耐冬山茶(Camellia japonica L.)花粉活力和柱头可授性研究

采用TTC法测定“长柱耐冬”、“深红皱瓣”、“花团锦簇”、“霜红”4个耐冬山茶品种的花粉活力和寿命，采用联苯胺-过氧化氢法测定4个耐冬山茶品种柱头的可授性。结果表明，‘深红皱瓣’花粉活力在开花期间显著优于‘长柱耐冬’、‘花团锦簇’、‘霜红’3个品种，4个品种的花粉寿命最长可达到37d。4个品种的耐冬山茶柱头在开花1～7d内均具可授性。在1～4d可授性较强，不同的耐冬山茶品种间存在一定差异。

山茶属华东山茶(Camellia japonica L.)研究进展

山茶属华东山茶(Camellia japonica)是我国的传统名花,从生殖生物学、细胞染色体、遗传多样性、育种方法、繁殖技术、化学成分、园林观赏价值、生态价值、食用、油用及药用价值等方面对华东山茶的研究进展进行综述,并对华东山茶未来的育种方向和开发前景进行展望。将现代分子育种与传统育种手段结合运用,同时进一步深入挖掘华东山茶的油用和药用价值并对其合理地开发利用是未来的主要发展方向。

山茶花花香成分鉴定及相关基因的转录组分析

为了探究山茶花品种香太阳、香妃和赤丹不同花期花瓣中的挥发性成分,采用顶空-固相微萃取(HS-SPME)和气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术,并结合相对气味活度值(ROAV)鉴定关键香气成分。通过转录组测序技术,探究山茶花花香生物合成途径及花香差异形成相关基因。结果表明,3个山茶花品种的主要花香成分由单萜和苯环型/苯丙素类化合物构成,单萜种类最多,品种间成分和含量有明显差异。共鉴定出16种特征香气成分,其中,芳樟醇为关键香气成分,对山茶花整体香气的表达起主控作用。从转录组数据中筛选出7个甲羟戊酸(MVA)途径结构基因和8个甲基赤藓醇磷酸(MEP)途径结构基因,其中CaDXS2、CaDXS3为单萜合成关键结构基因。筛选出萜类合成途径关键酶基因CaLIS/NES1和CaLIS/NES2及苯环型/苯丙素类化合物合成途径关键酶基因CaPAR和CaSAMT,推测上述基因在花香关键成分芳樟醇、2-苯乙醇和水杨酸甲酯的合成中发挥关键作用。对差异表达基因进行实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和RNA-seq验证,结果显示二者拟合度较高,因此认为RNA-seq测序结果具有较高的准确性。研究结果为山茶花花香形成机理研究提供了依据。

响应面法优化余甘子凝胶糖果的配方研究

本研究以余甘子果、山茶蜂花粉为主要原料,辅以甜味剂(山梨糖醇、赤藓糖醇)、稳定剂(卡拉胶、魔芋胶)、氯化钾制作凝胶糖果。在复合凝胶添加量、复合凝胶复配比、果粉浆添加量、果粉浆复配比、复合糖醇添加量、氯化钾添加量对凝胶糖果的影响共六个单因素实验的基础上,采用响应面(Response surface method,RSM)的中心复合实验法(Central composite design,CCD)设计实验,以凝胶糖果的感官评分为评价指标,确定凝胶糖果的最佳配方。结果表明,最佳配方为果粉浆100 mL(余甘子果肉∶山茶蜂花粉=12.5∶1,m/m),复合凝胶8 g(卡拉胶∶魔芋胶=1∶1,m/m),复合糖醇60 g(山梨糖醇∶赤藓糖醇=1∶1,m/m),氯化钾0.3 g。结合质构仪分析显示,该配方制作的凝胶糖果口感柔软细腻、有嚼劲、有弹性、色泽黄亮、外形良好,富有余甘子独特的风味。

山茶属植物的抗骨质疏松作用

目的:研究山茶属植物在等生药剂量下对大鼠实验性骨质疏松的拮抗作用,并对其活性进行比较。方法:W istar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、山茶和油茶不同提取物组及龙牡壮骨颗粒5 g/kg组。通过维甲酸造成大鼠实验性骨质疏松模型,再观察山茶和油茶不同提取物对骨质疏松大鼠股骨重量/长度(G/L)值、骨密度、无机物及骨钙含量、形态学改变和血清钙、抗酒石酸酸性磷酸酶(s-TRAP)、碱性磷酸酶(ALP)水平的影响,并在等生药剂量下对其作用强度进行比较。结果:各给药组同模型组比较:山茶子醇提物0.51 g/kg对G/L比值、骨密度有明显的提高作用;可明显提高血清钙和碱性磷酸酶水平,降低抗酒石酸酸性磷酸酶水平;形态学观察可见成骨细胞明显增多,破骨细胞明显减少;骨小梁明显向正常水平转化。山茶子醇提物抗维甲酸大鼠实验性骨质疏松作用最强,强于油茶叶醇提物及水提物,并强于阳性药。其余提取物抗骨质疏松作用不明显。各药物抗骨质疏松作用强弱顺序为:山茶子醇提物>油茶叶醇提物>油茶叶水提物>油茶子水提物>阳性药>山茶子水提物。结论:山茶属植物具有不同程度的抗骨质疏松作用,这为本属植物的进一步研究开发提供了重要的理论依据。

温室条件下不同品种山茶的光合特性

研究了温室内不同品种山茶 (CamelliajaponicaL .)的光合特性。结果表明不同品种山茶的光合特性相似 :光补偿点在 6 .7～ 8.4 μmol·m-2 ·s-1之间 ;光饱和光强 30 0 μmol·m-2 ·s-1左右 ;最大光饱和光合速率 4 .1～ 4 .8μmol·m-2 ·s-1;表观量子效率 0 .0 5 5～ 0 .0 75 ;羧化效率 0 .0 3～ 0 .0 4 ;光合作用的适宜温度在 15～ 2 5℃。据此推测山茶不喜强光 ,也不耐高温 ,认为山茶正常生长所需要的光照强度应控制在30 0 μmol·m-2 ·s-1左右 ,温度应控制在 15～ 2

山茶花叶片DNA提取及RAPD反应体系的研究

山茶花（Camellia japonica L.）是我国特产的名贵花卉之一,由于其品种繁多,在系统分类和品种鉴定上存在一定的难度.本研究针对山茶花的DNA提取方法和RAPD扩增体系进行了摸索,旨在为山茶花在DNA水平的分类鉴定和分子生物学方面研究打下一定的基础.实验采用改进的CTAB法提取山茶花叶片DNA,得到的DNA纯度较高,OD260/OD230值为1.90～2.0,OD260/OD280值为1.80～1.83,得率也较高,一般在150～200μg·g-1左右,片段完整性较好,大于20kb,符合分子遗传实验的要求;在山茶花RAPD扩增条件的研究中,发现20μL反应体系中加入100ng DNA、125 μmol·L-1dNTP（each）、1.2μmol·L-1Mg2＋、1×Buffer、0.5μmol·L-1引物、1 U Taq酶最为合适,退火温度一般设为37℃左右,扩增产物的电泳条带数多、清晰、明亮.

山茶种子抗骨质疏松有效部位群化学成分的含量测定

目的测定山茶种子抗骨质疏松有效部位群的化学成分。方法采用分光光度法测定山茶种子醇提物中总皂苷、多酚和鞣质以及总黄酮的含量。结果山茶醇提物中总皂苷含量12.2%、总酚含量为4.30%(其中鞣质占1.87%);总黄酮含量为4.07%。结论本方法简便、准确、稳定性好、重现性好。

山茶花氨基酸组成分析及营养价值评价

为开发山茶花资源及进一步了解山茶花的氨基酸组成分布及其营养价值,以山茶花的花瓣和叶片为材料,采用碱提酸沉法提取其粗蛋白,用盐酸水解后,用氨基酸自动分析仪对山茶花的氨基酸进行了分析,并通过氨基酸比值系数法对其营养价值进行了评价.结果显示:山茶花叶片中各种氨基酸的含量均高于花瓣,花瓣和叶片中氨基酸总量的质量分数分别为12.66%和32.01%,其中人体必需氨基酸种类齐全,占氨基酸总量的45.73%和43.55%,且组成比例符合世界卫生组织(WHO)/联合国粮农组织(FAO)推荐的必需氨基酸模式;此外,在山茶花的花瓣和叶片中,药效氨基酸的含量分别达到氨基酸总量的63.82%和64.64%,鲜味氨基酸含量分别达到氨基酸总量的23.14%和25.09%,花瓣和叶片的氨基酸比值系数分(SRC)分别为63.1和63.7,第一限制氨基酸均为蛋氨酸+半胱氨酸.表明山茶花蛋白质有较高的营养和药用价值,开发前景广阔.

二次通用旋转试验设计优化山茶花红色素提取的工艺

采用二次通用旋转试验设计,对山茶花红色素的提取工艺进行优化,建立色素提取率与提取温度、液料比、提取时间的二次回归数学模型,并利用该模型探讨各因素对色素提取率的影响。结果表明:各因素对色素提取率作用大小依次为:提取时间>液料比>提取温度,色素的最优提取工艺为:提取温度为40℃,液料比为15:1,提取时间为20min。

山茶花花色苷的稳定性研究

山茶花花色苷是一种重要的天然色素资源,由于稳定性较差,限制了其广泛应用。以山茶花为材料,用1%盐酸/甲醇提取花色苷,探讨了光照、金属离子和食品添加剂对山茶花花色苷稳定性的影响。结果表明:山茶花花色苷对光线、铁离子、铝离子、过氧化氢比较敏感,镁离子和钙离子对其稳定性有一定影响,而锌离子和铜离子对其影响不明显。亚硫酸钠、山梨酸钾、柠檬酸、维生素C和蔗糖对山茶花花色苷有一定的保护作用。

山茶花红色素的提取工艺研究

以山茶花为材料,通过其溶解性、不同pH值下颜色的变化和最大吸收波长进行初步定性,通过提取温度、提取时间、提取次数和液料比进行提取工艺的研究。结果表明:山茶花红色素为一种花色苷色素;该色素的提取工艺参数为:液料比10:1,提取次数3次,提取时间15min,提取温度40℃。

耐冬山茶孢粉学研究

对耐冬山茶花粉形态进行比较研究,可以为探索山茶属植物的演化、系统分类以及耐冬山茶的品种分类提供孢粉学依据。通过用扫描电镜对耐冬山茶18个品种及3个南方山茶品种的花粉形态进行观察分析,结果如下:耐冬山茶花粉粒为腰鼓形或长球形,极面观为近三角形或三裂圆形,具三孔沟,从表面看内孔不显著。外壁两层,外层厚于内层。花粉粒表面纹饰大多为蠕虫状,亦有拟蠕虫状或拟网状。脊间或网纹间具穿孔和穴,有的脊上有较明显横向波状纹,穿孔和穴的形态及数量品种间有差异。花粉粒形态可以做为耐冬山茶品种分类的依据之一,耐冬山茶和南方山茶品种花粉形态存在较大的差异。

3个山茶花变异品种的形态鉴定和RAPD分析

采用形态观察和描述方法,结合RAPD分子标记技术,对山茶花(Cam ellia japonicaL.)3个栽培变异新品种“华美红”、“花绯爪芙蓉”和“玉丹”的形态特征和遗传差异进行了分析,并与其相应的原品种“美国大红”、“绯爪芙蓉”和“粉丹”进行了比较.结果表明,3个山茶花变异品种在形态特征上,特别是在花型、花色上与原品种具有显著的差别,并且后代性状表现稳定.在RAPD扩增中,筛选出了3个有效引物,共扩增出29条带,其中15条具有多态性,特别是引物S1和S4,其多态性带对于每个品种都有差异,能较好地说明变异品种与原品种间的遗传关系.

一种适用于RAPD分析的微量山茶DNA提取方法的建立

为建立一种满足RAPD-PCR分析的简便且高产率微量山茶基因组DNA提取方法,探索了在无液氮条件下,采用简化试验步骤的改良CTAB、SDS和Triton X-100方法分别提取山茶新鲜和干燥叶片DNA,通过光谱扫描和测定DNA在波长230 nm,260 nm和280 nm时的吸光度,比较不同DNA提取方法、材料保存方法以及材料用量对DNA提取效率的影响。结果表明,干燥叶片比新鲜叶片更适合作为DNA提取材料,改良CTAB法在提取干燥山茶DNA时纯度和产率较理想,其A260/A280值为1.595-1.736,每克叶片可得到230-295μg DNA,高质量DNA经RAPD-PCR扩增可获得清晰扩增条带。100 mg干燥山茶叶片适合获得高纯度和高产率的DNA,增加材料用量可增大DNA总量,但也增加了DNA中杂质含量。

耐冬山茶叶结构与耐寒性关系研究

对18个耐冬山茶品种的叶结构进行了比较解剖研究,测定了其半致死温度,探讨了叶片结构与耐寒性的关系。结果表明:叶肉组织中栅栏组织所占的比例越大,栅栏组织与海绵组织的比值越大,品种耐寒性越强,反之亦然。叶肉组织结构及其比例关系可作为不同品种抗寒性的形态结构指标。耐冬山茶各品种的半致死温度介于-13.1^-17.6℃之间。

耐冬山茶叶组织结构与品种分类研究

对14个耐冬山茶品种的叶组织结构进行了比较解剖研究,探讨了叶组织结构与品种分类的关系.结果表明,耐冬山茶叶表皮、气孔、栅栏组织、海绵组织、晶细胞等可以作为品种分类的依据.

重庆南山夏季主要生态因子动态及川山茶叶片耐热反应研究

对重庆南山植物园山茶园树体周围的3个主要生态因子(温度、湿度、光照强度)在8月份的变化情况进行了动态观察,从叶部的形态变化系统记录了30个川山茶品种在8月份的热害生态反应特征.结果表明:川山茶大多数品种叶片都受到不同程度的热害,上中旬最热,是集中受害的时间,下旬逐渐降温,树体开始恢复,少数品种在下旬才表现出热害;耐热能力较强的品种是"重庆红"、"川玛瑙"、"吊钟茶"、"红六方"、"牡丹茶"、"三学士"和"十八学士",没有发生热害;中等耐热能力的品种是"小红莲"、"怒春红"、"绒团茶"等14个品种;对热中等敏感的是"紫金冠"、"白玉片"、"红海螺"和"七心白";对热敏感的品种是"花洋红"、"花五宝"、"小桃红"、"焦渴鱼血牡丹"和"七心红",没有整株热死的现象.认为川山茶具有较强的耐热性,重庆南山保存川山茶资源较为适宜.

两个山茶品种光合荧光参数日变化对春季低温的响应

为了了解山茶在低温下光合作用的机理及其耐寒性,在室外自然低温条件下,测定了抗寒性不同的2个山茶品种("Red Aurora"抗寒性高于"April Pink")光合和荧光参数的日变化,并对其进行比较。结果表明:2个山茶品种叶片的净光合速率日变化均呈双峰曲线,具有明显的"午休"现象。山茶品种Red Aurora光合午休是受非气孔因素的影响,而April Pink光合午休既受气孔限制方面的影响,也受非气孔限制方面的影响;2个山茶品种的净光合速率与气孔导度和蒸腾速率呈极显著正相关,与胞间CO2浓度呈极显著负相关;2个山茶品种在春季低温下均不同程度地发生光抑制,随着白天温度升高和光照时间的延长,Red Aurora光抑制现象得到一定程度的恢复,而April Pink基本没有恢复。2个品种PSⅡ电子传递量子效率,光化学淬灭系数都表现出"升高-降低-升高"波动的变化趋势,Red Aurora的变化幅度大于April Pink。与抗寒性弱的April Pink相比,Red Aurora具有较强的光能利用能力和避免强光低温伤害的能力。

耐冬山茶野生资源保护与利用

对耐冬山茶野生资源状况调查研究结果表明,目前耐冬山茶的野生分布区仅剩长门岩岛、大管岛和崂山顶三处,共有植株506株,生存环境受到极大破坏。由于近年来的保护,残存野生植株生长状况良好。