饲粮蛋白质水平对猪背最长肌calpain1含量、嫩度及血液激素水平的影响

为研究饲粮蛋白质水平对猪背最长肌calpain1表达的影响及其与肌肉嫩度的关系,选用54头约50kg的LY(长×大)二元杂交去势公猪,随机分为3个处理,每个处理3个重复,每个重复6头猪,分别饲喂10%、18%、26%3种蛋白质水平的饲粮,各饲粮能量及氨基酸模式保持一致,饲养76d后屠宰取样,测定猪背最长肌中calpain1的相对含量、背最长肌的嫩度及血浆中的主要激素水平。结果表明,calpain1的相对含量和剪切力值均随蛋白质水平的升高而升高,但两者之间相关性不显著(P>0.05)。血浆中皮质醇、甲状腺素(T4)的含量随蛋白质水平的升高而减少(P=0.211,P=0.039),胰岛素的含量随蛋白质水平的升高而增加(P=0.103)。Calpain1可能参与了血液中主要激素对蛋白质降解的调控过程。

人Calpain1与心脏结构蛋白的相互作用

为探讨人calpain1与心脏结构蛋白之间的相互作用 ,采用酵母双杂交体系筛选与人calpain1大亚基相互作用的蛋白质 ,通过DNA序列测定及BLAST分析同源性 ,获得了阳性克隆 12 (pACT2 12 ) ,16 (pACT2 16 ) ,2 2 (pACT2 2 2 )和 37(pACT2 37)等 .12和 2 2分别与人心脏α肌动蛋白 (humancardiacmusclealpha actin ,ACTC)有 99%和 10 0 %同源性 .16和 37分别与人心脏的肌球蛋白结合蛋白C(humancardiacmyosin bindingproteinC ,MYBPC3)和人α2 辅肌动蛋白 (humancardiacalpha 2actinin ,ACTN2 )有 10 0 %同源性 .这些阳性克隆均属于心脏中心肌细胞的结构蛋白 ,参与心肌细胞的收缩运动 .为鉴定calpain1大亚基的哪些结构域可能参与这些相互作用 ,阳性克隆再分别与含有人calpain1大亚基结构域Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的诱饵质粒共同转化AH10 9进行酵母双杂交 ,发现pACT2 12(ACTC)和pACT2 16 (MYBPC3)均能与全长人calpain1大亚基的结构域Ⅱ和Ⅲ相互作用 ;pACT2 16(MYBPC3)还能与大亚基的结构域Ⅳ作用 ;而pACT2 37(ACTN)虽能与全长人calpain1大亚基作用 ,却不与其单独的结构域Ⅱ、Ⅲ或Ⅳ发生作用 .定量分析阳性克隆与人calpain1大亚基作用的强弱的结果显示 ,pACT2 12、16或 37分别与诱饵质粒pGBKT7 CANP共同转化AH10

高尿酸通过激活钙蛋白酶加重缺血/缺氧条件下小鼠心肌细胞凋亡

目的:研究高尿酸对缺血/缺氧条件下心肌细胞的影响及钙蛋白酶(Calpains)在其中的作用。方法:将小鼠心肌细胞系分为3组:0μmol/L尿酸+缺血/缺氧组(单纯缺血/缺氧组);600μmol/L尿酸+缺血/缺氧组;1 200μmol/L尿酸+缺血/缺氧组,通过流式细胞技术检测各组心肌细胞凋亡比例,并进一步将凋亡比例明显增加的实验组分为:1 200μmol/L尿酸+缺血缺氧组;MDL28170+1 200μmol/L尿酸+缺血缺氧组。采用DHE染色法与ELISA试剂盒测定心肌细胞中活性氧簇(ROS)水平,q-PCR法及Western blot检测心肌细胞中Calpain1、Calpain2、Calpastatin的表达情况。结果:高尿酸可明显增加缺血/缺氧状态下心肌细胞凋亡水平(P<0.05)。与单纯缺血/缺氧组相比,高尿酸显著增加了Calpain1/2的表达,明显抑制了Calpastatin的表达(P<0.05),同时显著增加了心肌细胞中ROS的水平(P<0.05),而在加入MDL28170干预后,心肌细胞的ROS水平及凋亡比例均有所降低(P<0.05)。结论:高尿酸通过激活Calpain所介导的氧化应激反应加重缺血/缺氧状态下心肌细胞凋亡。