空肠弯曲菌肠毒素间接ELISA检测法的建立

通过对 Ｃ Ｅ 的３ 种检测方法的比较研究，证实间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 是检测 Ｃ Ｅ 最为敏感、简便、快速的方法，在２４ｈ 内即可得到结果。 Ｃ Ｈ Ｏ 法也较敏感，但要求较高。大鼠肠袢试验虽然操作繁杂，却是传统的肠毒素检测法，结果更具说服力。中和试验表明，抗 Ｌ Ｔ 血清可完全中和 Ｃ Ｅ的毒性。

空肠弯曲菌肠毒素理化特性的研究

经ＳＤＳＰＡＧＥ 分析发现，空肠弯曲菌细胞紧张性肠毒素（Ｃｙｔｏｔｏｎｉｃ ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ ，ＣＥ） 的硫酸胺盐析粗提物除有一条６８ｋＤ 的带外，还有一些未分开的小分子物质，而经神经节苷脂ＧＭ１ 亲和层析后仅有６８ＫＤ 的一条带，即表明６８ｋＤ 的蛋白质为ＣＥ 的主要成分。ＣＥ 不耐热、ｐＨ 依赖和对胰酶有抗性。５６ ℃和６０ ℃加热３０ｍｉｎ 、１００ ℃加热１５ｍｉｎ 即可完全失活。其活性在ｐＨ６－０ 时最高，在ｐＨ３－０ 和９－０ 时均可使其完全丧失活性。在４ ℃保存超过３ｄ 后，其活性迅速降低。抗ＬＴ 血清能完全抑制ＣＥ 的活性。

空肠弯曲菌产肠毒素性的研究

通过间接ELISA法和CHO细胞法对 2 86株空肠弯曲菌产生细胞紧张性肠毒素 (Cyto tonicEnterotoxin ,CE)的检测 ,CE的检出率分别为 2 4 5%和 12 2 % ,间接ELISA法的敏感性明显高于CHO细胞法 (P <0 0 0 1) ,并且特异性较高 ,即证实间接ELISA法是检测CE的特异、敏感、简便的方法。以间接ELISA法检测 ,来自健康蛋鸡、健康后备蛋鸡、腹泻死亡后备蛋鸡、腹泻后备蛋鸡、腹泻死亡仔猪、腹泻仔猪、健康羔羊和腹泻患者菌株的CE检出率分别为 18 8% (12 /6 4 )、12 .5% (1/8)、4 4 .8% (30 /6 7)、2 1 2 % (11/52 )、12 .5% (1/8)、18.8% (15/80 )、0 .0 % (0 /6 )和 0 .0 % (0 /1)。本研究结果分析表明 ,不同来源的菌株在CE产生上有差异 ,CE产生与该菌生物型之间没有相关性 (P >0 5) ,CE产生与鸡的腹泻发生相关 (P <0 0 5) ,并且空肠弯曲菌检出率与CE检出率间呈正相关。

空肠弯杆菌肠毒素细胞检测法的建立

中国仓鼠卵巢细胞（ＣＨＯ），非洲绿猴肾细胞（Ｖｅｒｏ），人宫颈癌细胞（Ｈｅｌａ）和乳仓鼠肾细胞（ＢＨＫ－２１）４种细胞对空肠弯杆菌（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒｊｅｊｕｎｉ）细胞紧张性肠毒素（ＣｙｔｏｔｏｎｉｃＥｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ，ＣＥ）的敏感性试验表明，ＣＨＯ细胞对ＣＥ敏感；ＣＨＯ细胞与大鼠肠袢试验比较检测ＣＥ，以ＣＨＯ细胞对ＣＥ最敏感；试验发现布氏肉汤对细胞有毒性作用，确定了以Ｍ１９９＋１０ｇ／Ｌ胰蛋白胨培养基进行空肠弯杆菌产生ＣＥ的培养方法，依次建立了ＣＥ的ＣＨＯ细胞检测法。

空肠弯曲菌肠毒素产生最佳培养条件的研究

通过对Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ产生ＣＥ的最佳培养基及多粘菌素Ｂ、Ｆｅ３＋ 、培养温度、培养时间、传代次数影响ＣＥ 产生的研究，确定了Ｍ１９９＋ Ｔ（胰蛋白胨１０ｇ／Ｌ）＋ ＡＡ（２．５ｇ／Ｌ的Ｌ－丝氨酸、Ｌ－谷氨酸）＋ ＦｅＣＬ３（０．７５ｍ ｇ／Ｌ）是产生ＣＥ的最佳培养基，３７℃微需氧培养４８ｈ 是产生ＣＥ的最佳培养条件。同时，还发现Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ传代５ 次以上，产生ＣＥ的能力下降，因此用于ＣＥ检测的菌株传代不得超过４ 代。

空肠弯杆菌研究现状

空肠弯杆菌是一种人兽共同感染的病原菌,也是导致腹泻最常见的病菌,主要症状是发热和急性肠炎。主要从病原的生物学特征、肠毒素的研究、人畜带菌率及流行病学的研究现状进行综合讨论。