弄岗金花茶与金花茶种间杂交F_(1)代表型性状遗传分析

为了研究金花茶观赏性状的遗传与变异特性,以弄岗金花茶(Camellia longgangensis)和金花茶(Camellia nitidissima)杂交获得的F1代群体为研究对象,对亲本和F1代植株花径、花冠高度、花瓣数量、株高、地径等9个性状进行统计分析。结果表明:杂交F_(1)代表型变异系数的变异范围为4.09%~32.01%;F_(1)代植株在亲本花色遗传上,倾向于双亲中间色;在花期遗传上,更倾向于母本;杂交子代的花径、花瓣长、花瓣宽、株高、地径、叶长、叶宽平均值均大于中亲值,具中亲值优势;花瓣长、地径、叶宽平均值均超过高亲,具高亲值优势。相关性分析发现,花径与叶长呈极显著负相关;花冠高度、花瓣宽、叶宽与叶长呈极显著正相关,花瓣长与花瓣宽呈极显著正相关。这些遗传趋势和特点,对金花茶的进一步育种工作有重要的指导作用。

金花茶多酚制备、成分分析及其体内外抗氧化活性分析

为了探究金花茶多酚最佳提取工艺条件及纯化后总多酚成分及体内外抗氧化活性分析。本研究以金花茶为原料,在单因素实验的基础上,设计响应面试验,筛选超声功率、提取温度、乙醇浓度和料液比最佳提取参数。采用Lx-8型大孔树脂对提取物进行纯化,并以高效液相色谱法对5种多酚单体化合物进行定性定量分析,随后对提取物进行体内外抗氧化实验。结果表明,最优工艺条件为超声功率290 W,提取温度35℃,乙醇浓度55%,料液比1:30 g/mL,在此条件下,金花茶多酚得率为3.53%,茶多酚纯度为63.73%。5种多酚单体化合物没食子酸、绿原酸、表儿茶素、芦丁、鞣花酸含量分别为0.47、11.18、59.03、18.34、16.41 mg/g。体外抗氧化实验结果表明,金花茶花多酚能够有效清除DPPH自由基、ABTS+自由基和超氧阴离子自由基,其IC50值分别为0.38、0.16、0.39 mg/mL。此外,金花茶多酚还能够通过显著提高线虫体内SOD酶活力及降低MDA含量,有效增强秀丽隐杆线虫对氧化损伤的抵抗力。

基于TLR-4/NF-κB信号通路探究金花茶提取物对非酒精性脂肪肝的作用

探讨金花茶提取物对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)大鼠模型的改善作用及其机制。随机选取10只SD大鼠为空白组,剩余50只则灌服高糖高脂乳剂复制非酒精性脂肪肝模型,14 d后造模大鼠按血清中总胆固醇(TC)水平随机分为模型组、辛伐他汀组(8 mg/kg)及金花茶高、中、低剂量组(260、130、65 mg/kg)。分组后连续给药6周,于末次给药前进行口服葡萄糖耐量试验(OGTT)并计算血糖曲线下面积(AUC),末次给药后采集血清及肝组织,检测血脂指标总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)及游离脂肪酸(FFA),肝脂指标TC及TG,肝功能指标谷丙转氨酶(ALT)及谷草转氨酶(AST),肝脏脂质过氧化指标丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD);测定大鼠血清炎症因子指标白介素6(IL-6)、白介素8(IL-8)及肿瘤坏死因子(TNF-α);检测血清胰岛素(FINS)并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);HE染色法观察肝脏病理形态学变化并进行非酒精性脂肪肝病活动度积分(NAS)评分;测定肝组织中Toll样受体4(TLR-4)和核因子κB(NF-κB)的基因及蛋白的表达。结果表明:与模型组相比,金花茶药物组AUC、HOMA-IR及血清中FINS、TG、TC、LDL-C、FFA、ALT、AST、IL-6、IL-8、TNF水平显著降低(P<0.05),HDL-C水平明显升高(P<0.05);肝组织TG、TC、MDA中含量显著降低(P<0.05),SOD活性显著升高(P<0.05);肝脏脂肪肝病样变减轻,肝细胞形态异常及炎症浸润明显改善,NAS评分显著下降(P<0.05);TLR-4、NF-κB蛋白及mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05),其中以金花茶高剂量的改善效果最佳。综上所述,金花茶提取物可通过TLR-4/NF-κB信号通路来调节糖脂代谢紊乱,降低炎症反应和减轻炎症浸润,改善NAFLD大鼠肝脏病变。

金花茶花活性组分成分分析及抗炎作用

以金花茶花为研究对象,通过对其提取物及分离组分的活性成分进行分析比较,结合小鼠耳肿胀实验优选最佳抗炎的活性组分。该实验利用超声辅助提取工艺制备金花茶花提取物(Camellia nitidissima Chi flower extract,CNFE),并经XAD1600大孔树脂分离洗脱,依次得到水洗组分(CNFE.A)、30%(体积分数)乙醇组分(CNFE.B)、70%乙醇组分(CNFE.C)和95%乙醇组分(CNFE.D),并测定上述5个组分中总黄酮、总糖、总酚和总皂苷的含量。同时以雄性昆明小鼠为研究对象,通过二甲苯致小鼠耳肿胀模型来考察上述5个组分的抗炎作用。结果表明,CNFE中活性成分主要是黄酮类化合物和糖类化合物,含量分别为(37.20±4.70)g/100 g和(34.97±4.30)g/100 g。在二甲苯致小鼠耳肿胀实验中,CNFE对二甲苯致小鼠耳肿胀有显著抑制作用(P<0.05),抑制率为34.01%,CNFE.B对小鼠耳肿胀有极显著的抑制作用(P<0.01),抑制率为61.79%,并能够减少炎症细胞的浸润和显著降低血清中IL-6、IL-1β、TNF-α的分泌,其抗炎效果还优于吲哚美辛。金花茶花提取物中主要是黄酮类化合物,具有一定抗炎作用,30%乙醇洗脱组分为最佳抗炎组分。

基于网络药理学和生物信息学分析金花茶花抗乳腺癌的药效物质基础及潜在机制

目的:基于网络药理学和生物信息学手段,研究金花茶花抗乳腺癌的药效物质及可能机制。方法:通过检索文献和Swiss TargetPredition数据库收集金花茶花的活性成分和相应靶标,从DisGeNET、TTD、DrugBank、GEO和TCGA数据库获取乳腺癌相关靶标。使用ClusterProfiler包进行GO功能和KEGG通路富集分析。通过Cytoscape数据库构建PPI网络,经拓扑分析及预后价值分析筛选出核心成分和关键靶标。最后利用AutoDock Vina对核心成分和关键靶标进行分子对接。结果:通过匹配获得潜在靶标109个,对应36个活性成分,拓扑分析筛选出6个核心成分。GO分析和KEGG富集分析表明,金花茶花通过PI3K-Akt、MAPK、Ras和Rap1等信号通路富集发挥抗乳腺癌作用。生存分析获得11个关键靶标(ESR1、VEGFA、CASP3、SRC、ERBB2、MDM2、PI3KCA、PGR、PPARG、AR、MMP9)。分子对接结果表明,金花茶花核心成分与关键靶标蛋白具有良好的结合作用。结论:该研究初步揭示了金花茶花抗乳腺癌的药效物质、作用靶标和潜在机制,发现其作用是多成分、多靶点、多途径的,为今后的分子生物学实验奠定了基础。

金花茶粉添加量对馒头品质及抗氧化性的比较分析

为探究小麦粉中添加金花茶粉对馒头品质及抗氧化活性的影响,以不同质量分数的0%、1%、2%、3%、4%的金花茶粉制作馒头,研究其对馒头面团特性、水分、膨胀度、比容、质构、色泽、感官、微观结构及其抗氧化性的影响。试验结果表明,随着金花茶粉添加量的增加,面团弹性模量G'始终大于粘性模量G'',tanδ值始终小于1,表现出较好的弹性性能。馒头水分含量先升后降,变化幅度0.8%。添加1%金花茶粉的膨胀度、质构特性最高(硬度40.41 N,弹性1.46 mm,咀嚼性25.10 MJ)。随着金花茶粉添加量增多馒头亮度呈显著下降趋势(P<0.05),颜色加深。金花茶粉添加量在1%~2%时馒头的风味显著提高(P<0.05)。随着金花茶粉的添加,面团面筋结构由连续到断裂,由密集到空洞,内部空间结构遭到破坏。在抗氧化活性方面,DPPH自由基清除能力、还原能力和ABTS^(+)自由基清除能力随着金花茶粉添加量增多显著提高,与对照组相比分别提高了63.33%、40.4%、59.57%。综合分析添加1%~2%金花茶粉对馒头品质就有一定改善。该研究结果为金花茶粉应用于馒头,提高其品质及营养价值,开发金花茶食品提供一定的参考。

不同预处理对金花茶种子发芽的影响

为寻找一种能有效促进金花茶种子发芽的方法,通过采用破裂种壳、去壳、热水浸泡、氢氧化钠浸泡以及热水浸泡结合赤霉素浸泡5种不同的方法处理金花茶种子,观察并测定以上5种方法对金花茶种子的发芽势和发芽率的影响。结果表明:50℃热水浸种30 min结合100 mg/L赤霉素浸泡4h处理效果最好,其发芽率达93.33%;其次为去壳处理,发芽率为81.67%;50℃热水浸种30 min处理、破壳处理和2%氢氧化钠浸泡30 min处理发芽率分别为78.33%、75.00%和73.33%。综合考虑,50℃热水浸种30 min结合100 mg/L赤霉素浸泡4 h处理是促进金花茶种子发芽的较好方式。

干旱胁迫对金花茶幼树生理特性的影响

以盆栽控水法对3年生金花茶幼树进行干旱胁迫,研究金花茶幼树各项生理指标的变化,结果表明:(1)轻度干旱胁迫即能引起金花茶叶片净光合速率(Pn)的下降,但土壤相对含水量降至20%并时未对3年生金花茶幼树成熟功能叶的光合系统造成不可逆的损伤;(2)轻、中度胁迫下,3年生金花茶幼树叶片相对含水量(LRWC)仅小幅降低,丙二醛(MDA)、叶绿素(Chl)、叶绿素a/b(Chl a/b)、可溶性糖(SS)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性与CK相比无显著差异,过氧化物酶(POD)活性在中度胁迫时较CK显著提高,类胡萝卜素(Car)含量在轻度胁迫15d时较CK显著提高,脯氨酸(Pro)含量在胁迫初期较CK显著提高,可溶性蛋白(SP)在轻度胁迫15d时较CK显著提高;(3)重度胁迫下,3年生金花茶幼树叶片除Car以外的各项生理指标均较CK有显著变化。说明轻、中度干旱(土壤相对含水量40%~65%)对金花茶幼树成熟叶的生理影响较小,重度干旱(土壤相对含水量20%~25%)对金花茶幼树成熟叶的各项生理指标影响较大。因此,在金花茶幼树栽培中应制定合理的水分管理措施,当土壤相对含水量低于25%时应及时补充水分,避免持续重度干旱造成严重影响。

重组孕激素受体基因酵母法对南山茶子拮抗孕激素作用的研究

目的研究南山茶子拮抗孕激素作用。方法用系统溶剂分离法将南山茶子醇提物分成极性不同的组分,利用重组人孕激素受体基因酵母生物检测法筛选南山茶子拮抗孕激素活性部位。结果5个组分都表现出拮抗孕激素的效应,活性强弱依次为醋酸乙酯层>正丁醇层>石油醚层>水层>醇提物。结论醋酸乙酯部位可能为南山茶子拮抗孕激素的活性部位。

金花茶遗传多样性的ISSR分析

采用ISSR分子标记对金花茶的4个自然分布居群的126份样品的遗传多样性水平进行了研究。用12条引物,共检测到105个清晰的扩增位点,其中多态性位点79个,多态位点百分率(PPB)为75.24%。采用POPGENE软件进行分析,结果表明:居群总的Nei's基因多样性指数为0.2302,Shannon信息多态性指数为0.3502,金花茶总的遗传多样性水平较高。但金花茶居群内的遗传多样性相对较低。基因分化系数为0.5752,遗传变异主要存在于居群间。用NTSYS软件对样品进行UPGMA聚类分析,结果4个居群的样品各自聚在一起,而金花茶两间断分布区区内的居群又各自聚在一起。金花茶4个居群间的遗传距离与地理距离呈显著的正相关(r=0.68261,P=1.0000)。

金花茶化学成分研究

利用色谱法和波谱法对金花茶(Camellia nitidissima Chi)的化学成分进行分离和结构鉴定。结果从金花茶中分离出3种化合物,分别为芦丁、Apigenin 6,8-di-C-β-glucopyranoside、肌醇。其中芦丁和Apigenin 6,8-di-C-β-glucopyranoside为黄酮类化合物。

金花茶对低温胁迫的生理响应及耐寒性分析

为探究金花茶幼苗对低温胁迫的生理响应及其耐寒性,本研究以2 a生金花茶幼苗为材料,进行6^-9℃低温胁迫处理,测定了细胞伤害率(CIR)、丙二醛(MDA)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、束缚水(BW)/自由水(FW)、脯氨酸(Pro)、可溶性糖(SS)等指标,并进行了低温半致死温度(LT50)和抗寒生理指标相关性分析。结果表明,3~12 h的低温LT50为-6.62^-3.94℃,且随着时间的延长而升高。随着温度的降低,CIR、SS含量及POD、CAT活性总体呈上升趋势,BW/FW、MDA、Pro含量呈先上升后下降趋势,SOD活性总体呈下降趋势;随着胁迫时间的延长,CIR含量呈上升趋势,3^-9℃的SOD活性、0^-9℃的POD活性、-6^-9℃的BW/FW比值呈下降趋势,6^-6℃的SS含量变化较小,-9℃的SS含量呈下降趋势。相关性分析表明,CIR可作为耐寒性鉴定的主要指标,BW、SS、SOD、POD、CAT可作为辅助指标。本研究结果为金花茶引种区域和耐寒性鉴定指标的确定提供了理论依据。

金花茶FLS基因的克隆及其植物表达载体的构建

利用RT-PCR和RACE技术,从我国珍稀濒危植物金花茶花瓣中获得了黄酮醇合成酶(Flavonol synthase,FLS)基因的cDNA全长,命名为CnFLS,GenBank登录号JF343560.1。根据该基因序列设计全长扩增引物P3/P4进行PCR扩增,将扩增产物插入PMD18-T载体并转化克隆菌株DH5α,提取质粒DNA酶切鉴定,通过酶切连接的方法将该基因与改造后的pCAMBIA1300表达载体连接,成功构建了该基因的正义表达载体pCAM-CnFLS。根据该基因的保守序列设计了含有酶切位点的特异引物G1/G2,扩增出250 bp的干扰片段并将其克隆到PMD18-T载体,在中间载体pUCCRNAi及表达载体pCAMBIA1300的基础上,通过多次酶切连接,成功构建了金花茶FLS基因的干扰表达载体pCAMRNAi-CnFLS。金花茶正义及干扰植物表达载体的成功构建,为进一步研究该基因的功能及其对花色的调控效应奠定了基础。

核磁共振法测定广宁红花油茶含油率研究

探讨了种仁含水量、颗粒大小和样品量对核磁共振法测定广宁红花油茶种仁含油率结果的影响,并与索氏抽提法的测定结果进行比较,同时讨论了核磁共振法的精密度和稳定性。结果表明,种仁含水量、颗粒大小和样品量对种仁含油率测定有一定影响,测定时样品需烘至恒重,如无特殊要求,样品不需要粉碎,样品量范围为8～11 g;同一样品核磁共振法得到的含油率高于索氏抽提法,但两种方法间的绝对偏差小于2%;核磁共振法的测定精密度和稳定性好,可用于广宁红花油茶种仁含油率的快速测定。

广宁红花油茶花粉性状及授粉特征

为阐明广宁红花油茶授粉特性,提高其产量和效益,采取野外实地调查与实验室观测相结合的方法,研究了其花粉数量、活力、储藏条件、柱头可授性及辅助授粉效果。结果表明：（1）广宁红花油茶单枚花药花粉数在3 120~12 460粒之间,平均值为6 877粒;单花花粉数量随其花药花粉量增加而增加,在792 200~3 468 400粒之间,平均值为2 102 250粒。（2）花药多在开花第1天开始散粉,开花当天花粉活力随时间进程呈上升趋势,第2天达到最大值,前3 d花粉活力都在80%以上。而柱头可授性在花后第2天达到最大值,2~3 d是柱头可授性最强的时期,即最佳授粉时间。（3）花粉的最佳贮藏方式是-80℃处理,60 d内其活力仍保持在80%以上。（4）在自然授粉条件下,其结实率较低,自花结实率为3.26%;经过人工异株授粉后,结实率提高近2倍。

广宁红花油茶树体性状遗传变异特征

为了选育广宁红花油茶优良品种,采用林分样地调查和标准株法,对广宁红花油茶集中分布区内树体各性状的遗传变异特征进行了系统研究。结果表明:广宁红花油茶树体各性状表型变异十分丰富。在个体间,各营养器官性状按照变动系数由大到小排列依次为分枝数、枝梢长、新枝数、胸径、枝叶间距、叶缘锯齿、树高、叶柄长、枝叶数量、叶宽、叶厚、叶长、叶长宽比,枝条和叶片性状在个体间的差异达到极显著水平。在个体内,按照变动系数由大到小排列其顺序依次为新枝数、枝长、枝叶间距、枝叶数量、叶柄长、叶缘锯齿、叶宽、叶长宽比、叶长、叶厚。在个体间,花器官性状按照变动系数从大到小排列依次为花冠幅、雄蕊数、花瓣宽、花瓣长、花萼数、雄蕊群直径、花柱长、柱头裂数、雄蕊群总长、花瓣数;在个体内,其顺序依次为花冠幅、花瓣宽、花瓣长、花萼数、雄蕊数、柱头裂数、花瓣数、雄蕊群直径、花柱长、雄蕊群总长。

山茶科的系统发育诠析——Ⅱ.金花茶的分类特征

金花茶Camellia nitidissima Chi(C.chrysantha Tuyama)与C.petelotii(Merr.)Sealy 是2个差异很大不相关联的种,表现在二者的叶片大小,叶缘的齿式深浅,花柄长度与其附着的苞片数目多少,花的颜色,花瓣的数目及形状和先端分裂与否,苞片及萼片同样还有花瓣是否具有毛被,都十分悬殊,因此,这2个种是不能混同的.

广宁红花油茶花芽分化特征

为掌握广宁红花油茶花芽分化特征,以广宁红花油茶为研究对象,对其花芽分化过程的解剖形态变化、外观形态变化和含水率变化进行了观察。结果表明:(1)广宁红花油茶花芽分化期可分为前分化期、萼片形成期、花瓣形成期、雌雄蕊形成期、子房与花药形成期、雌雄蕊成熟期6个时期,不同时期内部形态特征变化明显;(2)广宁红花油茶花芽于4月下旬开始进入分化阶段,于9月下旬完成分化,历时150 d左右;(3)花芽长宽比大小变化特征与不同分化期存在一定对应联系,在整体上是先由大变小,再变大;而花芽含水率则在分化期内整体上呈上升趋势。

缺素对广宁红花油茶幼苗生长的影响

试验设置全素(control)、缺氮(-N)、缺磷(-P)、缺钾(-K)、缺钙(-Ca)、缺镁(-Mg)、缺硫(-S)7个处理,对广州红花油茶幼苗进行缺素施肥试验,通过测定苗高、地径、叶面积以及叶周长等指标,探究不同缺素处理对广宁红花油茶苗期生长的影响。结果表明:(1)-N处理对广宁红花油茶幼苗苗高和地径影响最大,表现为抑制作用;(2)各缺素处理对广宁红花油茶苗高影响顺序为:-N>-Ca>-K>-Mg>-S>-P,对地径影响大小顺序为:-N>-S>-Ca>-Mg>-P>-K;(3)缺素处理对幼苗叶片影响并不显著。

金花茶成分及药理作用研究进展

金花茶为广西壮族传统用药和新资源食品,含有黄酮、多糖、皂苷、茶多酚、挥发油、氨基酸、矿质元素等成分,具有抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、降血糖、降血脂和抗过敏等作用,并被开发成茶、饮料、日化用品和药物等。本文对金花茶成分及药理作用研究进展进行综述,为有效开发和利用金花茶提供参考。