Duchenne型肌营养不良小鼠模型鉴定及干细胞移植后dystrophin的变化

目的建立Duchenne型肌营养不良(DMD)模型dko小鼠的鉴定方法,评估干细胞移植后dystrophin的再生水平。方法采用SSP-PCR方法鉴定杂合子鼠交配产生的子代鼠的基因型。生化分析仪测定dko小鼠血浆肌酸激酶含量,HE染色观察肌肉组织学变化。扩增人脐带间充质干细胞并注射到dko小鼠后肢肌肉,2个月后免疫荧光染色法检测dystrophin的表达。结果杂合子鼠交配可以产生三个基因型的子代鼠,21.2%的子代鼠可以鉴定为dko小鼠的基因型(285 bp)。dko小鼠显示了肌营养不良的症状,血浆肌酸激酶含量高达(16,988.52±617.48)IU/L,典型的病理变化包括肌纤维大小不一,多见核中移细胞,结缔组织增生或炎性细胞浸润。将人脐带间充质干细胞注射到dko小鼠后肢肌肉,2个月后可检测到人dystrophin的表达。结论采用SSP-PCR可用于鉴定dko小鼠基因型,dko小鼠是研究干细胞治疗DMD的理想动物模型。

Duchenne型肌营养不良症模型小鼠神经肌肉接头特征研究

目的观察Duchenne型肌营养不良症模型小鼠骨骼肌肌膜抗肌萎缩蛋白(dystrophin)表达变化和神经肌肉接头形态,分析其可能机制。方法 C57BL/6和mdx小鼠各8只,HE染色观察肌细胞组织学形态,免疫荧光染色检测腓肠肌肌膜dystrophin蛋白表达变化和神经肌肉接头形态。结果C57BL/6小鼠腓肠肌肌细胞大小基本一致,呈多角形,胞核位于细胞周边、极少数位于肌纤维中心;肌膜均匀表达dystrophin蛋白;神经肌肉接头形态完好。Mdx小鼠腓肠肌肌细胞大小不一致,呈圆形,部分胞核趋中心化;仅少量或个别肌细胞表达dystrophin蛋白;mdx种鼠突触后膜乙酰胆碱受体断裂成小片段,突触前膜神经末梢突起增多、变细,而mdx幼鼠神经肌肉接头形态与C57BL/6小鼠基本一致;mdx小鼠神经肌肉接头数目明显减少,突触前膜和突触后膜横截面积明显减小,肌细胞间神经轴突明显变细。结论Mdx小鼠骨骼肌肌膜dystrophin蛋白缺失并非导致神经肌肉接头改变的直接因素,可能与病情进展有关。

γ⁃生育三烯酚对Duchenne型肌营养不良症小鼠骨骼肌卫星细胞的保护作用

目的探讨骨骼肌卫星细胞在Duchenne型肌营养不良症中损伤改变以及γ⁃生育三烯酚(GT3)对DMD基因敲除小鼠卫星细胞保护作用。方法DMD基因敲除的C57BL/6J小鼠与野生型(WT)C57BL/6J小鼠各18只,随机选取各6只,流式细胞术检测卫星细胞比例、细胞老化率和凋亡率、DNA损伤率;剩余12只DMD基因敲除小鼠和12只野生型小鼠分别予以GT3溶液50 mg/kg或GT3溶剂50 mg/kg皮下注射,流式细胞术检测卫星细胞凋亡率和DNA损伤率,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ⁃PCR)检测凋亡相关基因Bcl⁃xl、Puma和Bax表达变化。结果与野生型组相比,DMD基因敲除组小鼠卫星细胞数目减少(t=35.837,P=0.000),细胞老化率(t=12.902,P=0.000)、细胞凋亡率(t=6.864,P=0.000)和DNA损伤率(t=10.585,P=0.000)增加。DMD基因敲除组和野生型组小鼠经GT3溶剂或GT3溶液处理后,卫星细胞凋亡率(F=59.130,P=0.000),凋亡相关基因Bcl⁃xl(F=54.480,P=0.000)、Puma(F=38.940,P=0.000)和Bax(F=632.300,P=0.000)表达量,DNA损伤率(F=22.990,P=0.000)差异均有统计学意义,其中,与GT3溶剂相比,DMD基因敲除组经GT3溶液处理后细胞凋亡率减少(q=13.820,P=0.000),抗凋亡基因Bcl⁃xl表达上调(q=12.830,P=0.000),促凋亡基因Puma(q=12.920,P=0.000)和Bax(q=48.050,P=0.000)表达下调,DNA损伤率下降(q=6.950,P=0.000)。结论DMD基因敲除小鼠卫星细胞数目减少,细胞老化、凋亡和DNA损伤较明显,GT3可部分改善卫星细胞损伤。

秀丽隐杆线虫模型在肌肉萎缩症研究中的应用

肌肉萎缩症目前尚无有效的治疗方法,良好的实验动物模型是研发治疗肌肉萎缩药物的基础。在临床前研究中,可用的肌肉萎缩动物模型有小鼠、犬等,秀丽隐杆线虫以通体透明、生命周期短、基因与人类基因具有高度同源性等优势得到研发人员的关注。该文对现有肌肉萎缩线虫模型的特点及其在肌肉萎缩症研究中的应用进行综述。

DMD模型鼠基因型鉴定及其肌组织病理学与超微结构研究

目的:探讨DMD动物模型dko小鼠的基因型鉴定方法及其肌组织的病理学与超微结构情况。方法:运用序列特异性引物PCR-SSP技术鉴定杂合子种鼠的子代基因型,并对子代dko小鼠的骨骼肌组织冰冻切片进行HE染色和dystrophin/utrophin的SABC-Cy3荧光免疫组织化学检测以及肌组织的透射电镜观察。结果:112只子代鼠中,mdx小鼠28只,dko小鼠26只,杂合子鼠58只,按百分比计算,分别占25.0％、23.2％、51.8％,基因型鉴定结果符合孟德尔遗传规律;dko小鼠肌组织HE染色显示细胞大小形态不均,轮廓变圆,核中移,肌间隙变宽,有炎症细胞浸润与结缔组织增生现象;免疫荧光检测肌膜未见有dystrophin/utrophin表达;电镜观察有肌膜断裂不完整、膜与膜下组织分离并水肿、肌原纤维结构松散、结缔组织增生及炎症细胞浸润等现象。结论:PCR-SSP技术鉴定子代鼠基因型快捷准确;dko小鼠的病理生理学表现与DMD极为相像,是DMD临床治疗研究的理想疾病动物模型。

胎儿肌肉来源细胞的分离及其成肌分化研究

目的观察胎儿肌肉来源细胞(f MDC)体外成肌分化能力以及在mdx鼠体内再生抗肌营养不良蛋白。方法使用含10%新生牛血清的DMEM/F12培养液,采用预贴壁方法从胎儿肌肉组织中分离f MDC。采用免疫染色鉴定肌肉特异标志的表达。肌内注射f MDC到6.5 Gy照射3 d后的mdx小鼠股直肌,1个月后采用免疫荧光染色法和RT-PCR方法检测人抗肌营养不良蛋白和基因的表达。结果采用预贴壁方法可从胎儿肌肉组织中分离到贴壁生长、梭型的f MDC。可在f MDC的一些长纤维细胞包浆中检测到MHC的表达,在一些细胞胞核中检测到成肌素的表达。可在注射f MDC的mdx小鼠肌肉中检测到人抗肌营养不良蛋白和基因的表达。结论 f MDC中存在MHC和成肌素的阳性表达,注射f MDC到照射过的mdx小鼠体内可以再生抗肌营养不良蛋白表达。

杜氏肌营养不良症(DMD)及其动物模型研究进展

杜氏肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy,DMD)属于X连锁隐性遗传病。DMD基因是人类最大基因,突变机制复杂。随着分子生物学的研究进展,对DMD的基因和其编码的抗肌萎缩蛋白(dystrophin)及抗肌萎缩蛋白相关蛋白(utrophin)的认识不断深入。本文就DMD的病理学特点,Dys基因结构、表达、功能,DMD突变及其相关检测技术,DMD实验动物模型及相关治疗的研究进展进行综述。

DMD免疫缺陷型小鼠模型的建立及其基因型鉴定

目的建立假肥大型肌营养不良症(DMD)免疫缺陷型小鼠(scid/mdx双基因缺陷型,scid-/-/mdx-/-),以及其抗肌萎缩蛋白基因(dystrophin)和scid基因的PCR鉴定方法。方法利用经典遗传学的杂交-互交方法,将非糖尿病-严重联合免疫缺陷(NOD-scid)雄鼠(scid-/-)和mdx雌鼠(mdx-/-)进行交配,提取杂合子F2代小鼠的基因组DNA,对dystrophin以及scid基因进行片段扩增,电泳后观察结果。结果46只杂合子F2代小鼠中共鉴定出13只dystrophin和scid双基因缺陷型的纯合小鼠,将人骨髓间充质细胞移植入小鼠,能整合分化成骨骼肌细胞。结论实验成功的得到了DMD免疫缺陷型小鼠,并提供了一种简单快速准确的PCR鉴定方法,为DMD的实验研究中的异种间移植提供了有效的动物模型。

Duchenne型肌营养不良症发病机制

Duchenne型肌营养不良症是我国常见的X连锁隐性遗传性肌病。目前广泛应用的动物模型是mdx小鼠,但其没有很好地模拟人类疾病特点。最近,Sacco等报导了一个新的小鼠模型mdx/mTRG2,它不仅有抗肌萎缩蛋白的缺陷,还有端粒酶的缺失,较好地模拟了人类疾病的症状。通过该模型,人们认识到抗肌萎缩蛋白的缺陷引起肌细胞退化,肌肉干细胞被激活对抗其退化,但干细胞的过度增殖又导致端粒长度下降,引起肌肉干细胞增殖能力的衰竭,最终产生了肌营养不良的表型。该模型使人们对Duchenne型肌营养不良症的发病机制有了进一步的理解,为其治疗提供了新的研究平台。

罕见病患者家庭的压力分析及社会工作介入路径探讨

目的分析罕见病患者家庭的压力,探讨有效化解罕见病患者家庭压力的社会工作介入路径。方法2019年3-5月通过雪球抽样与深度抽样选出16组患有进行性肌营养不良患者家庭并对其进行焦点小组访谈及深度访谈。结果罕见病患者家庭面临的压力主要来自疾病无法治愈甚至难以治疗、家庭经济负担重、婚姻关系瓦解、缺乏替代性照顾及照顾者身心负担重等方面。结论社会工作介入可以有效帮助罕见病患者家庭化解来自多方面的压力,并促进家庭健康发展。