毕赤酵母表达重组红林蚁AChE高密度发酵工艺研究

【目的】优化毕赤酵母高密度生产重组红林蚁乙酰胆碱酯酶(AChE)的发酵条件,为AChE在农药残留检测中应用提供酶源。【方法】采用毕赤酵母表达系统,选用高表达AChE的重组子X33/pPICZαAAChE,对毕赤酵母高密度生产重组红林蚁AChE的发酵条件进行优化,确定最佳发酵pH值、温度、溶解氧、补料流加速率等因素。【结果】毕赤酵母表达重组红林蚁AChE高密度发酵工艺的最佳参数:pH5.0、溶解氧30%、温度29℃、转速500 r/min、罐压0.06 MPa,甲醇诱导72~96 h时发酵液上清AChE活性增长最快。从发酵结果看,发酵结束菌体湿重可达280 mg/mL,发酵罐内甲醇诱导96 h酶活性最高,达6 000 U/mL,是摇瓶诱导表达的8倍。【结论】毕赤酵母表达系统最佳发酵工艺能实现红林蚁AChE的高密度发酵生产,降低AChE提取成本。

几种氨基甲酰化乙酰胆碱酯酶(AChE)的体内代谢过程

目的：观察吡啶斯的明、毒扁豆碱、卡巴呋喃和灭多威四种氨基甲酸酯类化合物其氨基甲酰化乙酰胆碱酯酶（AChE）的体内代谢过程，为氨基甲酸酯类杀虫剂中毒诊断和用药提供理论依据。[f11]方法：[f0]以小鼠为实验对象，其红细胞AChE为酶源，上述四种氨基甲酸酯类化合物为酶抑制剂，改进微量DTNB法测定中毒酶活性，观察不同时间小鼠体内AChE酶抑制率，并对时间进行曲线拟合，同时计算半衰期。[f11]结果：[f0]酶抑制作用于30-45min达到最大，中毒酶体内代谢过程以二甲基氨基甲酰化AChE，即吡啶斯的明中毒酶最慢，半衰期为142.7min；而单甲基氨基甲酰化AChE代谢则相对较快，毒扁豆碱、卡巴呋喃和灭多威中毒酶半衰期分别为102.7min、82.5min、和31.1min，数小时（1.7～7.6小时）后，中毒酶活性可恢复90%以上。[f11]结论：[f0]氨基甲酸酰化AChE的体内代谢过程除与氨基甲酸酯类化合物的结构有关外，还可能有其他的决定因素，且代谢过程较磷酰化AChE快；同时，灭多威作用机理的特殊性也值得临床重视。

体外氯磷定等对氨基甲酰化乙酰胆碱酯酶(AChE)的影响

目的∶观察２－ＰＡＭ·Ｃｌ、ＬüＨ６、ＴＭＢ４、ＨＩ－６四种肟类药物分别对三种氨基甲酰化酶自动重活化过程的体外作用。方法∶以小鼠红细胞乙酰胆碱酯酶为酶源，吡啶斯的明、毒扁豆碱、灭多威为酶抑制剂，改进微量ＤＴＮＢ法测量胆碱酯酶活力。结果：在高浓度条件下，四种肟类药物对三种氨基甲酰化酶的自动重活化过程几乎都有不同程度的促进作用，而当浓度下降时，这种促进作用逐渐减弱，甚至出现抑制作用；其中双吡啶肟作用优于单吡啶肟，而双吡啶肟两个吡啶环之间的连接基团及肟基数目不同对不同的氨基甲酰化酶的作用效果也不同。结论∶认为氨基甲酸酯类化合物中毒时肟类药物的应用不应绝对禁止。

棉蚜乙酰胆碱酯酶对杀虫剂不敏感的分子机制

棉蚜是第一个用RT-PCR方法发现具有2个不同乙酰胆碱酯酶(AChE)基因的昆虫,2个基因编码的氨基酸序列的相似性仅48%。进化分析表明,两者相距甚远,分化于昆虫纲出现以前。从棉蚜2个AChE中发现多个抗药性相关突变位点,但功能表达证实AChE-1可能是两类杀虫剂的主要作用靶标,AChE-1的S431F和A302S突变导致对多种有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂的敏感性降低,但对某些杀虫剂品种的敏感性反而升高。并讨论了需进一步研究的问题。

乙酰胆碱酯酶作为水体中杀虫剂污染生物标志物的评价与展望

随着"污染控制与治理为主的治理时代"逐渐向"预防为主的环境管理时代"迈进,乙酰胆碱酯酶用于水体中杀虫剂污染的早期预警研究已成为生态毒理学的热门领域之一。本文以近年来该领域的研究成果为基础,指出了乙酰胆碱酯酶作为监测水体中杀虫剂污染生物标志物的特异敏感性优势,并针对该生物标志物应用过程中尚未解决的难题提出了今后的发展方向。