白念珠菌支气管肺感染大鼠肺组织Toll样受体2和IL-10的表达及意义

目的建立大鼠白念珠菌支气管肺感染模型,观察感染后肺Toll样受体2(TLR2)和IL-10水平的变化,探讨TLR2和IL-10在念珠菌支气管肺感染中的作用及意义。方法建立白念珠菌支气管肺感染大鼠模型,观察感染后肺病理学改变,用免疫组化法检测感染后3 d、7 d肺组织TLR2的表达,应用ELISA法测定肺组织匀浆上清液中IL-10的水平。结果感染后肺组织TLR2和IL-10的水平较对照组比较显著升高(P<0.05),且IL-10随着感染的进程,有升高趋势(P<0.05);但两指标之间无显著统计学相关性(P>0.05)。结论白念珠菌支气管肺感染后肺组织TLR2和IL-10水平升高,可能参与白念珠菌感染的发生和炎症的加重。

念珠菌类细菌样变异株形态学特征

目的 研究念珠菌发生类细菌样变异后菌落及菌体形态的变化特征.方法 将白色念珠菌标准菌株用抗真菌药物诱导、置于不同环境下一定的时间、传代条件下培养获得的念珠菌类细菌样变异株以及从患者临床标本中分离的念珠菌类细菌样变异株进行培养、革兰染色和观察菌落与菌体形态.结果 念珠菌极易发生类细菌样变异,变异后菌落可产生黏液、红色、橘色、黄色等色素; 即使同一株菌传代可同时得到大小不等、颜色和形态不同的菌落,同一菌落内可见形态不同的菌体.变异株经革兰染色可呈革兰阳性或阴性球菌状、杆菌状、类芽孢菌状及分枝菌状.这些念珠菌类细菌样变异株在适宜的实验室条件下或动物体内可恢复成典型的念珠菌.但这种返祖有不稳定性,在一定条件下又可恢复成类细菌样变异体.结论 临床常用唑类抗真菌药物、生长微环境改变、体内某些因素极易诱发念珠菌发生变异,变异后念珠菌无论菌落和菌体形态可发生类细菌样改变,失去念珠菌固有的菌落、菌体特征,容易造成实验室在诊断念珠菌感染时的误诊和漏诊.

白色念珠菌ALS基因家族在生物膜形成过程中的差异表达

目的:研究白色念珠菌凝集素样粘附素(agglutinin-like sequence,ALS)基因家族成员在生物膜形成过程中的表达。方法:构建白色念珠菌标准株ATCC 10231和ATCC 90028体外生物膜模型,在生物膜形成的早期、中期和成熟期分别提取总RNA,应用半定量RT-PCR检测8个ALS基因的表达情况。结果:在生物膜形成的整个过程中,ALS1、ALS2、ALS3和ALS5持续高表达,是主要表达的粘附素基因,ALS6、ALS7、ALS9,尤其是ALS4表达较弱。ALS1、ALS2和ALS3在生物膜形成中期比在早期表达显著上调,但在成熟期表达下降。ALS基因家族成员的表达模式在菌株间无明显差异。结论:ALS1、ALS2、ALS3和ALS5在白色念珠菌体外生物膜形成过程中优势表达,对这些ALS基因的靶向抑制将为控制白色念珠菌生物膜相关疾病提供新的思路。

变异念珠菌常见菌落和菌体形态

目的 研究白色念珠菌变异后菌落及菌体形态的变化特征.方法 用唑类抗真菌药物对白色念珠菌标准菌进行实验室诱导得到不同的变异株;不同培养环境下获得白色念珠菌自发变异株.从抗真菌药物治疗效果不佳的临床念珠菌感染患者标本中分离培养的念珠菌变异株.将以上变异株进行培养,革兰染色,镜下观察菌体形态.结果 氟康唑诱导变异株菌落呈黏液状,革兰染色为阳性长杆状;伊曲康唑诱导的变异株菌落呈水滴状,革兰染色为阴性球杆状;酮康唑诱导的变异株菌落呈灰白色,革兰染色为阳性葡萄状;白色念珠菌自发变异株和临床分离念珠菌变异株菌落多产红色、黄色等色素形态为革兰阳性球菌状、革兰阴性杆状,也可呈白色毛绒状、淡粉色粉末样菌落,革兰染色为阳性念珠菌.结论 常用抗真菌药物、生长微环境改变、体内某些因素极易诱发念珠菌发生变异,变异后念珠菌无论菌落和菌体可发生类细菌样改变,因此,容易造成实验室在诊断念珠菌感染时的误诊和漏诊.

TLR2和TLR4在大鼠光滑念珠菌肺部感染中的表达及意义

目的研究Toll样受体2(TLR2)和TLR4在光滑念珠菌肺部感染大鼠中的作用。方法将36只大鼠分为3组,每组12只:对照组(A组)、未免疫抑制肺部光滑念珠菌感染组(B组)及免疫抑制肺部光滑念珠菌感染组(C组)。每组分别在造模成功后第1、3天各处死大鼠6只,观察肺组织病理变化,用逆转录PCR(RT-PCR)法检测肺组织TLR2、TLR4mRNA的表达、酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定TNF-α蛋白水平。结果 A组肺组织正常;B组部分肺泡塌陷、炎症细胞浸润,未见孢子或菌丝;C组大部分肺泡塌陷,部分扩张,大量炎症细胞浸润、并有孢子菌丝聚积。第1、3天TLR2mRNA和TNF-α蛋白表达水平C组明显高于其他两组(P<0.01),B组高于A组(P<0.05);C组第3天TLR2、TLR4mRNA,TNF-α表达水平高于第1天(P<0.05,P<0.01),且TLR4表达高于A组(P<0.05)。结论 TLR2和TNF-α可能参与光滑念珠菌肺部感染的发生发展,TLR4可能起协同作用。

白念珠菌磷脂甘露聚糖对单核细胞产生白介素-6、白介素-8的影响

目的研究白念珠菌磷脂甘露聚糖(PLM)诱导人急性单核细胞白血病细胞系细胞(THP-1)产生的炎症反应是否依赖Toll样受体(TLR)2。方法实时荧光定量逆转录PCR分析PLM体外刺激THP-1细胞TLR2、TLR4、前炎症因子[白介素(IL)-6]和趋化因子(IL-8)的mRNA表达水平。酶联免疫吸附法检测IL-6、IL-8分泌含量。免疫印迹法分析TLR2的蛋白表达。结果 PLM可升高THP-1细胞的IL-6和IL-8 mRNA表达和分泌水平(均P=0.0000)。PLM上调THP-1细胞的TLR2 mRNA和蛋白表达水平(P=0.0000),但对TLR4 mRNA表达无影响。PLM经β-D-甘露糖苷水解酶处理后,不能诱导上述受体及因子的表达。TLR2中和抗体能抑制PLM诱导的IL-6和IL-8产生(P=0.0003,P=0.0010)。结论白念珠菌胞壁PLM依赖TLR2介导激活人THP-1细胞产生炎症反应。

类几丁质酶3蛋白1在申克孢子丝菌刺激巨噬细胞的表达和作用研究

目的探讨巨噬细胞类几丁质酶3蛋白1在申克孢子丝菌刺激后的表达和作用研究。方法通过测定巨噬细胞与申克孢子丝菌共孵育时杀菌率,使用实时荧光定量PCR检测不同时间点巨噬细胞的类几丁质酶3蛋白1mRNA表达水平,同时体外实验检测类几丁质酶3蛋白1对申克孢子丝菌的抑菌作用,同时采用空白对照和白念珠菌阳性对照比较两者的差异。结果巨噬细胞可吞噬杀灭申克孢子丝菌分生孢子,也可吞噬阳性对照白念珠菌酵母相细胞。巨噬细胞类几丁质酶3蛋白1mRNA表达水平在申克孢子丝菌组和空白对照组无明显差别,作用于阳性对照的白念珠菌组的巨噬细胞类几丁质酶3蛋白1mRNA表达水平明显上调。体外实验显示类几丁质酶3蛋白1对申克孢子丝菌分生孢子的无明显抑制作用,对白念珠菌繁殖却有较强的抑制作用。结论申克孢子丝菌未能诱导巨噬细胞表达类几丁质酶3蛋白1抑制其增殖从而逃逸清除,而白念珠菌感染可上调巨噬细胞类几丁质酶3蛋白1表达从而抑制其增殖减轻感染,这可能是申克孢子丝菌特有的致病作用机制之一。

白假丝酵母菌对人阴道上皮细胞TLR4mRNA表达的影响

目的探讨白假丝酵母菌对人阴道上皮细胞Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)mRNA表达的影响。方法用白假丝酵母菌热灭活孢子刺激体外培养的人阴道上皮细胞12h和24h,应用实时定量逆转录聚合酶链反应(QRT-PCR)检测细胞TLR4mRNA的表达水平。结果正常人阴道上皮组织和体外培养人阴道上皮细胞均表达TLR4mRNA。白假丝酵母菌热灭活孢子刺激12h,上皮细胞中TLR4mRNA表达明显高于对照组和刺激24h组P<0.05,刺激24h组与对照组比较,无明显差异P=0.50。结论人阴道上皮细胞构成性表达少量TLR4,白假丝酵母菌刺激12h时人阴道上皮细胞表达TLR4mRNA增加,推测TLR4可能在人阴道上皮细胞识别白假丝酵母菌和启动防御感染的早期起一定作用。

小鼠口腔黏膜白念珠菌感染模型局部Toll样受体2和4mRNA表达的研究

目的:研究小鼠口腔黏膜白念珠菌感染后局部组织Toll样受体(TLR)2、4mRNA表达的变化规律,探讨其在口腔黏膜抗白念珠菌感染早期免疫中的作用。方法:采用局部接种的方法建立小鼠口腔黏膜白念珠菌感染模型。在不同时间取口腔组织,用半定量逆转录(RT)-PCR检测口腔组织TLR2、TLR4mRNA表达水平。结果:接种前口腔组织内有微量的TLR2、TLR4mRNA表达,接种后6h组织中TLR2、TLR4mRNA表达开始增加,12～24h表达水平达峰值。TLR4mRNA表达于24～48h开始下降,72h趋于接种前水平,而TLR2mRNA表达则持续增加至72h。结论:白念珠菌感染可迅速上调局部组织TLR2、TLR4的基因表达,TLR2、TLR4在口腔黏膜抗白念珠菌感染早期免疫中可能起重要作用。

类细菌样念珠菌变异株对普通抗细菌药物敏感性观察

目的了解念珠菌发生类细菌样变异前后对普通抗细菌药物的敏感性是否发生了改变。方法采用常规MH药敏试验方法，观察ATCCl0231白色念珠菌标准菌株和其自发变异后得到的类细菌样念珠菌变异株，9002．9白色念珠菌标准菌株及其经抗真菌药物诱导形成的类细菌样念珠菌变异株，临床分离的类细菌样念珠菌变异株及变异株返祖后得到的念珠菌株，共11株菌对普通抗细菌药物头孢哌酮／舒巴坦、头孢西丁、亚胺培南、环丙沙星、红霉素、万古霉素、庆大霉素、氯霉素、四环素的敏感性。结果两株白色念珠菌标准菌株、临床分离类细菌样变异株返祖后的念珠菌株对普通抗细菌药物无抑菌圈；而不同条件下得到的类细菌样念珠菌变异株则对以上普通抗细菌药物有一定的敏感性。结论白色念珠菌发生类细菌样变异后，对普通抗细菌药物的敏感性发生了改变，变异前对普通抗细菌药物不敏感，但发生类细茼样变异后对普通抗菌药物均有一定的敏感性，其抗菌谱与普通细菌基本一致。

白念珠菌对角质形成细胞Toll样受体2表达的影响

目的:探讨白念珠菌和甘露聚糖对人角质形成细胞Toll样受体2(TLR2)表达的影响。方法:用白念活菌和甘露聚糖分别刺激培养的人角质形成细胞24h,然后用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测细胞TLR2mRNA表达,免疫组化SP法检测TLR2蛋白表达,并进行半定量分析。结果:正常培养的人角质形成细胞有TLR2mRNA和蛋白表达,白念珠菌和甘露聚糖刺激角质形成细胞24h后,TLR2表达量没有统计学差异(P>0.05)。结论:角质形成细胞有TLR2mRNA和蛋白水平的组成性表达,白念珠菌和甘露聚糖对TLRR2表达均无明显影响,推测角质形成细胞表面可能存在多个识别念珠菌及其产物甘露聚糖的受体,TLR2只是其中之一。

大鼠白念珠菌支气管肺感染时肺组织Toll样受体2的表达及意义

目的探讨Toll样受体2(TLR2)在白念珠菌支气管肺感染大鼠肺组织模型中的表达及意义。方法建立白念珠菌支气管肺感染大鼠模型,观察感染后肺组织病理形态学改变,采用免疫组织化学法观察感染后不同时间(第3天、第7天)白念珠菌支气管肺感染大鼠肺组织TLR2的表达,并与未感染组进行比较。结果大鼠白念珠菌支气管肺感染后肺组织TLR2表达水平明显升高。结论白念珠菌支气管肺感染肺组织TLR2表达增高可能参与感染的炎症反应。

Toll样受体在抗白假丝酵母菌感染中的作用研究进展

Toll样受体（TLR）是一类主要表达于树突状细胞和巨噬细胞等固有免疫细胞上的模式识别受体，能识别和结合白假丝酵母菌上的病原相关分子模式，并引起特定下游信号转导。TLR多态性与宿主对白假丝酵母菌的易感性有关，TLR激活后可诱导促炎性细胞因子的表达，发挥抗白假丝酵母菌感染作用；而白假丝酵母菌也可发生菌相改变以利于逃选机体免疫反应。了解TLR和白假丝酵母菌之间的相互作用，可为阐明抗真菌感染免疫的机制提供新的实验依据。

2010～2011年酵母样真菌耐药分析

目的:阶段性总结和分析真菌分布情况及耐药性,以提高临床的治疗与预防效果,为我国医疗感染用药以及疾病治疗预防提供指导意见。方法:取我院患者送检的分泌物、尿液、粪便、咽拭子等的化验结果及药敏报告,经真菌培养鉴定,共检出酵母样真菌150例,药敏试验检测真菌的耐药性。结果:酵母样真菌分布按百分率由高到底排序为:白色念珠菌(65.33%)、光滑念珠菌(14.67%)、热带念珠菌(12%)、克柔念珠菌(5.33%)和近平滑念珠菌(2.67%)。按敏感率排序:两性霉素B(92%)、伏立康唑(75.33%)、氟胞嘧啶(64.67%)、益康唑(58%)、氟康唑(58%)、酮康唑(57.33%)、咪康唑(41.33%)、伊曲康唑(18%);按耐药率排序:两性霉素B(5.33%)、伏立康唑(7.33%)、氟康唑(15.33%)、氟胞嘧啶(29.33%)、咪康唑(32%)、益康唑(32.67%)、酮康唑(33.33%)、伊曲康唑(74.67%)。结论:白色念珠菌是酵母样真菌感染的主要菌种,两性霉素B可作为临床用药的首选,伏立康唑次之,抗菌素用药还应谨慎,勿滥用。

纳米载银抗菌剂与四针状氧化锌抗白色念珠菌的性能

背景:口腔修复材料室温固化甲基丙烯酸甲酯的表面结构疏松多孔,极易附着各种细菌、微生物导致患者义齿性口炎的发生,所以在甲基丙烯酸甲酯中加入抗菌剂成为国内外学者研究的热点。目的:比较加入纳米载银抗菌剂与四针状氧化锌抗菌剂后,室温固化甲基丙烯酸甲酯对白色念珠菌的抗菌活性。方法:采用对倍稀释法测定纳米载银抗菌剂与四针状氧化锌抗菌剂对白色念珠菌的最小杀菌浓度。将纳米磷酸锆载银抗菌粉体与四针状氧化锌抗菌剂分别以0%,1%,2%,3%的质量比加入到室温固化甲基丙烯酸甲酯粉剂中,检测各组试件对白色念珠菌的抗菌率。结果与结论:纳米载银抗菌剂对白色念珠菌的最小杀菌浓度为40g/L,四针状氧化锌抗菌剂对白色念珠菌的最小杀菌浓度为25g/L。未加入纳米载银抗菌剂或四针状氧化锌抗菌剂的甲基丙烯酸甲酯几乎无抗菌活性,加入两种抗菌剂后其抗菌活性明显增加,随着加入抗菌剂质量比的增加,抗菌活性逐渐增强;当抗菌剂质量比增加到3%时,加入纳米载银抗菌剂的甲基丙烯酸甲酯抗菌率为92.23%,加入四针状氧化锌抗菌剂的甲基丙烯酸甲酯抗菌率为98.23%。表明纳米载银抗菌剂与四针状氧化锌抗菌剂对白色念珠菌均有抗菌效果,且四针状氧化锌抗菌剂比纳米载银系抗菌剂抗菌效果好。

综合医院院内检出酵母样菌3年结果分析

目的了解3年来我院检出酵母样菌的分布特点及耐药情况。方法用沙氏培养基分离菌株,API生化鉴定菌种;微量液基稀释法测定药敏。结果338份标本分离培养出238株酵母样菌,阳性率71.41%,其中白念珠菌占68.69%;其次热带念珠菌、光滑念珠菌和近平滑念珠菌分别占9.66%、8.82%和5.04%。70株酵母样菌对7种抗真菌药物的耐药率均在10%以上,两性霉素B和制霉菌素耐药率相对较低,分别为11.43%和10%;白念珠菌对氟康唑和伊曲康唑的耐药率高达18.25%和25.92%。结论白念珠菌仍然是我院第一位的机会性致病真菌,且对氟康唑和伊曲康唑有较高的耐药率。

白念珠菌感染口腔上皮细胞诱导炎症细胞因子的产生机制

目的探讨白念珠菌感染口腔上皮细胞诱导炎症细胞因子的产生机制。方法采用随机数字法将70只小鼠平均分为两组,每组包含35只受试小鼠,模型组建立小鼠口腔白念珠菌感染的体内模型,对照组不进行任何处理;感染5 d后比较两组受试小鼠菌落计数、炎症细胞因子表达水平以及TLR2、TLR4表达量。结果感染5 d后,模型组受试小鼠的菌落数以及白斑面积评分均明显高于对照组,两组间差异具有统计学意义(P<0.05);模型组受试小鼠血清TNF-α、IL-6水平明显高于对照组,TGF-β水平明显低于对照组,且差异具有统计学意义(P<0.05);模型组受试小鼠TLR2、TLR4 m RNA扩增带相对吸光度值明显高于对照组,且差异具有统计学意义(P<0.05)。结论白念珠菌感染口腔上皮细胞后炎症细胞因子表达水平增加,其机制可能与感染白念珠菌后,其菌体作用于TLRs进而引起细胞内信号转导相关。

白头翁汤正丁醇提取物对白念珠菌作用下Caco-2细胞中细胞因子、防御素及Toll样受体表达的影响

目的从细胞因子、人β-防御素(human beta defensin,HBD)及Toll样受体(toll-like receptors,TLRs)途径探究白头翁汤正丁醇提取物(butyl alcohol extract of Baitouweng Decoction,BAEB)抗白念珠菌的机制。方法以Caco-2细胞为实验模型,先以BAEB作用Caco-2细胞24h,再加入热灭活的白念珠菌SC5314孢子(Candida albicans,C.A)共培养24h,以MTT法测定Caco-2细胞存活率;采用酶联免疫吸附试验检测Caco-2细胞上清液白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-8、IL-1β、HBD-2、HBD-3水平;采用普通PCR法检测Caco-2细胞TLR1、TLR2、TLR4、TLR5mRNA的表达水平。结果与对照组比较,C.A单独作用的Caco-2细胞中IL-6、IL-8、IL-1β、HBD-2、HBD-3表达水平显著升高(P<0.05),TLR1、TLR2、TLR4、TLR5mRNA表达水平显著上调(P<0.05);与C.A单独作用相比,BAEB预保护Caco-2细胞后,Caco-2细胞中IL-6、IL-8、IL-1β及HBD-2、HBD-3表达水平明显降低(P<0.05),TLR1、TLR2、TLR4、TLR5mRNA表达水平也显著下调(P<0.05),BAEB高剂量的效应最明显。结论 BAEB抗白念珠菌的机制与下调细胞因子、HBD及TLRs表达有关。

Toll样受体-2对角质形成细胞分泌IL-8的影响

目的:观察白念珠菌刺激人角质形成细胞后IL-8的变化以及Toll样受体2(Toll-like receptor2,TLR-2)对IL-8分泌的影响,探讨角质形成细胞在皮肤免疫系统中的作用。方法:白念珠菌分别与抗TLR-2抗体预处理前后的角质形成细胞孵育,ELISA方法检测不同时间培养上清液IL-8的水平。结果:白念珠菌可引起IL-8明显升高(P<0.01),3h开始,至24h达到高峰;中和TLR-2受体后,虽然引起IL-8升高,但无统计学意义(P>0.05)。结论:白念珠菌可以刺激角质形成细胞分泌IL-8,TLR-2在角质形成细胞IL-8表达中的作用尚难确定。

贵州汉族慢性阻塞性肺疾病患者Toll样受体1基因多态性与肺念珠菌感染及定植的相关性

目的 Toll样受体(TLRs)基因多态性与中国汉族人群真菌感染的相关性研究鲜有报道。文中探讨贵州汉族人群TLRs基因单核苷酸多态性(SNP)与慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肺念珠菌感染及定植的相关性。方法采用聚合酶链反应-直接测序分型(PCR-SBT)法检测344例COPD汉族患者TLR1、2和4基因6个SNP位点的基因型。其中80例合并肺念珠菌感染(肺念珠菌感染组),103例合并念珠菌定植(念珠菌定植组),161例为阴性对照(对照组)。SNPstats在线软件分析在不同遗传模式下单个SNP与COPD患者肺念珠菌感染、念珠菌定植的相关性。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测肺念珠菌感染者血浆中IL-6、IL-8、IL-1β及TNF-α蛋白水平,评估多态性的功能性结果。结果所有样本均未检测到rs5743611、rs5743708、rs4986790及rs4986791的多态性。rs4833095位点在共显性、显性与超显性遗传模式下肺念珠菌感染组与对照组间基因型的分布差异有统计学意义(P<0.05),显性遗传模型是该位点最佳遗传模式。念珠菌定植组与对照组间rs4833095基因型分布差异无统计学意义(P>0.05)。rs5743618基因型分布在所有组间差异均无统计学意义(P均>0.05)。肺念珠菌感染组rs4833095的T等位基因能降低血浆中IL-6、IL-8、IL-1β水平,差异有统计学意义(P<0.05)。该位点的T等位基因降低血浆中TNF-α水平,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TLR1基因rs4833095多态性与慢性阻塞性肺疾病患者肺念珠菌感染的易感性有关。该位点的T等位基因可能影响TLR1的功能,降低血浆中IL-6、IL-8、IL-1β蛋白水平。rs4833095与rs5743618多态性与念珠菌定植易感无关。