缩骨鲫(Carassius auratus sogu var.)MC4R克隆、组织分布以及与生长相关SNPs的筛选

黑色素皮质素受体-4(Melanocortin reporter-4,MC4R)是G蛋白偶联受体超家族成员,在能量调控中发挥重要作用。本实验采用同源克隆以及染色体步移对缩骨鲫(Carassius auratus sogu var.)MC4R基因进行克隆,对其核苷酸序列和推测的氨基酸序列进行生物信息学分析,通过Real-time PCR对其m RNA组织分布进行研究,并对缩骨鲫MC4R编码区潜在的与生长相关的SNPs进行筛选。本实验克隆MC4R基因组基因长度为2854bp,只包含一个外显子,长度为981bp,共编码326个氨基酸,MC4R共有七个跨膜结构,是较为稳定的疏水蛋白。缩骨鲫MC4R与鲫鱼的MC4R氨基酸序列的同源度最高达到99.3%,与MC3R和MC5R同源度相对其他MCRs成员较高。缩骨鲫MC4R m RNA在脑中表达量最为显著,眼中次之,肌肉,卵巢和肾脏中表达较少,在鳃、肠、心脏和肝胰腺中微量表达。在MC4R的CDs区内检测到6个与生长潜在相关的SNPs:两个错义突变(A199G和A881C),4个同义突变(A123G,C231T,A444G和C480T)。本实验可为缩骨鲫生长和发育的分子机制研究以及遗传育种提供基础资料。

彭泽鲫的分子遗传分析及其与方正银鲫A系的比较

Genetic homogeneity between Pengze crucian carp and strain A of silver crucian carp was studied by using transferrin, isozyme and RAPD markers. The studied individuals of Pengze crucian carp showed transferring patterns were the same of silver crucian carp A strain while distinct from those of other crucian carp populations. As far as isozyme is concerned, the MDH, LDH and EST are all of the same with only slight differences in SOD between them. The RPAD patterns clearly indicated high homogeneity among 16 individuals(6 sampled from individuals of two years old and the others aged one) from crucian carp of Pengze and 5 individuals from strain A of silver crucain carp. Nearly indentical banding patterns were observed among all individuals. Average genetic distance within all the individuals is only 0.011, suggesting crucian carp of Pengze might possess indentical genetic background with strain A of silver crucian carp.

盐度对异育银鲫血红蛋白和肌肉蛋白含量的影响

以血红蛋白含量和肌肉蛋白含量为指标,研究了养殖异育银鲫(Carassius auratus gibeliovar.E′erqisi)对水环境盐度的适宜性。结果显示:1.5‰和3‰的水环境盐度可以显著提高异育银鲫血红蛋白含量(P<0.05),并可略微提高异育银鲫肌肉蛋白的含量(P>0.05);而6‰、9‰和12‰的水环境盐度则会使异育银鲫血红蛋白含量显著下降(P<0.05),且盐度愈高,血红蛋白含量下降幅度愈大;此外,6‰、9‰和12‰的水环境盐度还会引起异育银鲫肌肉蛋白含量发生不同程度的下降,其中6‰盐度只引起异育银鲫肌肉蛋白含量轻微下降(P>0.05),而9‰和12‰盐度则会引起异育银鲫肌肉蛋白含量发生显著下降(P<0.05)。结论:3‰以下的水环境盐度适宜异育银鲫的健康养殖,而6‰以上的水环境盐度则不利于异育银鲫的健康养殖。

红鲫(♀)×湘江野鲤(♂)F_2和F_3的染色体研究

采用血细胞培养制片法和肾脏细胞直接制片法对红鲫 (♀ )×湘江野鲤 (♂ )杂交种F2 和F3 代的染色体数目和核型进行了比较分析 ,得出F2 代染色体数目为 10 0条 ,染色体组型为 :2 2m +34sm +2 2st +2 2t ,NF =156;F3代染色体数目为 4n =2 0 0 ,染色体组型为 :4 4m +68sm +44st +44t ,NF =312。为证明红鲫×湘江野鲤杂交后代由异源二倍体转变为异源四倍体发生于F2 与F3代之间提供了直接证据。

澎泽鲫幼鱼对盐度和碱度耐受性的研究

试验研究了盐度和碱度对澎泽鲫幼鱼的急性毒性,结果为24,48,72,96 h其盐度的半致死浓度分别是9.996,7.871,6.879,6.676 g·L-1,碱度的半致死浓度分别是71.71,69.85,60.81,59.87mmol·L-1.盐碱混合毒性试验中的AI指数表明盐度和碱度在一定程度上存在着协同作用.

芙蓉鲤鲫(芙蓉鲤♀×红鲫♂)的性腺组织学及繁殖性能研究

采用解剖观察、组织切片及人工催情等方法,研究芙蓉鲤鲫(Cyprinus capiofurong.♀×Carassius auratus red var.♂)的性腺发育及繁殖性能。结果显示:解剖观察,芙蓉鲤鲫性腺发育异常的个体占83.64%,性腺外观基本正常的个体占16.36%。组织学观察,芙蓉鲤鲫性腺可分三类:两性嵌合体占21.13%,其中以精巢为主的16.90%,以卵巢为主的4.23%,它们性腺发育迟缓,在繁殖季节成熟系数也没有明显变化,性腺多为一侧发育或两侧不对称,两种性腺细胞均不能成熟;雌性个体占40.84%,在生殖季节卵巢可发育到第IV时相,但未见其细胞核发生偏移;雄性个体,占38.03%,在生殖季节只能发育到精子细胞阶段,不能产生成熟的精子。经人工催产,芙蓉鲤鲫少部分个体有发情产卵行为但不能正常受精。结果表明芙蓉鲤鲫为两性败育类型。

金鱼线粒体DNA Cytb基因序列分析及与鲫鱼亲缘关系探讨

通过对金鱼(Carassius auratus var.)的5个代表品种草金(grass goldfish)、红龙睛(red dragoneye goldfish)、鹤顶红(red-head wen goldfish)、水泡(blisters-eyegoldfish)、黑寿(white-head oval goldfish)线粒体DNA细胞色素b基因全序列进行测定,结果发现金鱼Cytb基因全序列1141bp,其中T、C、A、G4种碱基含量分别为29.1%,27.8%,28.4%,14.5%,A+T的含量(57.8%)高于C+G的含量(42.2%)。草金、红龙睛、鹤顶红、水泡、黑寿Cytb基因全序列一样。结果表明,细胞色素b基因在金鱼种内是相当保守的,草金、红龙睛、鹤顶红、水泡、黑寿起源于同一祖先。将鲫鱼和金鱼线粒体Cytb基因序列比较分析,同源性达97.9%,应该还在同一种的水平上。

长尾琉金金鱼形态性状的相关与通径分析

测定了637尾1龄长尾琉金金鱼体重、体长、体高、头长、尾柄长、尾柄高、胸鳍长、腹鳍长、背鳍高、臀鳍长、尾鳍长等11个性状,计算性状间的相关系数,同时采用通径分析方法计算以形态性状为自变量对尾鳍长作依变量的通径系数、决定系数,对各性状的影响大小进行剖分。结果显示,尾柄高对尾鳍长的直接影响最大,胸鳍长和尾柄长对尾鳍长的直接影响较小。利用逐步回归分析方法建立了以尾柄长、尾柄高、胸鳍长为自变量估计尾鳍长的多元回归方程为y=-2.573+4.200x1+0.647x2+2.410x3。

洞庭青鲫等5个鲫品系线粒体ATPase基因序列的比较分析

运用PCR扩增、克隆、测序等技术对洞庭青鲫(Carassius auratus var.Dongtingking)、彭泽鲫(C.auratusvar.Pengze)、普通鲫(C.auratus)、红鲫(C.auratus var.red)、日本白鲫(C.auratus cuvieri)等5个鲫品系线粒体DNA ATPase8和ATPase6基因序列的碱基组成、变异情况和分子系统进化进行了比较分析。结果显示:5个鲫品系线粒体DNA ATPase8/6基因序列碱基的平均组成为A:32.6%,C:25.5%,G:12.6%,T:29.4%,序列分歧率为0.5%～4.0%,其中普通鲫和日本白鲫的分歧率最大(4.0%),洞庭青鲫与彭泽鲫的分歧率最小(0.5%)。在5个鲫品系中,红鲫和普通鲫的亲缘关系较近,洞庭青鲫与彭泽鲫亲缘关系较近,而它们与白鲫的亲缘关系则较远,推测红鲫、洞庭青鲫和彭泽鲫均起源于普通鲫。5个鲫品系在线粒体DNA ATPase8/6基因序列碱基位点上的差异可以作为区分不同鲫品系的分子遗传标记。

白金丰产鲫含肉率及肌肉营养成分分析

为评价新品种白金丰产鲫Carassius auratus Var.Pengzenensis♀×Cyprinus acutidorsalis Wan♂的含肉率和肌肉营养成分,选取体质量为(580.33±198.02)g的1龄白金丰产鲫进行分析,测定其含肉率、一般营养成分、氨基酸组成和脂肪酸组成。结果表明:白金丰产鲫含肉率为66.22%,肌肉中水分含量为79.90%,粗蛋白质含量为17.61%,粗脂肪含量为1.71%,灰分含量为1.13%;采用酸水解法共检测出17种氨基酸,其中必需氨基酸占氨基酸总量的39.50%,呈味氨基酸占总氨基酸含量的37.12%;必需氨基酸评价显示,白金丰产鲫的必需氨基酸评分均大于1,必需氨基酸组成符合FAO/WHO模式标准;共检测到23种脂肪酸,其中饱和脂肪酸(SFA)7种,不饱和脂肪酸(UFA)16种,不饱和脂肪酸(UFA)含量为70.09%,其中的多不饱和脂肪酸(PUFAs)含量为42.48%。研究表明,白金丰产鲫含肉率高,必需氨基酸含量丰富、组成合理,脂肪酸种类丰富,不饱和脂肪酸特别是高度不饱和脂肪酸含量高。

饲料糖对彭泽鲫生长和生理机能的影响

用分别含20%(低)、40%(高)葡萄糖和糊精的等氮(粗蛋白为35%风干物质)等能(16.4kJ/g)饲料饲养平均尾重为(2.40±0.16)g澎泽鲫Carassius auratus var. Pengze 16周,研究饲料糖种类和水平对鲫鱼生长、抗氧化力、非特异性免疫力和镉耐受性的影响,探讨鲫鱼对糖的利用能力及糖的生理功效。另用相同的饲料在相似的条件下饲养初重为(7.14±0.85)g的鲫鱼8周后胸腔注射12.5mg/kg体重的氯化镉溶液,观察其24h的存活率。实验结果表明饲料糖种类和水平都没有对鲫鱼的生长、脾指数和肝指数造成显著影响。高糖组糖化血红蛋白GHb值较高(P<0.05)。肝胰脏超氧化物歧化酶SOD活性、血浆SOD活性和总抗氧化力T-AOC各组差异不显著,肝胰脏的T-AOC为葡萄糖组显著高于糊精组(P<0.05)。补体溶血活性、血浆溶菌酶活性各组差异不显著。红细胞脆性高糖组显著低于低糖组(P<0.05)。镉染毒存活率各组差异不显著。上述结果提示40%饲料糖对鲫鱼生理功能没有不良影响,一定量的饲料糖有利于提高鲫鱼的抗氧化力。

野生鲫鱼和五个金鱼代表品种的肌肉蛋白电泳分析

本工作用琼脂糖等电聚焦（Ａｇａｒｏｓｅ－ＩＥＦ）、ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）以及将两者结合起来的双向电泳技术，对野生鲫鱼（Ｃａｒａｓｓｉｕｓａｕｒａｔｕｓ）和５个金鱼品种（Ｃａｒａｓｓｉｕｓａｕｒａｔｕｓｖａｒ．）的亲缘关系进行了种内分化的比较研究。其结果是：（１）鲫鱼和金鱼各品种的肌肉蛋白的大量组分是相似的，验证了金鱼由野生鲫鱼演化而来的推断；（２）在鲫鱼演化到金鱼的过程中，出现了一些新的蛋白质成分，但也有些蛋白组分消失了，并且有从野生鲫鱼经过金鲫鱼这个中间环节演化到各品种金鱼的趋势；（３）从３种电泳结果的聚类分析和电泳图谱上可以看出，野生鲫鱼首先演化为金鲫，再演化为草金鱼，通过金鲫、草金鱼两个环节后发展为文种鱼，最后演化成龙种鱼（如红龙睛）和蛋种鱼（如红头蛋鱼）两个关系很近的类型。

野生鲫和五个金鱼品种的判别分析和聚类分析

对野生鲫鱼（Ｃａｒａｓｓｉｕｓ ａｕｒａｔｕｓ）和五个金鱼品种（Ｃａｒａｓｉｕｓ ａｕｒａｔｕｓ ｖａｒ．）的亲缘关系进行了比较研究。（１）两组判别分析表明，以１７个形态变异性状的指标衡量野生鲫鱼和金鱼以及金鱼各品种之间的差异，说明金鱼的种下分化是明显的（Ｆ〉〉Ｆ０．０１）。（２）对６个品种（包括鲫鱼）各２０尾鱼（计１２０个个体）进行１７个指标的聚类分析，结果大部分个体（占各品种的５０￣１００％）

盐度对异育银鲫呼吸和氨氮排泄生理的影响

研究了异育银鲫(Carassius auratus gibeliovar. E′erqisi)从淡水向盐度1.5‰、3‰、6‰、9‰、12‰突变与适应过程中的呼吸和氨氮排泄生理的变化规律。结果表明:盐度突变开始时,异育银鲫的耗氧率和排氨率随外界盐度的升高而增大,随盐度作用时间延长,耗氧率和排氨率升到最大值后又开始下降并最终维持在稳定水平,但开始下降的时间和下降的幅度以及最终的稳定水平与外界盐度有关。盐度1.5‰和3‰处理组在作用12h时耗氧率升到最大值,此后下降,于第3天后保持在比淡水对照组略低的稳定水平,但二者差异不显著(P>0.05);盐度6‰和9‰处理组在作用到第3天后才开始缓慢下降,并分别于第10、15天时保持在显著高于淡水对照的稳定水平(P<0.05);盐度12‰处理组也在第3天后下降,到第10天后保持在比淡水对照组略低的稳定水平,但二者差异不显著(P>0.05)。各盐度处理组的排氨率均在盐度作用24h时达到最大值,其中盐度1.5‰处理组的变化不显著(P>0.05),其他各组均显著升高(P<0.05),并都于第10天时下降到稳定水平,其中盐度3‰处理组的稳定水平略低于对照组(P>0.05),盐度6‰、9‰、12‰处理组的稳定水平显著高于对照组(P<0.05)。

中国几个金鱼品系血清抗原性的探讨

利用醋酸纤维薄膜电泳、ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳比较了鲫和几个金鱼品系（金鲫、草金鱼、红文鱼、红龙睛和红头蛋鱼）的血清蛋白成分，并用兔抗鲫血清对这几个品系进行了双向免疫扩散和对流免疫电泳分析。结果表明：⑴鲫和几个金鱼品系的血清蛋白成分及抗原性在很大程度上相似；⑵对电泳图谱的详细分析以及用高效价抗血清测定可以看出它们之间还存在不同程度的差别，并与演化地位相当一致。

基于微卫星标记的洞庭青鲫与三个鲫品系群体遗传多样性分析

选取12个微卫星标记对洞庭青鲫(Carassius auratus var.Dongtingking)、野生二倍体和三倍体鲫(C.auratus)、彭泽鲫(C.auratus var.pengzesis)4个鲫品系群体进行遗传多样性检测。在12个基因座位中,共检测出78个等位基因,其中14个为共有等位基因;每个座位检测到等位基因4—12个,平均等位基因数6.58个;4个鲫品系群体的平均观测杂合度(Ho)分别为0.633、0.750、0.800、0.717;平均期望杂合度(He)分别为0.502、0.713、0.757、0.602;平均多态信息含量(PIC)分别为0.364、0.599、0.637、0.470。上述结果表明,野生二倍体和三倍体鲫的遗传多样性较为丰富,以三倍体鲫的遗传多样性为最高;而洞庭青鲫和彭泽鲫养殖群体存在杂合度降低,遗传多样性下降的现象,以洞庭青鲫的遗传多样性为最低。基于遗传距离构建的UPGMA聚类树表明,洞庭青鲫与彭泽鲫两个养殖群体聚为一支,而二倍体与三倍体野鲫群体聚为另一支,说明洞庭青鲫与彭泽鲫之间亲缘关系较近,野生二倍体与三倍体鲫之间的亲缘关系较近。研究不同倍性鲫品系的遗传多样性,对于探讨鲫的多倍体起源演化以及鲫品系的种质资源保护和选育种实践具有重要意义。

不同养殖模式下雌核发育彭泽鲫雌雄鱼性别分化相关基因的表达差异

将同一批经雌核发育产生的F1彭泽鲫(Carassius auratus var.pengze)仔鱼(Pcc)分别置于实验室和池塘进行养殖,结果发现,与池塘养殖雄鱼比例极少相比,实验室养殖中出现了高比例的雄鱼。实验室养殖Pcc F1雄雌比例为(43.6±3.0)%,而池塘养殖Pcc F1雌雄比为(4.7±1.2)%。本研究比较了不同养殖模式下雌雄鱼性腺分化相关基因的表达,结果发现除Pcc-vasa、Pcc-esr1和Pcc-esr2b外,实验室养殖Pcc F1精巢中性腺分化、受体、类固醇合成酶类基因表达极显著(P<0.01)或显著(P<0.05)高于卵巢中对应基因的表达量。对于池塘养殖的Pcc F1,除Pcc-amh、Pcc-dmrt1b、Pcc-dmrt1c、Pcc-foxl2、Pcc-vasa和Pcc-esr2b外,精巢中性腺分化和受体基因表达极显著(P<0.01)或显著(P<0.05)高于卵巢中对应基因的表达量;但精巢中绝大部分类固醇合成酶类基因的表达量极显著低于卵巢(P<0.01)。实验室和池塘养殖Pcc F1雌雄出现差异表达的基因主要是类固醇合成酶类及调控芳香化酶的转录因子,这些基因的差异表达可能与雌雄激素的合成或调控相关,从而导致不同养殖模式出现不同比例的雄鱼。

肽聚糖对鲫鱼嗜水气单胞菌灭活疫苗免疫增强效果的研究

为了探讨肽聚糖在鱼类抗嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,AH)感染中的免疫佐剂作用,用添加A3α肽聚糖的饲料投喂接种F-AH疫苗的彭泽鲫(Carassius auratusvar.pengze);通过测定鲫白细胞吞噬活性、血清和体表黏液溶菌酶活性、抗体效价以及活菌攻毒后的免疫保护率,证明肽聚糖与F-AH疫苗联合使用,鲫体表黏液和血清溶菌酶活性、白细胞吞噬活性、抗体效价以及活菌攻毒后的免疫保护率均显著提高,表明A3α肽聚糖是F-AH疫苗的良好佐剂,能增强鱼类F-AH疫苗免疫应答。

淇河鲫生长激素基因的克隆与原核表达

【目的】克隆、分析淇河鲫生长激素(Growth hormone,GH)基因,并进行原核表达。【方法】采用RT-PCR方法对淇河鲫GH基因cDNA进行克隆,对其序列进行分析,并构建其原核表达载体PQE30-GH,进行原核表达。【结果】淇河鲫GH基因长633 bp,与鲫鱼、鲤鱼、团头鲂和斑马鱼具有较高的同源性,且处于同一进化分支上;与胡子鲇、鳗鲡、家鼠和人等的同源性较低。构建的表达载体PQE30-GH含有GH基因完整的阅读框架(ORF),转化到大肠杆菌DH5α中,经终浓度0.1 mol/L IPTG诱导后成功地表达出24 ku的融合蛋白。【结论】淇河鲫GH基因克隆成功。淇河鲫GH基因可以在原核中诱导表达,但表达量较低。

彭泽鲫雌核发育的细胞学研究

通过对彭泽鲫(♀)×彭泽鲫(♂)的受精细胞学观察,彭泽鲫卵子受精后,具有与两性生殖鱼类相同的精子入卵过程和排出极体,但精子入卵后精核始终不解凝,也不与雌性原核融合。对精母细胞成熟分裂中期染色体观察表明,彭泽鲫精母细胞在进行成熟分裂时未发生同源染色体配对,全部为单价体形式,其精子形成过程中第一次成熟分裂异常;对精子与体细胞DNA含量进行比较,体细胞DNA含量与精子DNA含量比为2.218:1,精子DNA含量发生了减半。以上实验结果说明彭泽鲫为雌核发育鱼类。同时,作者对卵核染色体倍性保持稳定的方式及精卵不同的形成机制进行了初步的分析。