小鼠canstatin cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的 :从小鼠肝脏组织克隆canstatincDNA并在大肠杆菌 (E .coli)中表达 ,为进一步研究其抗肿瘤血管生成活性奠定基础。方法 :用Trizol试剂提取小鼠肝脏组织总RNA ,通过RT -PCR扩增小鼠canstatin(mcanstatin)的cDNA ,克隆到pMD18-T载体中并进行序列分析。将小鼠canstatincDNA定向克隆于原核表达载体pET30a(+)中 ,在大肠杆菌E .coliBL2 1中经IPTG诱导表达。结果 :小鼠canstatin的cDNA长度为 6 84bp ,编码 2 2 7个氨基酸 ,与已知的人canstatin的cDNA同源性为 89% ,氨基酸的同源性为 96 %。IPTG诱导原核表达载体pET30a(+) /mcanstatin在大肠杆菌E .coliBL2 1中表达。结论 :首次成功克隆了小鼠canstatin的cDNA ,其原核表达载体pET30a(+) /mcanstatin在大肠杆菌E .coliBL2 1中高效表达 ,小鼠canstatin抗肿瘤血管生成活性有待进一步研究。

小鼠canstatin及其N端片段在大肠杆菌BL21中的表达

以小鼠肝脏组织总RNA为模板,通过RT PCR扩增小鼠canstatin及其N端片段基因,克隆到pMD18 T载体中并进行序列分析。将小鼠canstatin及其N端片段基因定向克隆于原核表达载体pET30a(+)中,分别构建表达质粒pET/Can和pET/Can N,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。结果表明:小鼠canstatin的cDNA长度为684bp,编码227个氨基酸,与已知的人canstatincDNA同源性为89%,氨基酸的同源性为96%。小鼠canstatinN端片段(1 95aa)与人的同源性为100%。IPTG诱导原核表达载体pET/Can和pET/Can N在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达量约占菌体总蛋白量的35%和18%,重组蛋白主要以包涵体形式存在。文中报道的小鼠canstatin及其N端片段核苷酸序列已收入GenBank,接受号分别为:AY375463和AY502946。

小鼠canstatin C端片段基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

为了构建小鼠canstatin C端片段的原核表达载体并在大肠杆菌中表达。以小鼠肝脏组织总RNA为模板,通过RT-PCR扩增小鼠canstatin C端片段(mCan-C)基因,克隆到pMD18-T载体中并进行序列分析。将mCan-C基因定向克隆于原核表达载体pET30a(+)中,构建表达载体pET/ mCan-C,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。结果表明,小鼠canstatin C端片段的cDNA 长度为399bp,含有1个终止密码,编码132个氨基酸,与已知的人canstatin C端片段氨基酸的同源性为61%。IPTG诱导mCan-C在大肠杆菌E.coli BL21中表达,表达量约占菌体总蛋白量的28%,重组蛋白主要以包涵体形式存在。首次克隆了小鼠canstatin C端片段的cDNA,IPTG诱导mCan-C在大肠杆菌E.coli BL21中高效表达。小鼠canstatin C端片段的cDNA序列已收入GenBank,接受号为:AY502947。

人血管生成抑制因子canstatin原核表达载体的构建及表达

目的 :构建国人血管生成抑制因子canstatin的原核表达载体并在大肠杆菌BL2 1中表达canstatin重组蛋白。方法 :用Trizol试剂提取人肝脏组织总RNA ,通过RT -PCR扩增canstatin的cDNA ,克隆到pMD1 8-T载体中并进行序列分析。将canstatincDNA定向克隆于原核表达载体pET30a(+)中 ,而后在大肠杆菌BL2 1中经IPTG诱导表达。结果 :canstatincDNA克隆入质粒pET30a(+)获得了重组表达载体pET30a(+) /Cans,canstatin的cDNA长度为 6 84bp ,编码 2 2 7个氨基酸。IPTG诱导原核表达载体pET30a(+) /Cans在大肠杆菌BL2 1中的表达量约占菌体总蛋白量的 35 %。结论 :原核表达载体pET30a(+) /hCans在大肠杆菌BL2