Calreticulin通过诱导细胞EMT促进鼻咽癌迁移和侵袭

目的:观察钙网蛋白(calreticulin,CRT)在鼻咽癌组织中的表达并分析其临床病理学意义,揭示其对鼻咽癌CNE2细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法:S-P免疫组化法检测CRT在52例鼻咽癌组织和57例鼻咽部良性病变组织中的表达情况,并分析其临床病理学意义;构建特异性干扰CRT基因的小干扰RNA干扰载体,瞬时转染鼻咽癌CNE2细胞,观察CRT低表达对CNE2细胞形态的影响;Transwell迁移和侵袭实验检测CRT低表达对CNE2细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot检测CRT低表达对上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、转化生长因子-β(TGF-β)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)等EMT相关蛋白表达的影响。结果:CRT在鼻咽癌组织中的阳性表达率为82.69%(43/52),在鼻咽部良性病变组织的阳性表达率为19.29%(11/57),CRT在鼻咽癌组织中表达显著增高(P<0.05);CRT的阳性表达率与鼻咽癌分期及淋巴结转移呈正相关(P<0.05)。敲降CRT呈低表达后,CNE2细胞由梭形演变为扁平和鹅卵石样,且细胞排列紧密,细胞的迁移侵袭能力减弱(P<0.05)。敲降CRT呈低表达后,E-cadherin表达显著增高,vimentin、TGF-β以及MMP-9蛋白的表达降低(P<0.05)。结论:Calreticulin在鼻咽癌组织中表达显著增高,且与鼻咽癌临床分期及淋巴结转移呈正相关。Calreticulin可诱导鼻咽癌CNE2细胞发生EMT,进而促进鼻咽癌的迁移和侵袭。

钙网蛋白在子宫内膜癌中的表达及临床意义

目的:探讨子宫内膜癌中钙网蛋白(CRT)表达与子宫内膜癌生物学行为的关系。方法:选取2014年2月至2015年1月在中国医科大学附属盛京医院行手术治疗的50例子宫内膜癌组织标本(均为腺癌,术前均未接受放化疗),以及因宫颈CINIII、子宫脱垂等行全子宫切除术的30例正常子宫内膜组织。分别采取实时定量逆转录聚合酶链反应(Real-time PCR)检测CRT mRNA表达,免疫组织化学SP法及蛋白免疫印迹检测CRT蛋白表达水平。分析CRT表达量与子宫内膜癌临床病理学参数的关系。结果:子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织中CRT mRNA相对表达量分别为3.58±3.49和2.00±1.89,CRT蛋白相对表达量分别为0.50±0.19和0.20±0.12,差异均有统计学意义(P<0.05)。子宫内膜癌组织中CRT蛋白表达量与TNM分期和有无淋巴结转移有关(P<0.05),而与分化程度及有无肌层浸润无关(P=0.129)。结论:CRT蛋白在子宫内膜样腺癌中表达上调,且表达水平与子宫内膜样腺癌的生物学行为可能有一定关系。

稳定高表达人ERP57基因A549细胞株的建立及其对CRT表达的影响

建立稳定高表达人ERP57蛋白的A549细胞株,并观察对CRT表达的影响。采用巢式RT-PCR从人非小细胞肺腺癌A549细胞总RNA中克隆人ERP57 cDNA,构建ERP57真核表达质粒(pcDNA3.1(+)/ERP57)脂质体转染A549细胞。经G418筛选,获得高表达人ERP57蛋白的A549细胞株。通过Western blotting检测细胞中ERP57及CRT蛋白表达情况。成功获得稳定高表达ERP57蛋白的人A549细胞株,CRT表达量无明显改变。成功获得稳定高表达ERP57蛋白的人A549细胞株,证实细胞中高表达ERP57对CRT表达量无明显影响。

钙网蛋白在肿瘤中异常表达的研究进展

对于钙网蛋白(CRT)多方面的研究显示其在大部分种类的疾病中都有异常表达现象,尤其是肿瘤。该文就CRT异常表达与肿瘤发生、发展分子机制及其在不同肿瘤中的研究现状两方面阐述最新进展,总结近几年来CRT调控肿瘤生长的信号通路及在各种肿瘤中的表达情况,同时也期望能为CRT的异常表达与肿瘤关系的深入研究提供一些参考。

内质网应激诱导钙网蛋白膜转位促进肝癌细胞转移和侵袭

目的观察钙网蛋白（calreticulin，CRT）对内质网应激诱导的肝癌细胞转移和侵袭能力的影响。方法利用衣霉素刺激肝癌细胞SMMC-7721、HepG2建立内质网应激模型，用Western blot技术检测内质网应激指标免疫球蛋白结合蛋白（binding immunoglobulin protein，BIP）及钙网蛋白、MMP-9的表达，通过划痕实验、Transwell侵袭小室检测肝癌细胞转移和侵袭能力，并用小干扰RNA沉默钙网蛋白联合衣霉素处理后观察肝癌细胞转移、侵袭能力及MMP-9的表达。结果与阴性对照组相比，衣霉素处理肝癌细胞SMMC-772I及HepG2后BIP、细胞膜上钙网蛋白、MMP-9表达量增加，且转移和侵袭能力增加（P〈0．05）；沉默钙网蛋白联合衣霉素处理后，与衣霉素单独处理相比，沉默钙网蛋白联合衣霉素组肝癌细胞SMMC-7721及HepG2MMP-9表达量降低，且转移和侵袭能力降低（P〈0．05）。结论内质网应激诱导钙网蛋白发生膜转位增强肝癌细胞的转移和侵袭能力。

钙网蛋白在不同预处理心肌细胞缺血再灌注的保护作用

目的观察3种不同预处理对在体缺血再灌注心肌的保护作用，探讨钙网蛋白（CRT）在预处理心肌细胞缺血再灌注损伤的作用。方法将30只成年SD大鼠随机分成5组（n=6），分别为缺血再灌注组、缺血预处理组、腺苷预处理组、远程预处理组和假手术组。建立大鼠在体缺血再灌注损伤模型，观察各组缺血再灌注前后心功能变化，并检测再灌注末血清肌钙蛋白T（cTnT）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）的变化以及心肌组织CRT的表达。结果缺血预处理组、远程预处理组与缺血再灌注组比较（±dp／dt max）有明显提高（P〈0．05）。缺血预处理组、腺苷预处理组、远程预处理组cTnT、MDA值均低于缺血再灌注组，SOD值高于缺血再灌注组（P〈0．05）；腺苷预处理组SOD值高于缺血预处理组和远程预处理组，cTnT值则低于后2组（P〈0．05）；缺血预处理组、腺苷预处理组、远程组与缺血再灌注组比较，CRT表达灰度值均显著降低（P〈0．05）。结论腺苷预处理、远程预处理均可以模拟缺血预处理的心肌保护作用；预处理可能通过下调钙网蛋白高表达减轻在体大鼠心肌细胞缺血再灌注损伤。