羧甲基茯苓多糖的制备及体内抗肿瘤作用的实验研究

目的 :探讨羧甲基茯苓多糖的制备方法及体内抗肿瘤作用。方法 :选择性氧化茯苓菌发酵液得羧甲基茯苓多糖 ,检测三个剂量的羧甲基茯苓多糖 (2 mg/ ml、4mg/ ml、6mg/ ml)对 H2 2 荷瘤小鼠淋巴细胞转化率和 NK细胞杀伤活性以及血清中 TNF-α含量的影响。结果 :羧甲基茯苓多糖三个剂量组均可提高荷瘤小鼠的淋巴细胞转化率和 NK细胞杀伤活性 ,与生理盐水组相比差异有显著性 (P<0 .0 5) ,中剂量组抗肿瘤的效果显著 ,与其他两组相比差异有显著性 (P<0 .0 5) ;羧甲基茯苓多糖三个剂量组均可提高荷瘤小鼠血清中 TNF-α的含量 ,与生理盐水组相比差异有显著性 (P<0 .0 5) ,但三个剂量组之间比较差异无显著性 (P<0 .0 5)。结论 :羧甲基茯苓多糖可改善荷瘤小鼠的免疫功能 ,具有抗肿瘤作用 ,且功效与作用剂量间有一定的关系 。

羧甲基茯苓多糖的抗氧化活性研究

研究羧甲基茯苓多糖的体内外抗氧化作用。通过测定羧甲基茯苓多糖的总还原能力及对羟基自由基、超氧阴离子和过氧化氢的清除作用,证明羧甲基茯苓多糖的体外抗氧化作用;通过测定小鼠血清和肝脏中的MDA含量和SOD活性的变化,研究了羧甲基茯苓多糖对小鼠体内的抗氧化作用。羧甲基茯苓多糖可以抑制小鼠血清和肝脏中MDA的生成,增强小鼠血清和肝脏中SOD的活性;羧甲基茯苓多糖具有一定的还原能力,可以清除羟基自由基、超氧阴离子和过氧化氢。羧甲基茯苓多糖具有明显的抗氧化作用。

羧甲基茯苓多糖抗疲劳作用研究

研究羧甲基茯苓多糖(CMP)对小鼠抗疲劳作用。将雄性小鼠随机分为5组,分别为空白对照组、阳性对照组、CMP低剂量组(35 mg/(kg bw·d))、CMP中剂量组(70 mg/(kg bw·d))、CMP高剂量组(140 mg/(kg bw·d)),灌胃给药30 d后,测定小鼠负重的游泳时间、血清尿素氮和血乳酸等指标。结果表明,与空白对照组相比,CMP可以延长小鼠负重游泳时间(P<0.05);CMP中、高剂量组可以显著降低血清尿素氮、血乳酸含量并提高肝脏SOD活性(P<0.05)。CMP对小鼠具有很好的抗疲劳作用,其机制可能与降低血清尿氮素、血乳酸含量以及提高肝脏SOD活性有关。

羧甲基茯苓多糖的抗氧化研究

通过对茯苓药材中提取的茯苓多糖进行羧甲基修饰,制备一种水溶性羧甲基茯苓多糖(CMP),并对其抗氧化性进行研究。测定样品的还原能力和抗氧化能力两个指标:利用H2O2和Fe2+混合发生Fenton反应测定CMP对·OH的清除能力,采用邻苯三酚自氧化法测定CMP对·O2-的清除能力。结果显示在质量浓度为0.1g/L～5g/L的有效范围内该多糖具有一定的还原能力。在有效范围内CMP对·OH的清除50%羟自由基的多糖浓度(EC50)为2.5g/L,CMP浓度为5g/L时对·O2-的清除率为17%。

羧甲基茯苓多糖对淋巴细胞产生细胞因子的促诱生作用

目的：观察羧甲基茯苓多糖（ＣＭＰ）对人外周血淋巴细胞（ＨＰＢＬ） 产生肿瘤坏死因子（ＴＮＦ） 、白细胞介素６（ＩＬ６）的促诱生作用。方法：用ＨＰＢＬ 经ＣＭＰ预处理作用后再以ＰＨＡ 或和Ｃｏｎ Ａ刺激，培养后测定上清液中ＴＮＦ和ＩＬ６ 活性。结果：ＣＭＰ促诱生组比仅用ＰＨＡ 或／ 和Ｃｏｎ Ａ 常规刺激组培养上清液中的ＴＮＦ效价高０ ．５１ ．０ 倍，ＩＬ６ 效价高０ ．５０ ．８ 倍，ＣＭＰ＋ ＰＨＡ＋ Ｃｏｎ Ａ组对上述两种细胞因子的促诱生作用更加明显。结论：ＣＭＰ是一种有效的细胞因子促诱生剂。

CMP促诱生IL-2、TNF-α、IL-6、IFNγ/α效应和产品中试

用羧甲基茯苓多糖（ＣＭＰ）预处理人外周血淋巴细胞（ＨＰＢＬ），在以ＰＨＡ和ＣｏｎＡ为主的复合诱生剂诱导培养２４、３６、４８、７２ｈ采样检测的促诱生组ＴＮＦ－α、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＦＮγ效价（ｘ±ｓ）分别为４５６．１±２４．２，４７５．６±１８５．７，７４３３±１１８９．９，５５８３．０±５３５．５ＩＵ／ｍｌ，分别比无ＣＭＰ的常规诱生组效价高１．５，３．８，１．８，１．４倍；在以ＮＤＶ－Ｆ病毒为诱生剂诱导培养２２ｈ采样，并经酸化和中性化后检测的ＩＦＮ－α效价可达２１２７４．２±５５２３．０ＩＵ／ｍｌ，比无ＣＭＰ的常规诱生组高１．２倍，均有显著差异（Ｐ＜０．０１），说明ＣＭＰ对上述五种细胞因子均有明显的促诱生效应。此外，还采用ＣＭＰ促诱生技术，对ＴＮＦ－α、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＦＮγ和ＩＦＮ－α细胞因子进行了中试，提出了低成本、高效益的中试工艺路线。

羧甲基茯苓多糖的制备及抗肿瘤药效学研究

目的探讨羧甲基茯苓多糖的制备方法及其抗肿瘤活性。方法在卤代酸存在下一步法简便制备羧甲基茯苓多糖,并分别研究其体内、体外抗肿瘤活性。结果同对照组相比,羧甲基茯苓多糖在抑制昆明种小鼠H22肝癌细胞及小鼠肿瘤U-14细胞活性方面具有显著效果。结论通过简便方法制备得到了可显著提高荷瘤小鼠免疫力的羧甲基茯苓多糖,适当剂量的羧甲基茯苓多糖具有良好的抗肿瘤活性。

羧甲基茯苓多糖含量测定

目的:建立羧甲基茯苓多糖含量测定方法。方法:以无水葡萄糖为对照,采用苯酚-硫酸法测定羧甲基茯苓多糖的含量。结果:葡萄糖在0.002～0.012mg.mL-1范围呈良好的线性关系,回归方程为Y=49.016X-0.002 9(R=0.999 6)。测得羧甲基茯苓多糖含量为57.72%。结论:该方法操作简便,重现性好,测定结果准确可靠,可用于中药多糖含量的分析。

羧甲基茯苓多糖体外抗氧化活性研究

目的:比较不同浓度洗脱液洗脱得到的羧甲基茯苓多糖的抗氧化活性。方法:以茯苓为原料提取茯苓多糖,进行羧甲基取代反应,分离和纯化得到了均一性羧甲基茯苓多糖CMP-1、CMP-2、CMP-3、CMP-4,通过测定还原能力、DPPH自由基清除率、羟基自由基清除率、超氧阴离子自由基清除率比较其体外抗氧化活性。结果:羧甲基茯苓多糖均表现出与浓度正相关的体外抗氧化活性,其中CMP-4具有相对更强的体外抗氧化活性。结论:所得羧甲基茯苓多糖样品具有不同的体外抗氧化能力,随着洗脱液浓度增加,抗氧化活性增强。

不同分子量羧甲基茯苓多糖的制备及其抗氧化活性的研究

目的:研究分子量对羧甲基茯苓多糖抗氧化活性的影响。方法:将茯苓多糖进行羧甲基化得到了一种取代度为0.90±0.007的羧甲基茯苓多糖(CMP-1),凝胶渗透色谱法测得CMP-1的分子量为60.9×10~4u。利用H_2O_2对其进行氧化降解后,得到了分子量分别为10.7×10~4 u、3.22×10~4 u和1.09×10~4 u左右的降解产物CMP-1-1,CMP-1-2和CMP-1-3。应用铁氰化钾还原法、DPPH自由基测定法和Fenton法来测定CMP-1及其低分子量降解产物的抗氧化性。结果:随着分子量的降低,羧甲基茯苓多糖抗氧化活性增强,并且多糖对Fe^(3+)的还原能力和对DPPH自由基、羟自由基的清除能力存在剂量依赖关系,其中CMP-1-3的抗氧化活性最强。结论:羧甲基茯苓多糖作为一种成分单一的多糖,其分子量的降低能有效地增强其生物活性。

羧甲基茯苓多糖对溃疡性结肠炎大鼠的研究

目的研究羧甲基茯苓多糖通过调控Toll样受体4/髓样分化因子88/核转录因子-κB(TLR4/MyD88/NF-κB)信号通路对溃疡性结肠炎大鼠的改善作用。方法从40只SPF级大鼠中随机分出8只大鼠作为正常组,其余大鼠用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)联合乙醇造模法建立大鼠溃疡性结肠炎模型,造模成功后大鼠随机分为模型组、对照组和低、高剂量实验组。低、高剂量实验组分别给予0.5%羧甲基茯苓多糖混悬液2 mL和1.5%CMP混悬液2 mL,灌胃;对照组给予0.5 g·kg^(-1)柳氮磺吡啶灌胃;正常组和模型组每日灌胃给予等量的生理盐水,连续给药14 d。末次给药结束后,测定大鼠体质量、脾质量、结肠长度和质量,用自动化血液学分析仪分析血液参数,用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-12(IL^(-1)2)水平;用蛋白质印迹法检测TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关蛋白TLR4、MyD88和NF-κB p65的表达水平。结果正常组、模型组、对照组和低、高剂量实验组的肠质量分别为(1.98±0.15),(3.72±0.26),(2.13±0.25),(2.99±0.40)和(2.66±0.15)g,肠长分别为(21.63±2.13),(15.47±1.59),(20.76±2.42),(17.23±0.86)和(19.67±1.68)cm,TLR4蛋白表达水平分别为0.23±0.04,1.00±0.08,0.39±0.05,0.78±0.05和0.54±0.06;MyD88蛋白表达水平分别为0.38±0.02,0.97±0.08,0.50±0.05,0.66±0.08和0.58±0.04;NF-kB p65蛋白表达水平分别为0.39±0.04,1.05±0.11,0.57±0.08,0.71±0.05和0.62±0.09。以上指标,模型组与正常组比较,对照组和低、高剂量实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论羧甲基茯苓多糖可以通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关蛋白的表达,减轻炎症反应,从而对溃疡性结肠炎起到改善作用。