褪黑素引发对Na_(2)SO_(4)胁迫下紫花苜蓿种子发芽特性的影响

试验以紫花苜蓿(Medicago sativa)种子为材料,采用不同浓度的褪黑素(0.05,0.1和0.2 mmol·L^(-1))分别引发种子6 h(记为ML6,MM6和MT6)和12 h(记为ML12,MM12和MT12),以不引发、蒸馏水引发6 h和12 h为对照(记为CK1,CK2-6和CK2-12),探究在Na_(2)SO_(4)胁迫下,褪黑素引发对紫花苜蓿种子发芽和幼苗生长特性的影响,以期筛选有效缓解Na_(2)SO_(4)胁迫的褪黑素引发处理。结果表明,75 mmol·L^(-1)Na_(2)SO_(4)(pH=8.5)胁迫下种子发芽率、发芽势和发芽指数显著下降(P<0.05)。该条件下,与CK1相比,褪黑素引发后苜蓿种子的发芽和幼苗生长能力均有不同程度提高。MT6处理下种子发芽率、发芽势及幼苗根长、苗长和活力指数最高。对MT6幼苗的抗氧化酶活性分析发现,过氧化物酶(Peroxidase, POD)活性显著提高(P<0.05),种子可溶性糖含量显著下降(P<0.05)。综上,0.2 mmol·L^(-1)褪黑素引发6 h紫花苜蓿种子对盐碱胁迫的缓解效应最佳,促进种子发芽和提高幼苗耐盐碱能力。

甘农4号紫花苜蓿组培再生体系的建立

为实现对甘农4号紫花苜蓿Medicagosativacv．Gannong No．4的遗传改良，研究拟建立一个操作简便、可重复性强、遗传性稳定、培养周期短和再生率高的转基因受体系统，为其遗传改良奠定基础。研究以MS为基本培养基，在不同浓度的2，4-D与6-BA的诱导培养基上，以甘农4号紫花苜蓿下胚轴为外植体，诱导愈伤组织。诱导率为86．85％～99．56％，其中MS＋2mg／L 2，4-D＋1mg／L 6-BA诱导率最高；浅黄色至淡绿色的愈伤组织在MS＋0．5mg／LKT＋0．1mg／LNAA培养基上的分化最好且植株颜色嫩绿。丛生芽在1／2MS＋0．5mg／LNAA的生根培养基上可再生成完整的苜蓿植株。

‘热研4号’王草替代紫花苜蓿对TMR发酵品质及有氧稳定性的影响

本试验旨在探讨不同比例‘热研4号’王草(Pennisetum purpureum×P.americana‘Reyan No.4’)替代紫花苜蓿(Medicago sativa L.)对全混合日粮发酵品质及有氧稳定性的影响。试验设‘热研4号’王草替代比例为0%(H0,紫花苜蓿对照组),18%(H18),30%(H30),42%(H42)4个处理,青贮60 d后开袋取样,分析其发酵品质和营养成分,并分别在有氧暴露的第0,3,6,9,12 d取样评定其有氧稳定性。结果表明:随着热研4号王草替代比例的增加,发酵全混合日粮中乳酸含量、pH及氨态氮/总氮逐渐减小,各组氨态氮/总氮小于100 g·kg^-1TN且均未检测到丁酸;发酵60d后,H42组水溶性碳水化合物含量显著高于H0,H18组(P<0.05),与发酵前相比,各组干物质和粗蛋白含量有所下降,H42组干物质和粗蛋白含量下降最小;有氧暴露期间,好氧细菌、酵母菌和霉菌的数量逐渐增加,乳酸菌的数量逐渐降低,H42组pH在12 d内未超过4.2,有氧稳定性最好。由经济效益分析可知,H42组饲料成本最低。综上所述,选用H42组进行全混合日粮发酵最为适宜。

草原4号紫花苜蓿两种再生分化途径的建立和比较

以草原4号紫花苜蓿无菌苗为材料,选择直接和间接两种再生途径进行再生。结果表明:以下胚轴和子叶为外植体建立的间接再生体系,最优愈伤培养基为1mg/L 2,4-D+0.2mg/L KT,14d诱导率分别为100%和72.41%;最佳分化培养基为0.5mg/L 6-BA+0.9mg/L KT,60d后的分化率分别为88.89%和80.00%;不定芽接种到生根培养基(1/2 MS+0.1mg/L NAA+20g蔗糖+5.5g/L琼脂)40d后生根率可达73.30%;下胚轴为外植体的再生体系诱导愈伤和分化效果均优于以子叶为外植体。以子叶节为外植体建立直接再生体系,通过基础培养基就可获得再生植株,经55d培养就可炼苗移栽且生根率为84.44%。两种方法中,直接分化途径的再生体系更为高效省时,为后续遗传转化奠定了技术基础。

不同播期及密度对草原3号苜蓿生长发育的影响

2010年7月至2011年6月,在内蒙古农业大学牧草试验地进行了不同播期及密度对草原3号苜蓿生长发育影响的试验,对不同播期及密度处理的株高、物候期、根颈粗、分蘖芽数、越冬率等指标的测定结果表明:播种密度越大,播期越晚,苜蓿生长越缓慢,越冬率越低。7月初播种,越冬率可达100%,8月中旬以后播种,越冬率为0。同时,早播有利于第二年的返青生长。因此认为,草原3号苜蓿最适播期应不晚于7月中旬。40cm行距条播时播种密度以100苗/m为宜。

苜蓿花药悬浮培养体系的建立及其影响因素

苜蓿（Medicago sativa L.）花药悬浮培养体系的建立可为苜蓿体细胞杂交、遗传转化以及获得苜蓿单倍体,建立苜蓿加倍单倍体群体（DH）提供快捷有效的途径。采用固-液培养基结合的方式建立苜蓿花药悬浮培养体系,通过探索体系建立的基础条件及其影响因素,可建立适宜的苜蓿花药悬浮培养体系。结果表明,苜蓿悬浮培养体系中,基本液体培养基为NB培养基,培养液最佳组合为NB＋2,4-D 0.3 mg.L-1＋NAA 0.3 mg.L-1,蔗糖2%;建立苜蓿花药悬浮细胞系,应选取淡黄色或乳白色,结构疏松,颗粒状胚性愈伤组织为悬浮培养的基础材料;苜蓿花药悬浮细胞系继代周期为6~8 d;苜蓿花药悬浮培养时初始接种量为2 g/30 mL时悬浮细胞PCV、鲜重以及干重的增殖倍数最高,增殖倍数均超过4倍;植物生长调节剂2,4-D的添加浓度以0.3 mg.L-1为宜;糖作为组织培养过程中唯一的碳源,在苜蓿细胞悬浮培养体系中应有一定的浓度范围。因此,苜蓿花药悬浮培养中,蔗糖浓度为2%-3%时效果最好。

影响苜蓿雄性不育系杂交制种产量因素的分析

苜蓿雄性不育系 MS— 4与其雄性可育系——草原 1号苜蓿在外部形态上相似 ,仅能从花粉的大小及形态上区分。经扫描电镜观察发现它们在柱头形态上也存在差异 ;在呼市地区传粉昆虫对苜蓿雄性不育系 MS— 4与其杂交父本 (新疆大叶苜蓿间的选择性访花行为不明显 ;将 MS— 4和草原 1号雄性可育系分别与同一父本进行人工杂交试验 ,结果表明 :MS— 4结荚率显著 (P <0 .0 5 )低于可育系 ,而每荚种子数及千粒重均无明显差异。 MS— 4雌性器官的遗传特性可能是影响 MS— 4杂交制种产量低的重要原因。

两个苜蓿品种营养器官解剖结构特征比较

为了明确具有极强抗虫特性的‘草原4号紫花苜蓿’(Medicagosativa L.‘CaoyuanNo.4’)营养器官的解剖特征,该研究选择具有抗蓟马特性较强的‘草原2号杂花苜蓿’(Medicagovaria Martin.‘CaoyuanNo.2’)为对照,采用显微镜观察比较两品种的根、茎、叶解剖结构特征,为揭示‘草原4号紫花苜蓿’抗蓟马特性提供理论依据。结果显示:(1)‘草原4号紫花苜蓿’根部解剖结构的皮层薄壁细胞厚度、内皮层厚度、形成层厚度、木质部厚度和木射线宽度等5个指标均极显著高于(P<0.01)‘草原2号杂花苜蓿’,其中木射线宽度(159.37μm)是‘草原2号杂花苜蓿’的1.82倍。(2)‘草原4号紫花苜蓿’的茎部厚角组织厚度(21.4μm)极显著高于‘草原2号杂花苜蓿’(P<0.01),而韧皮部宽度、髓直径却均极显著低于‘草原2号杂花苜蓿’(P<0.01)。(3)‘草原4号紫花苜蓿’叶片解剖构造的7个指标均极显著高于‘草原2号杂花苜蓿’(P<0.01),其中栅栏组织层数(2~3层)极明显地高于‘草原2号杂花苜蓿’(1~2层)。研究表明,‘草原4号紫花苜蓿’的组织结构特征具有明显的抗虫特征,且其组织的抗虫特征比‘草原2号杂花苜蓿’更为突出。

不同抗虫性苜蓿根围土壤线虫群落研究

为探索不同抗虫性苜蓿品种根围土壤线虫群落的特征,本试验以线虫为生物指标,对‘草原2号’杂花苜蓿(Medicago varia Martin.‘Caoyuan No.2’)和‘草原4号’紫花苜蓿(Medicago sativa L.‘Caoyuan No.4’)根围土壤线虫群落特征进行了研究。结果表明:‘草原2号’感虫苜蓿根围土壤线虫种类及数量显著高于‘草原4号’抗虫苜蓿;‘草原4号’土壤线虫富集指数(Enrichment index,EI)显著高于‘草原2号’;‘草原4号’0~10 cm土层的土壤线虫区系位于土壤养分好且以细菌降解为主的A区,其它位于D区。综上所述,种植抗虫性不同的苜蓿品种会对其根围土壤线虫群落组成、数量及营养类群产生不同的影响。在建立人工苜蓿草地及土壤恢复过程中应优先选择抗虫性强的苜蓿‘草原4号’。

不同取样方法对苜蓿雄性不育系Ms-4RNA质量的影响

本文利用试剂盒法研究了冰盒保存不同时间对苜蓿雄性不育系MS-4花蕾和小花的RNA质量影响,拟筛选出适宜苜蓿雄性不育系MS-4 RNA研究的有效取样方法,解决远距离携带液氮取材困难的问题。结果表明:苜蓿雄性不育系MS-4花蕾的和小花RNA取样后冰盒保存6h内,琼脂糖凝胶电泳检测苜蓿雄性不育系MS-4总RNA,条带清晰,无拖尾现象,28s与18s的比例约为2:1,A_(260)/A_(280)的值在1.90-2.15,能保证提取的RNA的完整性,可作为苜蓿雄性不育系MS-4分子生物学研究的有效材料。因此,苜蓿雄性不育系MS-4花蕾和小花冰盒保存6h是基地取样短途运输的允许时间。

根蘖型苜蓿高频再生体系的建立

根蘖型苜蓿具有较强的耐牧性,是苜蓿育种重要的种质资源。建立高效的苜蓿再生体系有助于其遗传转化的研究。试验以公农4号苜蓿的子叶为材料,通过比较不同植物生长调节剂浓度配比对苜蓿愈伤组织诱导和分化的影响,建立了根蘖型苜蓿的高频再生体系。结果表明:最佳愈伤组织诱导培养基为:MS培养基+2 mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)+0.4 mg/L激动素(KT),子叶愈伤诱导率达100%;最佳分化培养基为:UM培养基+1.6 mg/L KT,愈伤组织分化率达50%;移栽小苗的成活率达90%以上。