋白(Calnexin)基因对胃癌细胞SGC-7901内质网应激凋亡信号通路的影响。方法构建靶向Calnexin基因的慢病毒干扰载体,利用包装细胞293T获得重组慢病毒,转染人胃癌SGC-7901细胞,并分为转染shRNA-Calnexin的实验组,转染sh... 目的探讨沉默钙连蛋白(Calnexin)基因对胃癌细胞SGC-7901内质网应激凋亡信号通路的影响。方法构建靶向Calnexin基因的慢病毒干扰载体,利用包装细胞293T获得重组慢病毒,转染人胃癌SGC-7901细胞,并分为转染shRNA-Calnexin的实验组,转染shRNA空白质粒的空白载体组,并将未转染的SGC-7901细胞作为对照组。应用RT-PCR技术检测靶向沉默Calnexin的表达,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测各组细胞增殖情况;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;Western blot检测GRP94、IRE1、ATF6及CHOP表达水平。结果转染sh RNA沉默Calnexin基因可明显下调Calnexin mRNA的表达,实验组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);MTT法检测实验组细胞转染后细胞增殖能力明显下降(P<0.05);沉默Calnexin基因可提高细胞凋亡率,转染72h后实验组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);沉默Calnexin基因使胃癌细胞中GRP94、IRE1、ATF6及CHOP蛋白表达水平明显升高(均P<0.05)。结论靶向沉默Calnexin基因抑制人胃癌细胞增殖和促进细胞凋亡可能是通过抑制内质网应激信号通路实现的。 展开更多
关键词 钙连蛋白 SGC-7901细胞 慢病毒 内质网应激 凋亡 胃癌
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鸡内质网分子伴侣Calnexin基因的生物信息学与组织表达谱分析 被引量:1
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作者 李楠 王丽丽 +3 位作者 曹嫦妤 龚都强 王伟 李金龙 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1304-1308,1313,共6页
为探明鸡内质网分子伴侣钙联结蛋白(Calnexin,CNX)基因特性及蛋白结构和功能,以鸡CNX基因序列为对象,利用生物信息学方法分析了12个物种该分子核苷酸和氨基酸序列的同源性及蛋白的结构和功能,并应用qRTPCR法分析了35日龄海兰白鸡30个组... 为探明鸡内质网分子伴侣钙联结蛋白(Calnexin,CNX)基因特性及蛋白结构和功能,以鸡CNX基因序列为对象,利用生物信息学方法分析了12个物种该分子核苷酸和氨基酸序列的同源性及蛋白的结构和功能,并应用qRTPCR法分析了35日龄海兰白鸡30个组织中CNX mRNA组织表达谱。结果表明,CNX核苷酸序列及氨基酸序列在不同物种中具有一定保守性,该蛋白属于跨膜蛋白,不存在信号肽,酶分类可能属于EC 1.11.1.9,并与糖类特异性结合发挥活性。鸡CNX mRNA在鸡组织中广泛表达,其中在回肠、动脉和腺胃组织中表达量很高,表明CNX是鸡机体内必需蛋白分子,可能在消化系统和心血管系统中发挥更为重要作用。 展开更多
关键词 calnexin 生物信息学分析 组织表达谱 荧光定量PCR
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内质网分子伴侣Calnexin的研究进展 被引量:11
7
作者 张峰 《生物学通报》 2008年第8期7-10,共4页
作为内质网中的一类重要的类凝集素分子伴侣,钙连蛋白Calnexin参与细胞内的许多重要生物学功能。对其发现、分布、结构、功能、作用底物及作用机制等方面的研究进行了综述。
关键词 calnexin 内质网 类凝集素 分子伴侣
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Calnexin/Calreticulin循环与糖蛋白内质网相关性降解 被引量:5
8
作者 林胜利 李载权 唐朝枢 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2004年第5期298-301,共4页
Calnexin/Calreticulin循环与糖蛋白内质网相关性降解 (GERAD)是真核细胞内负责糖蛋白折叠质量的重要监控机制 ,监督糖蛋白在内质网中空间构象的正确折叠 ,促进未完全折叠糖蛋白再折叠 ,错误折叠糖蛋白经GERAD途径被降解。内质网应激引... Calnexin/Calreticulin循环与糖蛋白内质网相关性降解 (GERAD)是真核细胞内负责糖蛋白折叠质量的重要监控机制 ,监督糖蛋白在内质网中空间构象的正确折叠 ,促进未完全折叠糖蛋白再折叠 ,错误折叠糖蛋白经GERAD途径被降解。内质网应激引起内质网功能障碍时 ,Calnexin/Calreticulin循环和 (或 )GERAD发生异常 ,错误折叠的糖蛋白在内质网堆积导致细胞功能障碍和某些疾病的发生。错误折叠糖蛋白从Calnexin/Calreticulin循环释放到GERAD一系列途径的分子机理现已逐渐明了 ,了解糖蛋白Calnexin/Calreticulin循环与内质网相关性降解过程对进一步设计针对病毒性肝炎、帕金森病等疾病的治疗方案有重要的指导意义。 展开更多
关键词 糖蛋白 内质网 相关性 循环 疾病 功能障碍 治疗方案 再折叠 空间构象 真核细胞
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胎盘内质网应激相关蛋白Calnexin与子痫前期发病的关系 被引量:6
9
作者 乌兰 石中华 +2 位作者 王小青 刘晓梅 郭锡熔 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2011年第16期1895-1897,共3页
目的探讨胎盘组织中内质网应激相关蛋白-钙联蛋白Calnexin(CNX) mRNA及蛋白表达与子痫前期发病的关系。方法剖宫产孕妇77例分为正常足月妊娠36例(A组),轻度子痫前期患者24例(B组)和重度子痫前期患者17例(C组)。RT-PCR技术检测胎盘组织CN... 目的探讨胎盘组织中内质网应激相关蛋白-钙联蛋白Calnexin(CNX) mRNA及蛋白表达与子痫前期发病的关系。方法剖宫产孕妇77例分为正常足月妊娠36例(A组),轻度子痫前期患者24例(B组)和重度子痫前期患者17例(C组)。RT-PCR技术检测胎盘组织CNX mRNA的表达,蛋白印迹法检测胎盘组织中CNX蛋白表达。结果 B、C组CNX mRNA表达水平高于A组[(1.3291±0.05687)(、3.4232±0.1078)vs.(0.5382±0.0345)](P<0.01);B、C组CNX蛋白表达水平高于A组[(1.5678±0.2315)、(2.1123±0.5310)vs.(0.5678±0.1089)](P<0.01)。结论 CNX参与了子痫前期的病理生理过程;内质网应激可能是子痫前期发病机制之一。 展开更多
关键词 钙联蛋白 子痫前期 内质网应激 胎盘
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通过对免疫共沉淀技术的优化验证蛋白质弱相互作用 被引量:3
10
作者 冯晓琴 徐峰 +1 位作者 王嵬 刘利新 《中国科学院研究生院学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期18-23,共6页
采用单因子法对影响免疫共沉淀结果的各因素进行优化.以hCLP46(humanCAP10-like protein46)蛋白和内质网分子伴侣calnexin为例,对相互作用开展研究.通过对细胞裂解液各组分浓度、抗体用量、hCLP46的蛋白量和交联剂DSP因素的优化,验证了h... 采用单因子法对影响免疫共沉淀结果的各因素进行优化.以hCLP46(humanCAP10-like protein46)蛋白和内质网分子伴侣calnexin为例,对相互作用开展研究.通过对细胞裂解液各组分浓度、抗体用量、hCLP46的蛋白量和交联剂DSP因素的优化,验证了hCLP46(human CAP10-like protein46)蛋白和内质网分子伴侣calnexin间的弱相互作用.研究结果为探讨蛋白质之间弱相互作用提供一定的参考价值. 展开更多
关键词 免疫共沉淀 hCLP46 calnexin 影响因素 蛋白质相互作用
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蛋白酶体抑制剂ALLN对HERG-A561V蛋白转运异常的影响
11
作者 郑梅霞 廉姜芳 《现代实用医学》 2019年第5期604-606,709,共3页
目的研究蛋白酶体抑制剂ALLN对hERG-A561V突变蛋白转运异常的影响,并观察分子伴侣Calnexin(CNX)/Calreticulin(CRT)在此过程中的作用。方法瞬时转染pcDNA3-WT-hERG、pc DNA3-A561V-hERG、pc DNA3-WT/A561V-hERG、pc DNA3-L539fs/47-hERG... 目的研究蛋白酶体抑制剂ALLN对hERG-A561V突变蛋白转运异常的影响,并观察分子伴侣Calnexin(CNX)/Calreticulin(CRT)在此过程中的作用。方法瞬时转染pcDNA3-WT-hERG、pc DNA3-A561V-hERG、pc DNA3-WT/A561V-hERG、pc DNA3-L539fs/47-hERG、pcDNA3-WT/L539fs/47-hERG致HEK-293T细胞分别构建野生、突变和杂合型细胞模型;蛋白酶体抑制剂ALLN以10 mol/L的浓度孵育各组细胞模型24 h;运用免疫荧光检测ALLN干预前后h ERG蛋白在细胞内的分布情况,免疫共沉淀检测ALLN干预前后hERG蛋白与Calnexin/Calreticulin的结合情况。结果通过免疫荧光实验发现ALLN干预h ERG-A561V突变及杂合细胞模型后,胞浆及细胞膜均可见h ERG表达较干预前增加,而干预野生型h ERG和hERG-L539fs/47细胞24 h后,h ERG蛋白分布无明显变化。通过免疫共沉淀实验,发现相较野生型h ERG,分子伴侣Calnexin/Calreticulin与h ERG-A561V结合明显增多;ALLN干预各组模型24 h后Calnexin/Calreticulin表达增多,且h ERG-A561V突变及杂合组细胞模型h ERG蛋白与Calnexin/Calreticulin结合,相较野生hERG及h ERG-L539fs/47组明显增多。结论ALLN纠正了h ERG-A561V突变蛋白的转运障碍,临床有潜在治疗因基因突变致蛋白转运异常所致长QT综合征的可能性,且内质网分子伴侣Calnexin/Calreticulin可能在其中发挥重要作用。 展开更多
关键词 蛋白酶体抑制剂 ALLN hERG-A561V 蛋白质转运异常 分子伴侣calnexin/Calreticulin
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沉默钙连蛋白对人肾母细胞瘤细胞凋亡及内质网应激、JNK信号通路的影响 被引量:3
12
作者 孙为增 林国雄 林海 《山东医药》 CAS 北大核心 2017年第40期22-25,共4页
目的探讨沉默钙连蛋白(Calnexin)对肾母细胞瘤细胞凋亡及内质网应激、JNK信号通路的影响。方法将肾母细胞瘤SK-NEP-1细胞分为对照组、空载体组、实验组。对照组正常培养不转染。空载体组转染空白质粒,实验组转染Calnexin shRNA。转染24 ... 目的探讨沉默钙连蛋白(Calnexin)对肾母细胞瘤细胞凋亡及内质网应激、JNK信号通路的影响。方法将肾母细胞瘤SK-NEP-1细胞分为对照组、空载体组、实验组。对照组正常培养不转染。空载体组转染空白质粒,实验组转染Calnexin shRNA。转染24 h后全部更换为正常培养液继续培养48 h。采用实时荧光定量PCR法检测各组Calnexin mRNA表达,TUNEL法检测细胞凋亡指数(AI),Western blotting法检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、需肌醇酶1(IRE1)、肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)、凋亡信号调节激酶1(ASK1)、磷酸化凋亡信号调节激酶1(p-ASK1)、c-Jun N末端激酶(JNK)及磷酸化c-Jun N末端激酶(p-JNK)蛋白相对表达量。结果 Calnexin mRNA相对表达量:实验组、空载体组、对照组分别为0.28±0.01、1.01±0.06、1.00±0.08;实验组低于空载体组和对照组(P<0.05),但空载体组与对照组比较无统计学差异(P>0.05)。AI:实验组、空载体组、对照组分别为32.86±3.72、5.46±0.68、5.26±0.17;实验组高于空载体组和对照组(P<0.05),但空载体组与对照组比较无统计学差异(P>0.05)。GRP78、IRE1、TRAF2、ASK1、p-ASK1、JNK及p-JNK蛋白相对表达量:实验组高于空载体组和对照组(P均<0.05),但空载体组与对照组比较无统计学差异(P均>0.05)。结论沉默Calnexin可引发内质网应激并激活JNK细胞凋亡通路,进而促进肾母细胞瘤SK-NEP-1细胞凋亡。 展开更多
关键词 肾母细胞瘤 钙连蛋白 细胞凋亡 内质网应激 JNK信号通路
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钙联蛋白调控内质网应激诱导的细胞凋亡 被引量:7
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作者 李爱玲 修瑞娟 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2011年第3期335-338,共4页
内质网应激(ERS)可诱导多种细胞凋亡,与疾病发生发展密切相关。钙联蛋白(CNX)是内质网中重要的类凝集素分子伴侣,通过参与未折叠蛋白反应募集凋亡相关因子、激活IRE1-JNK激酶等途径,调控ERS诱导的凋亡。本文就其研究现状进行阐述。
关键词 内质网应激 钙联蛋白 细胞凋亡
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缺氧对脑脊液-视神经屏障中脑膜上皮细胞内质网和线粒体膜电位的影响 被引量:3
14
作者 辛晓蓉 巩天祥 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2014年第11期1009-1012,共4页
目的探讨脑膜上皮细胞(meningothelial cells,MECs)参与视神经疾病的发病机理,研究缺氧对MECs功能变化的影响。方法将培养的MECs分别在体积分数21%O2(对照组)和体积分数1%O2(缺氧组)环境下孵育1 d和2 d,采用酶联免疫吸附实验测定和比较M... 目的探讨脑膜上皮细胞(meningothelial cells,MECs)参与视神经疾病的发病机理,研究缺氧对MECs功能变化的影响。方法将培养的MECs分别在体积分数21%O2(对照组)和体积分数1%O2(缺氧组)环境下孵育1 d和2 d,采用酶联免疫吸附实验测定和比较MECs的总抗氧化能力(total anti-oxidative capacity,T-AOC);采用MitoTracker Red检测和比较MECs在正常氧和缺氧环境下作用2 d的线粒体膜电位的变化;通过测定钙联蛋白的荧光染色,以评价MECs暴露于氧化应激环境后对内质网功能的影响。结果与对照组相比,缺氧组的氧化应激能力降低,结果显示T-AOC下降。对照组和缺氧组细胞分别培养1 d后,细胞中T-AOC分别为(0.012 4+0.001 1)U·L-1和(0.011 9+0.009 0)U·L-1,差异无统计学意义(t=0.915、P=0.382)。分别培养2 d后,缺氧组细胞中T-AOC(0.010 7+0.008 3)U·L-1低于对照组(0.012 9+0.008 7)U·L-1,差异有统计学意义(t=4.616、P=0.001)。不同氧环境作用于细胞2 d后,采用共焦显微镜荧光探针方法分析作用于对照组和缺氧组的MECs线粒体膜电位的变化,结果发现缺氧组细胞荧光强度与对照组相比明显减低;同时通过荧光显微镜观察发现,缺氧组MECs钙联蛋白绿色荧光强度较对照组明显增强。结论缺氧通过影响MECs内质网及线粒体功能而影响其氧化应激能力。 展开更多
关键词 缺氧 脑膜上皮细胞 内质网 线粒体膜电位 钙联蛋白 脑脊液-视神经屏障
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The cellular interactome for glycoprotein 5 of the Chinese highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus 被引量:1
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作者 DU Ji-ge GE Xin-na +4 位作者 DONG Hong ZHANG Ning ZHOU Lei GUO Xin YANG Han-chun 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2016年第8期1833-1845,共13页
supported by the Earmarked Fund for Modern Agro-industry Technology Research System of China (CARS-36) from the Ministry of Agriculture of China;the National Natural Science Foundation of China (31572549);the Nati... supported by the Earmarked Fund for Modern Agro-industry Technology Research System of China (CARS-36) from the Ministry of Agriculture of China;the National Natural Science Foundation of China (31572549);the National Key Technology R&D Program of China (2015BAD12B01-2) from the Ministry of Science and Technology of China 展开更多
关键词 PRRSV glycoprotein 5(GP5) interactome profile mitofilin calnexin
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Functional structure analysis and genome‑wide identification of CNX gene family in cotton
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作者 XU Nan ZHANG Hong +14 位作者 ZHANG Yuexin FAN Yapeng WANG Jing MALIK Waqar Afzal RUI Cun HAN Mingge LU Xuke CHEN Xiugui WANG Junjuan WANG Delong WANG Shuai CHEN Chao GUO Lixue ZHAO Lanjie YE Wuwei 《Journal of Cotton Research》 CAS 2022年第3期285-301,共17页
Background:Under abiotic stress conditions,cotton growth is inhibited and yield losses are severe.Identification of calnexin family members and function analysis under abiotic stress laid the foundation for the screen... Background:Under abiotic stress conditions,cotton growth is inhibited and yield losses are severe.Identification of calnexin family members and function analysis under abiotic stress laid the foundation for the screening of stressrelated candidate genes.Results:A total of 60 CNX family members have been identified in Gossypium hirsutum,G.barbadense,G.arboreum,and G.raimondii,and they were divided into two categories:CNX and CRT genes.Through the construction of a phylogenetic tree,they were subdivided into three classes.Further analysis of chromosome localization,conserved promoters,gene structure and selection under pressure showed that the family members were highly conserved in the evolution process.Analysis of cis-acting elements in the promoter regions showed that CNX family genes contain regulatory elements for growth and development,anaerobic,drought,defense and stress response,and plant hormones.Using RNA-seq data to study the expression pattern of GhCNX genes under cold,hot,salt stress and Polyethylene glycol,it was observed that the gene expression levels changed by different degrees under different stress conditions,indicating that GhCNX members were involved in the regulation of multiple biological stresses.Conclusion:This study provides an insight into the members of cotton CNX genes.The results of this study suggested that CNX family members play a role in defense against adversity and provide a foundation for the discovery of stress-related genes. 展开更多
关键词 calnexin GhCNX Conserved motifs Selection pressure COLLINEARITY Differential expression
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水分胁迫下枣裂果的全长转录组分析 被引量:3
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作者 魏薇 贾彦丽 +1 位作者 吴硕 智福军 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2020年第S01期63-71,共9页
为了从转录本水平阐明水分胁迫下的枣裂果的分子机制,以5 a生金丝新4号品种为试验材料进行50 h的喷淋,模拟水分胁迫,处理结束后对喷淋前后的样品在ONT平台进行3代全长转录组测序。6个样品共获得13368条转录本序列,APA事件中鉴定到9178个... 为了从转录本水平阐明水分胁迫下的枣裂果的分子机制,以5 a生金丝新4号品种为试验材料进行50 h的喷淋,模拟水分胁迫,处理结束后对喷淋前后的样品在ONT平台进行3代全长转录组测序。6个样品共获得13368条转录本序列,APA事件中鉴定到9178个PolyA位点,并找到78个显著富集的PolyA信号(PAS)motif,预测到7321个SSR和114个lncRNA;对照组和处理组分别鉴定到239,189个可变剪接事件;差异分析共得到248个差异转录本,参与的主要转录本包括钙网蛋白、钙联蛋白、热激蛋白、微管蛋白、果糖激酶等。GO富集显示,差异转录本主要参与了翻译、有丝分裂、冷适应等生物学过程,相应地细胞组分为细胞质和核糖体,富集的分子功能为核糖体成分、木葡糖基转移酶活性等;通过KEGG富集分析发现,上调表达的转录本主要参与了内质网蛋白加工、吞噬体、氨基糖与核糖代谢以及淀粉和蔗糖代谢通路;下调转录本主要参与了内质网蛋白加工、氮代谢和光合作用-天线蛋白通路等过程。差异转录本编码的蛋白之间存在复杂的互作网络。水分胁迫下的裂果机制可能包括可变剪接事件的减少、钙网蛋白和钙调蛋白对钙离子的调节、持续喷淋后冷应激造成热激蛋白上调及细胞壁组分合成相关基因的上调等。 展开更多
关键词 裂果 水分胁迫 全长转录组 钙网蛋白 热激蛋白
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Exendin-4对人脐静脉内皮细胞内质网应激损伤的拮抗作用 被引量:1
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作者 胡小春 刘浩宇 +2 位作者 覃数 张冬颖 刘剑 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第17期1827-1830,共4页
目的研究exendin-4(Ex-4)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)内质网应激相关凋亡的拮抗作用。方法 RPMI1640培养基培养HUVECs,待细胞长到培养瓶底部80%左右后,分4组干预细胞,每组8瓶,共32瓶。实验分组... 目的研究exendin-4(Ex-4)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)内质网应激相关凋亡的拮抗作用。方法 RPMI1640培养基培养HUVECs,待细胞长到培养瓶底部80%左右后,分4组干预细胞,每组8瓶,共32瓶。实验分组:①正常对照组(n=8):不做任何处理;②Ex-4组(n=8):(Ex-4,8μg/mL,45 min);③EPBS组(n=8):(EPBS,100μL/mL,30 min);④双药组(n=8):Ex-4预处理(8μg/mL,45 min),后加EPBS(100μL/mL,30 min)。免疫荧光法检测确认HUVECs上存在胰高血糖素样肽-1受体(glucagon-like peptide-1 receptor,GLP-1R);内源性过氧化氢酶抑制物(endogenous peroxidase blocking solution;EPBS)诱导HUVECs的凋亡,流式细胞仪检测细胞凋亡率变化;加入Ex-4预处理后,观察EPBS诱导HUVECs凋亡率的变化。Western blot检测细胞Calnexin、(C/EBP homologous protein,CHOP)和Bax表达情况,探讨内质网应激相关凋亡的机制。结果①HUVECs上有GLP-1受体表达;②与正常对照组相比,EPBS组HUVECs的凋亡率显著增加[(52.27±3.66)%vs(7.25±0.62)%,P<0.01)];与EPBS组比较,Ex-4的预处理可明显降低EPBS诱导的HUVECs凋亡[(37.77±2.86)%vs(52.27±3.66)%,P<0.01)]。与正常对照组相比,EPBS能增加Calnexin[(1.76±0.16)vs(1.00±0.05),P<0.01]、CHOP[(4.58±0.32)vs(1.00±0.12),P<0.01]和Bax[(2.25±0.10)vs(1.00±0.06),P<0.01]的表达;与EPBS组比较,Ex-4的预处理可显著降低Calnexin[(0.42±0.05)vs(1.76±0.16),P<0.01]、CHOP[(0.64±0.10)vs(1.65±0.12),P<0.01]和Bax[(1.48±0.08)vs(2.25±0.10),P<0.01)]的表达。结论 Ex-4对EPBS诱导的HUVECs凋亡有明显抑制作用,其抑制作用可能与EX-4减少内质网应激相关蛋白Calnexin、CHOP和Bax相关。 展开更多
关键词 人脐静脉内皮细胞 内质网应激 钙联蛋白 艾塞那肽 细胞凋亡
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人脑胶质瘤中MAGE-D4和CANX mRNA的表达及其相关性分析 被引量:2
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作者 谢欢 张庆梅 +7 位作者 张鹏博 张沅 农蔚霞 罗彬 葛盈盈 李枫 刘畅 谢小薰 《中国临床新医学》 2022年第2期114-119,共6页
目的探讨人脑胶质瘤中黑色素瘤相关抗原(MAGE)-D4和钙联蛋白(CANX)mRNA的表达水平,分析其相关性及临床意义。方法应用基因表达谱交互式分析(GEPIA)数据库数据[胶质母细胞瘤(GBM)组织163例,低级别胶质瘤(LGG)组织518例,正常脑组织207例]... 目的探讨人脑胶质瘤中黑色素瘤相关抗原(MAGE)-D4和钙联蛋白(CANX)mRNA的表达水平,分析其相关性及临床意义。方法应用基因表达谱交互式分析(GEPIA)数据库数据[胶质母细胞瘤(GBM)组织163例,低级别胶质瘤(LGG)组织518例,正常脑组织207例]分析MAGE-D4和CANX mRNA在人脑胶质瘤组织中的表达情况,并通过逆转录-定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法在临床样本(胶质瘤62例,正常脑组织11例)中进一步验证。分析MAGE-D4和CANX mRNA表达水平与胶质瘤患者临床指标的关联性。应用小干扰RNA(siRNA)技术沉默胶质瘤细胞株SF126和U251中MAGE-D4的表达,探讨MAGE-D4与CANX表达的相关性。结果GEPIA数据库数据分析结果显示,GBM和LGG组织的MAGE-D4和CANX mRNA表达水平均高于正常脑组织,差异有统计学意义(P<0.05)。针对临床样本的RT-qPCR检测结果也显示,胶质瘤组织中MAGE-D4和CANX mRNA的表达水平显著高于正常脑组织(P<0.05)。MAGE-D4及CANX mRNA的表达水平与患者年龄、性别、世界卫生组织(WHO)分级、病理类型、卡氏评分(KPS)、肿瘤最长径,以及Ki-67、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、S-100和波形蛋白(vimentin)的表达水平均无关联性(P>0.05)。Pearson相关分析结果显示,临床胶质瘤样本组织中MAGE-D4与CANX mRNA表达水平呈正相关(r=0.916,P=0.000)。细胞实验结果显示,经MAGE-D4 siRNA沉默后,SF126和U251细胞CANX mRNA的表达水平显著下降(P<0.05)。结论人脑胶质瘤中MAGE-D4、CANX高表达,且二者表达水平呈正相关,提示其可能共同参与了胶质瘤的发生、发展,具有成为胶质瘤免疫治疗靶点的应用前景。 展开更多
关键词 胶质瘤 黑色素瘤相关抗原-D4 钙联蛋白 相关性
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朊病毒感染与VCP关系初探 被引量:1
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作者 夏影 郑小亮 +7 位作者 张爽 吴海燕 马权 陆鹏 陈嘉 胡超 陈操 陈志宝 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第23期20-27,167,共9页
为了探究感染朊病毒后含缬酪肽蛋白(valosin-containing protein,VCP)的变化情况及其对内质网相关蛋白降解(endoplasmic reticulum-associated degradation,ERAD)信号通路的影响,试验采用细胞免疫荧光和实时荧光定量PCR等方法分析朊病... 为了探究感染朊病毒后含缬酪肽蛋白(valosin-containing protein,VCP)的变化情况及其对内质网相关蛋白降解(endoplasmic reticulum-associated degradation,ERAD)信号通路的影响,试验采用细胞免疫荧光和实时荧光定量PCR等方法分析朊病毒感染的细胞系中VCP及其基因表达情况;Western-blot方法检测朊病毒感染的细胞、小鼠脑组织中VCP含量变化,白藜芦醇动态清除朊蛋白(prion protein,PrP)的SMB-S15细胞、PrP重组质粒pcDNA3.1(+)-Cyto-PrP瞬时转染的293T细胞、蛋白酶体抑制剂MG-132处理的SMB-S15细胞中VCP的表达情况,以及朊病毒感染的细胞系中ERAD信号通路关键因子的表达水平。结果表明:与对照组相比,在朊病毒感染的细胞中VCP及基因表达水平差异不显著(P>0.05);在终末期小鼠脑组织中VCP表达水平差异不显著(P>0.05);经动态清除PrP、细胞内聚集PrP以及MG-132处理后,VCP表达水平均差异不显著(P>0.05);在朊病毒感染细胞中ERAD信号通路关键因子calnexin表达水平极显著升高(P<0.01),OS-9表达水平显著高于对照SMB-PS细胞(P<0.05)。说明感染朊病毒后VCP变化不显著,calnexin和OS-9发生明显变化,提示ERAD信号通路可能会参与朊病毒的复制过程。 展开更多
关键词 朊病毒 含缬酪肽蛋白 泛素 内质网相关蛋白降解 钙连蛋白
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