金雀根通过阻断TRPM7抑制Erastin诱导的软骨细胞铁死亡

目的:探讨金雀根(Caragana sinica root,CSR)对Erastin诱导的软骨细胞铁死亡模型中铁死亡的影响及可能的机制。方法:培养C28/I2软骨细胞系,构建Erastin诱导铁死亡的细胞模型。采用MTT法检测细胞活力;Calcein/PI染色观察细胞活性;通过试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)及总谷胱甘肽(GSH)水平;荧光探针BODIPY 581/591 C11标记检测活性氧(ROS)水平;Rh123和JC-1染色观察线粒体膜电位(ΔΨm)的变化;Western blot检测铁死亡相关蛋白(ACSL4、GPX4)和TRPM7蛋白的表达。结果:Erastin处理可降低软骨细胞活力,增加细胞毒性,诱发氧化应激,破坏ΔΨm,并上调ACSL4蛋白表达,同时下调GPX4蛋白表达,诱导软骨细胞铁死亡。相反,金雀根可以使细胞活力恢复,降低氧化应激反应,从而抑制软骨细胞铁死亡。此外,金雀根能降低Erastin引起的TRPM7蛋白表达水平的升高。结论:Erastin诱发了C28/I2软骨细胞脂质过氧化反应,引起线粒体损伤及铁死亡;金雀根可能通过阻断TRPM7抑制软骨细胞铁死亡,从而发挥保护软骨细胞的作用。

金雀根对高尿酸血症大鼠肾脏Toll样受体信号通路的影响

目的:探讨金雀根对高尿酸血症大鼠模型肾脏Toll样受体(TLRs)信号通路的调控作用。方法:将60只SD大鼠预留10只作为对照组,剩余50只采用灌胃氧嗪酸钾(1.5 g/kg)与腺嘌呤(0.1 g/kg)造模,造模成功后随机分为模型组、别嘌醇组、金雀根高剂量组、金雀根中剂量组、金雀根低剂量组,每组10只。金雀根高剂量组、金雀根中剂量组、金雀根低剂量组分别灌胃金雀根水煎液(5.4 g/kg、2.7 g/kg、1.35 g/kg),别嘌醇组灌胃别嘌醇(50 mg/kg),对照组、模型组分别灌胃生理盐水(10 mL/kg),连续灌胃14 d。治疗结束后采集血清用于肾功能检测;采集肾脏组织样本进行苏木精-伊红(HE)法染色观察;采用蛋白质免疫印迹法(WB)检测肾脏Toll样受体4(TLR4)、Toll样受体4(TLR2)、髓样分化因子88(MyD88)、白细胞介素1β(IL-1β)蛋白表达情况。结果:经金雀根治疗后,大鼠肾脏炎症细胞浸润程度较模型组显著改善;模型组大鼠血清尿酸、尿素氮、肌酐含量均较对照组显著升高(P<0.01),治疗后,别嘌醇组、金雀根高剂量组、金雀根中剂量组、金雀根低剂量组较模型组显著下降(P<0.01);模型组大鼠肾脏组织中TLR2、TLR4、MyD88、IL-1β蛋白表达较对照组显著升高(P<0.05),经药物干预后别嘌醇组、金雀根高剂量组、金雀根中剂量组、金雀根低剂量组蛋白表达较模型组显著下调(P<0.05)。结论:金雀根水煎液可通过下调高尿酸血症大鼠肾脏组织TLRs/MyD88/IL-1β通路关键靶点的表达,抑制组织炎症,进而发挥降尿酸作用。

阳雀花根提取物对小鼠抗缺血缺氧能力的影响

为阳雀花根的开发利用提供理论依据,取昆明种小鼠,用阳雀花根提取物15g/(kg.d)、10g/(kg.d)和5g/(kg.d)灌胃给药,每日1次,连续灌胃7d,进行了小鼠在常压缺氧、低压缺氧、亚硝酸钠所致组织中毒缺氧、急性脑缺血和结扎小鼠双侧颈总动脉所致脑缺血试验,观察阳雀花根提取物对小鼠存活时间的影响。结果表明:小鼠连续灌胃15g/(kg.d)、10g/(kg.d)阳雀花根提取物对小鼠在常压缺氧、减压缺氧、亚硝酸钠所致组织中毒缺氧、急性脑和结扎双侧颈动脉缺血条件下的存活时间均有显著或极显著延长作用,即具有显著或极显著的抗缺氧和缺血作用。

金雀根中两种有效成分的分离鉴定及其生理活性测定

目的从豆科植物锦鸡儿Caragana sinica(Buc’hoz)Rehd的根(中药金雀根)中分离有效成分并研究其生理活性。方法用柱层析和薄层层析将有效成分从乙醇浸膏中分离,光谱分析鉴定其结构。用MTT法测定化合物Ⅰ的生理活性。结果分离得到两种有效成分,分别鉴定为kobophenol A(Ⅰ)和(-)-ampelopsin F(Ⅱ),化合物Ⅰ具有刺激成骨细胞增殖的生理活性。结论kobophenol A(Ⅰ)和(-)-ampelopsin F(Ⅱ)是金雀根中的两种有效成分,前者具有刺激成骨细胞增殖的活性。

金雀花扦插繁殖技术研究

以金雀花健壮插穗为试材,研究了不同浓度生根粉、不同插穗年龄、不同基质和不同扦插时间对金雀花扦插生根率、单株根数及根长的影响。结果表明:以1a生枝条作插穗,浓度为1.0g/L国光生根粉,以珍珠岩为扦插基质,金雀花扦插苗可以获得较好生根效果,生根率达92.0%,平均根数为3.1条,平均根长为6.2cm,结合生产实际,以5月份扦插最佳。

9种通络祛风中药提取物对黄嘌呤氧化酶的体外抑制活性研究

目的:研究9种通络祛风中药的提取物对黄嘌呤氧化酶(XO)的体外抑制活性,以筛选活性突出的中药提取物。方法:以黄嘌呤为底物、XO为反应酶,以别嘌醇为阳性对照,以三角风、石胡椒、山莓、金雀花根、紫藤根、牛迭肚根、梓木皮、凌霄花根、爬岩香等药材的水提物和甲醇提取物(以下简称"醇提物")以及活性提取物的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、水等萃取部位为对象,采用紫外分光光度法检测各样品对XO的抑制率,采用Graphpad prism 6.0软件计算半数抑制浓度(IC50)以筛选活性提取物/部位;采用双倒数法判断药材的酶抑制作用的类型。结果:9种中药共18个提取物中,500μg/mL各中药提取物(除石胡椒醇提物外),250μg/mL三角风、石胡椒、山莓、爬岩香的水提物和醇提物,250μg/mL梓木皮水提物,250μg/mL金雀花根、牛迭肚根、凌霄花根醇提物,125μg/mL金雀花根、牛迭肚根醇提物以及62.5μg/mL金雀花根醇提物对XO的抑制率均超过了50%;其中,金雀花根醇提物的IC50值为43.43μg/mL,低于其他药材的提取物,为活性提取物。金雀花根醇提物石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、水等萃取部位的IC50值分别为>200、193.35、7.67、14.80、>200μg/mL,其中乙酸乙酯提取部位的IC50值与阳性对照(5.11μg/mL)接近。金雀花根醇提物对XO的抑制类型为竞争-非竞争性抑制,不同于阳性对照的竞争性抑制。结论:金雀花根、牛迭肚根、石胡椒、山莓、爬岩香、三角风等醇提物及三角风、石胡椒、梓木皮等水提物对XO均具有一定的体外抑制活性,以金雀花根醇提物最强,且该提取物的乙酸乙酯萃取部位的抑制活性与别嘌醇相当,但抑制类型有所差异。

金雀花根中黄嘌呤氧化酶抑制活性成分研究

目的:探讨金雀花根中的黄嘌呤氧化酶(XO)抑制活性成分,明确其治疗痛风的物质基础。方法:采用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇依次对金雀花根95%乙醇提取物进行萃取,所得组分进行XO抑制活性评价后确定有效组分。利用分离纯化手段及波谱分析技术分离鉴定有效组分中的化学成分;通过XO抑制活性评价,确定活性成分。结果:乙酸乙酯和正丁醇组分均有不同程度的XO抑制活性,为金雀花根的有效组分。从金雀花根乙酸乙酯组分中分离得到17个二苯乙烯类化合物,分别鉴定为:carasinol A(1)、carasinol B(2)、carasinol C(3)、白藜芦醇(4)、白皮杉醇(5)、(+)-ε-viniferin(6)、pallidol(7)、(+)-α-viniferin(8)、caraphenol A(9)、3,4′-二羟基-5-甲氧基对苯乙烯(10)、(+)-isoampelopsin F(11)、carasiphenol C(12)、kobophenol A(13)、cararosin A(14)、diptoindonesin G(15)、vitisinol C(16)、3β-(3′,5′-二羟基苯基)-2α-(4″-羟基苯基)-二氢苯并呋喃-5-醛(17)。活性结果显示,化合物1~6、8~10、13和14对XO具有不同程度的抑制活性,并以化合物3~5、9和10的活性最为突出。结论:其中,化合物5、6、10、14~17为首次从金雀花中分离得到,化合物1~6、8~10、13、14为金雀花根的XO抑制活性物质,其中,化合物3~5、9和10为主要活性物质。金雀花根治疗痛风可能与其中存在XO抑制活性物质有关。

金雀花根水提物和乙醇提取物对小鼠高尿酸血症的影响

目的探讨金雀花根水提物(WCS)和乙醇提取物(ECS)对小鼠高尿酸血症(HUA)的影响。方法将昆明种小鼠随机分为正常对照组、模型组、别嘌醇组(阳性对照,5 mg/kg)、苯溴马隆组(阳性对照,7.8 mg/kg)和WCS低、中、高剂量组(38、75、150 mg/kg)以及ECS低、中、高剂量组(50、100、200 mg/kg),每组10只。除正常对照组外,其余小鼠连续7 d腹腔注射氧嗪酸钾联合灌胃次黄嘌呤建立HUA模型。于建模第3天,各给药组小鼠灌胃相应药物,正常对照组和模型组灌胃等体积生理盐水,每日1次,连续5 d。称定给药期间小鼠的体质量;末次给药1 h后,计算肝、肾、脾的脏器指数,测定血清尿酸(SUA)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCR)含量以及血清和肝组织中黄嘌呤氧化酶(XOD)活性;检测肝组织中XOD mRNA和蛋白的相对表达量以及肾组织中葡萄糖转运蛋白9(GLUT9)、尿酸转运蛋白1(URAT1)、有机阴离子转运蛋白1(OAT1)的相对表达量;观察肾组织的病理变化。结果各组小鼠肝脏指数和脾脏指数差异无统计学意义(P>0.05)。与正常对照组比较,除别嘌醇组外的各给药组小鼠的体质量和BUN、SCR含量差异无统计学意义(P>0.05);模型组和别嘌醇组小鼠的肾脏指数、SUA含量均显著升高(P<0.05);模型组小鼠血清和肝组织中XOD活性、肝组织中XOD mRNA和蛋白的相对表达量、肾组织中GLUT9和URAT1蛋白的相对表达量均显著升高(P<0.05),肾组织中OAT1蛋白的相对表达量显著降低(P<0.05)。与模型组比较,WCS和ECS各剂量组小鼠的肾脏指数均显著降低(P<0.05),肾组织病理损伤明显改善;各给药组小鼠的SUA含量、血清和肝组织中XOD活性、肝组织中XOD mRNA和蛋白的相对表达量、肾组织中URAT1蛋白的相对表达量均显著降低(P<0.05);苯溴马隆组和ECS高剂量组小鼠肾组织中GLUT9蛋白的相对表达量均显著降低(P<0.05);苯溴马隆组和WCS低、高剂量组以及ECS低剂量组小鼠肾组织中OAT1蛋白的相对表达量均显著升高(P<0.05)。结论WCS和ECS能够显著降低HUA模型小鼠SUA含量,改善其肾脏的病理状态,其作用机制可能与抑制XOD活性和尿酸重吸收、下调XOD蛋白和mRNA表达有关。

金雀根、黄芪及其配伍对糖尿病肾脏疾病大鼠JNK/SAPK信号通路的影响

目的探究金雀根、黄芪及其配伍对糖尿病肾脏疾病(DKD)模型大鼠肾脏保护作用及机制。方法将60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、恩格列净组(10 mg/kg)、金雀根组(3.1 g/kg)、黄芪组(3.1 g/kg)、金雀根加黄芪组(6.2 g/kg),除正常组外,各组大鼠行左侧肾摘除手术并腹腔注射链脲佐菌素(STZ,35 mg/kg)建立DKD模型,各组分别给予相应药物灌胃8周。期间定期检测FBG、24 h尿微量蛋白(24 h U-mAlb)。给药8周后处死大鼠,检测Scr、BUN、Cystatin C水平,HE、PAS、Masson染色观察肾组织病理改变,免疫组织化学法检测巨噬细胞标志蛋白CD68、iNOS表达,Western blot法检测肾组织JNK/SAPK通路蛋白JNK、p-JNK和TNF-α、IL-1β、ICAM-1表达,ELISA法检测血清TNF-α、IL-1β、ICAM-1水平。结果与正常组比较,模型组大鼠FBG、24 h U-mAlb、BUN、Scr、Cystatin C水平均升高(P<0.01),肾组织出现病理损伤,肾组织和血清TNF-α、IL-1β、ICAM-1水平升高(P<0.01),肾组织JNK和p-JNK蛋白表达升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组大鼠FBG、24 h U-mAlb、BUN、Scr、Cystatin C水平均降低(P<0.05,P<0.01),肾组织病理损伤减轻,肾组织和血清TNF-α、IL-1β、ICAM-1水平降低(P<0.01),肾组织JNK和p-JNK蛋白表达降低(P<0.01);金雀根组与黄芪组比较各指标均无明显变化(P>0.05);与金雀根组或黄芪组比较,金雀根加黄芪组各指标均有不同程度的改善(P<0.05,P<0.01)。结论金雀根、黄芪及其配伍可改善DKD大鼠肾功能,抑制M1型巨噬细胞,减少炎症因子分泌,减轻肾脏病理损伤,其机制可能与抑制JNK/SAPK信号通路激活有关,金雀根与黄芪配伍药效较好。

基于析因设计探讨金雀根及肾消通络方对糖尿病肾病大鼠肾组织CD68/iNOS和p38MAPK信号通路的影响

目的:基于析因设计观察金雀根及肾消通络方对糖尿病肾病大鼠肾组织巨噬细胞标记物CD68/诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、p38MAPK信号通路的影响。方法:将70只SD大鼠随机分为假手术组(S组)10只和造模组60只。造模组大鼠以单侧肾切除联合一次性腹腔注射链脲霉素(STZ)建立糖尿病肾病模型。根据析因设计原理将成模大鼠随机分为模型组(A0B0组)、肾消通络方组(A1B1组)、金雀根组(A1B0组)、肾消通络方减金雀根组(A0B1组),另设阳性对照恩格列净组(Em组)。S组和A0B0组给予等容积的1%羧甲基纤维素钠溶液灌胃,其余组给予相应药物灌胃8周。治疗前及治疗后每隔4周检测空腹血糖、24 h尿微量白蛋白(U-mAlb)。药物干预8周后处死大鼠,检测血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN);PASM-Masson染色观察肾脏病理,免疫组化法检测肾组织CD68、iNOS表达;Western Blot检测肾组织中骨调素(OPN)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、p38MAPK、p-p38MAPK/p38MAPK蛋白表达。结果:A0B0组大鼠空腹血糖、Scr、BUN和U-mAlb水平较S组显著升高(P<0.01),肾脏病理表现为肾小球基底膜增厚、系膜增生、系膜外基质增多、出现K-W结节,CD68、iNOS、OPN、TGF-β1、p-p38MAPK蛋白表达显著升高(P<0.01);经治疗后,Em组、A1B1组、A0B1组血清Scr、BUN、U-mAlb水平和肾组织CD68、iNOS、OPN、TGF-β1、p-p38MAPK/p38MAPK表达均有所下调,与A0B0组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);Em组空腹血糖水平显著下调(P<0.01),A1B1组、A0B1组和A1B0组空腹血糖与A0B0组比较差异无统计学意义。结论:金雀根和肾消通络方均可改善肾功能,降低尿蛋白,减轻糖尿病肾病肾脏炎性损伤,其机制可能与抑制巨噬细胞和p38MAPK信号通路激活,减少TGF-β1等炎症介质的释放有关。

阳雀花根提取物对小鼠抗运动疲劳能力的影响

目的:研究阳雀花根提取物对小鼠抗运动疲劳能力的影响。方法:取昆明种小鼠,随机分为空白对照组(给予等体积蒸馏水)和阳雀花根提取物高、中、低3个剂量组(15,10,5 g.kg-1.d-1),分别灌胃给药,15 d后进行负重游泳实验后处死,观察小鼠负重游泳时间、肝糖原(LG)、乳酸(LA)和尿素氮(BUN)等指标的变化。结果:阳雀花根提取物可明显提高小鼠负重游泳能力,与空白对照组比较,其高、中、低剂量对小鼠负重游泳时间延长率分别是93.24%,109.33%,24.66%;能增加小鼠肝糖原含量,其高、中剂量组糖原恢复率分别为30.33,23.37 mg.(100 g)-1.min-1;能降低血清乳酸和尿素氮含量,减少运动后体内乳酸和尿素氮的生成,并能加速体内乳酸和尿素氮的清除。结论:阳雀花根提取物可明显提高小鼠的耐运动疲劳的能力,具有明显的抗疲劳作用。