杨桃多酚氧化酶的部分纯化及其特性研究

杨桃多酚氧化酶粗酶液经过DEAE-Toyopearl650M离子交换柱层析,Butyl-Toyopearl650M疏水柱层析后,被纯化了21.6倍,回收率为45.2%。该酶能迅速地催化焦性没食子酸的酶促氧化反应,而对邻苯二酚、间苯二酚、对苯二酚和绿原酸则完全无催化活性。该酶对焦性没食子酸的Km值为7.92mmol/L,其最适pH为8.0,pH稳定性范围在pH4.0-11.0,最适温度为60℃,热稳定性相对较高,在≥90℃加热30min后仍残留约9%的酶活性。该酶的最佳抑制剂是抗坏血酸,其次是NaHSO3和盐酸-L-半胱氨酸,Cu2+、Zn2+、Ca2+等金属离子对该酶也有一定的抑制作用。

番石榴多酚氧化酶的部分纯化及其特性研究

番石榴PPO的粗提取液经过80％硫酸铵盐析和DEAE—Toyopearl 650M、CM-Sephadex C-50离子交换柱层析分离后，被纯化了约126倍，回收率为16．13％。该酶迅速地催化焦性没食子酸的酶促氧化反应，而对对苯二酚和绿原酸则完全无催化活性。该酶对焦性没食子酸的Krn值为4．6mmol/L，其最适pH为7．5，pH稳定性范围在pH4．0--11．0，最适温度为50℃，热稳定性相对较高，在≥90℃加热10min后仍残留约15％的酶活性。该酶的最佳抑制剂是抗坏血酸和NaHSO3，其次是植酸、盐酸-L-半胱氨酸、柠檬酸，Ca^2＋、Mg^2＋等金属离子对该PPO也有较强的抑制作用。

苹果多酚氧化酶的纯化与表征(英文)

运用丙酮浸漬干燥、磷酸盐缓冲液提取、低温离心、硫酸铵沉淀、DEAE-Sephadex(A-50)、Sephadex(G-75)和DEAE-celluse(DE-52)层析等方法从苹果中分离获得一种新的含铜酶蛋白,该酶被命名为多酚氧化酶Ⅱ(polyphenoloxidaseⅡ,PPOⅡ),纯化倍数是215,纯化收率是23%。PAGE、SDS-PAGE和MALDI-TOF等技术用于测定所获的酶的纯度和分子量。在PAGE和SDS-PAGE均显示一条带,表明PPOⅡ只由一个亚基组成,且已达到单一组分(MALDI-TOF的结果更证实了这一点)。SDS-PAGE和MALDI-TOF的结果都表明PPO的分子量为38204Da。pH值对酶活性和稳定性研究的结果显示,从pH值4.0～7.0随着pH值的增加,酶活性也不断增加;从pH值7.0～11.0,酶活性不断降低。PPOⅡ的最适pH值为6.6最适温度为30℃。

桑尺蠖多酚氧化酶的纯化及其部分生物化学性质

经硫酸铵分级沉淀,Sephadex G-100凝胶过滤等步骤,使桑尺蠖Phthonandria atrineata(Butler)多酚氧化酶纯化,纯化倍数为6.28倍.该酶对焦性没食子酸、邻苯二酚和L-多巴的Km值分别为9.64 mmol/L、6.82 mmol/L和4.30 mmol/L.这种多酚氧化酶在pH=7.0,37℃时活性最高.利用多种氧化酶抑制剂对该酶活性的抑制结果表明,所用抑制剂对其均有不同程度的抑制作用.此外,该酶对EDTA和金属离子比较敏感.

刺苦草根状茎多酚氧化酶的纯化及其特性的研究

刺苦草根状茎PPO粗提液经过30%～80%(NH4)2SO4盐析、DEAE Sephadex A-50、SephadexG-75柱层析后,得到纯化的多酚氧化酶,纯化倍数为10.66倍,回收率为21.25%。纯化后的酶液经SDS-PAGE电泳确定为单一条带,相对分子质量约为33。对其特性研究表明,以邻苯二酚为底物,最适pH值为6.0,最适温度为50℃,Km=0.0344mol/L,90℃热处理10min可完全钝化PPO的活性,抗坏血酸、NaHSO3、草酸、焦磷酸钠、柠檬酸、L-苹果酸、β-环状糊精能有效抑制PPO的酶活性。

香菜叶多酚氧化酶的分离纯化与部分酶学性质研究

新鲜香菜叶经匀浆、缓冲液提取、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析,获得电泳纯的多酚氧化酶。该酶比活力达到5 622.95 U/mg,酶活回收率为3.90%,纯化倍数为126.08;全酶分子质量为111.10 k D,亚基分子质量为55.60 k D;最适温度为37℃,最适p H值为6.5;在25~45℃及p H 6.0~7.0范围内有较好的稳定性;在最适条件下测得其Km值为4.04×10-2 mol/L;甲醇、乙醇、异丙醇、氯仿及柠檬酸、抗坏血酸、Ca2+、Hg2+、Ba2+对其有抑制作用,Co2+、Pb2+对其具有一定的激活作用。

肥城桃多酚氧化酶的部分纯化及其特性

经（ＮＨ４）２ＳＯ４分级沉淀、透析等步骤，使肥城桃多酚氧化酶部分纯化，纯化倍数为５．１１倍。该酶对邻苯二酚、焦酚和ＤＬ──二羟基苯丙氨酸显示活性，其中焦酚是最佳底物。这种多酚氧化酶的最适ｐＨ值为６．８，在３５℃下放置３０ｍｉｎ其活性不会降低。以不同的化合物作为抑制剂对该酶的催化反应进行试验，结果表明，硫脲和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３·５Ｈ２Ｏ的抑制作用很强，在０．４３ｍＭ浓度下，抑制率分别为８０．５％和１００％。

槟榔果仁多酚氧化酶分离纯化及其酶特性研究

以槟榔果仁为试材,经pH6.8磷酸缓冲溶液(PBS)提取多酚氧化酶(PPO)粗酶液,采用(NH4)2SO4分级沉淀后,进一步通过DEAE-Sepharose Fast Flow和Phenyl Sepharose 6 Fast Flow柱层析,获得PPO纯化酶液。经鉴定其纯度达到电泳纯,相对分子质量为29.2 ku。在此基础上,对提取的PPO进行酶学特性研究,结果表明,槟榔果仁中PPO最适温度为20℃,最适pH为7.0;以邻苯二酚为底物,该酶的最大反应速度(Vmax)为140.84 U/mL·min,Km为3.22 mmol/L。

多酚氧化酶的分离纯化及生理功能的研究进展

多酚氧化酶是一种含铜的金属酶,广泛存在于动物、植物、细菌和真菌中。多酚氧化酶催化的褐变反应对植物的采后加工和贮藏过程具有深刻影响,其对生物体发挥的免疫作用、生物和非生物胁迫也有着重要意义。该文综述了国内外多酚氧化酶提取和纯化的研究进展,并对其理化性质进行比较,总结了高活性多酚氧化酶的分离纯化方法,以期为深入认识多酚氧化酶在酶促褐变和植物生理生化中的作用提供参考。