香石竹斑驳病毒(CarMV)云南分离物CP基因的克隆和序列分析

香石竹斑驳病毒(CarMV)是侵染香石竹的主要病毒.关于该病毒的株系和不同地区分离物的病毒核酸序列研究报道较少.我们根据Guilley报道的该病毒的核酸序列设计引物,对香石竹斑驳病毒云南分离物的CP基因进行了RT-PCR扩增和序列分析.

香石竹斑驳病毒(CarMV)的研究进展

香石竹斑驳病毒(CarMV)是侵染香石竹的主要病毒之一,严重影响香石竹切花产量与品质,影响其经济价值和进出口贸易。目前对香石竹斑驳病毒已有大量研究,为系统了解该病毒,笔者从CarMV的病原学、血清学和分子生物学,CarMV病害发生与检测及CarMV防治方法等方面综述了CarMV的研究现状。

香石竹斑驳病毒(CarMV)脱除对几种生理指标的影响

感染病毒的香石竹组培苗于(38.5±1)℃条件下热处理29d后,切取0.1～0.2mm的茎尖生长点无菌培养成苗后,经DAS-Elisa检测获得脱除香石竹斑驳病毒(Carnation mottle virus,CarMV)的香石竹脱毒苗,取脱毒苗与非脱毒苗的叶片,测量叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素、丙二醛(MDA)、干物质含量几种生理生化指标。结果表明,脱毒苗与非脱毒苗相比:(1)叶绿素和类胡萝卜素含量增加,具有较强的光合效率;(2)与抗性生理有关的MDA含量下降,衰老减缓;(3)光合物质的形成与积累增多,干物质含量增加。

香石竹斑驳病毒(CarMV)主要基因的分子变异分析

香石竹斑驳病毒(Carnation mottle virus,CarMV)是侵染香石竹的主要病毒之一。本试验从12个香石竹品种中获得CarMV分离物,通过RT-PCR扩增包含p7、p9、CP 3个主要基因的片段,并对扩增产物进行克隆测序。通过序列比对发现CarMV的p7、p9、CP 3个基因有较高的稳定性,p7基因核苷酸序列相似性为98.10%,氨基酸序列相似性为97.81%,其中氨基酸的第11和14位存在显著差异;p9基因核苷酸序列的相似性为98.80%,氨基酸序列相似性为99.13%,氨基酸序列在第4位差异明显;CP基因核酸序列相似性为97.58%,氨基酸的相似性为98.43%,氨基酸序列的第164和331位的变异存在相关性,整个CP变异位点比较分散。证实p7和p9的变异位点主要集中在暴露与寄主互作相关的N端,推测这是导致病毒变异,与寄主互作变异的重要位点。

香石竹斑驳病毒云南分离物全基因组序列测定和侵染性克隆构建

香石竹斑驳病毒(Carnation mottle virus,CarMV)是危害香石竹的一种重要病毒,本研究通过构建农杆菌介导的CarMV侵染性克隆来进一步研究该病毒基因功能。首先获得CarMV云南分离物全长序列,与报道的上海分离物相似性达到94.78%;将CarMV全长cDNA基因序列构建到具有35S启动子的双元表达载体pCV-nGFP,通过农杆菌浸润到本氏烟中瞬时表达,本氏烟系统叶片RT-PCR能检测到CarMV。试验结果表明,本研究构建Car-MV侵染性克隆通过农杆菌介导可快速高效侵染植物,可以用于病毒基因功能研究;同时CarMV云南分离物全长序列测定结果表明其属于P164 K331组群。

香石竹斑驳病毒的鉴定和RT-PCR检测

从表现为叶斑驳、花碎色症状的香石竹病株上获得一病毒分离物 ,电镜负染观察到直径为 2 8～ 33nm的球状粒子。病毒提取液经紫外光测定呈典型核蛋白吸收曲线 ,OD2 60 /OD2 80 =1 70 ;血清学反应与CarMV抗血清出现明显的沉淀线。通过以上实验结果 ,确定该病毒分离物为香石竹斑驳病毒 (carnationmottlevirus ,CarMV)。根据该病毒的RNA序列设计引物 ,对病健材料进行了RT PCR检测 ,结果从感病材料中扩增出大约 6 0 0bp的特异片段 ,而健康植物无此扩增带。将PCR产物连接 pGEM-T-easy载体 ,转化大肠杆菌JM 10 9,得到了含目的片段的重组子 ,经双脱氧序列分析 ,与Guilley报道的序列对应部分的核苷酸序列基本一致 (其同源性达 96 % ) ,最低检出病毒核酸含量为 5ng ,表明应用RT

香石竹斑驳病毒的抗血清制备及应用

用自昆明地区香石竹（Ｄｉａｎｔｈｏｕｓｃａｒｙｐｈｙｌｕｓ）植株上分离、提纯的香石竹斑驳病毒（ＣａｒＭＶ）为毒源，进行了腿肌肉、耳静脉、皮下和多方式多部位注射法等免疫家兔制备抗血清的比较实验．结果表明：多方式多部位注射免疫法得到的抗血清效价明显高于其它三种免疫方法所得的抗血清；获得的抗血清试管沉淀效价为１∶４０９６，琼脂糖双扩散效价可达１∶１０２４．将该抗血清用于５万余株香石竹的种苗、扦头的ＣａｒＭＶ检测中，结果如下：８１４２呈阳性结果，其中有６３９８株尚无病毒侵染症状（隐症）．这些隐症种苗隔离种植１２０ｄ后，５９０３株先后表现出病毒侵染症状，即抗血清对隐症带毒株检测的准确率达９２２６％．