三磷酸肌醇和bax基因表达变化在genistein抑制裸鼠肝癌增长中的作用

目的:探讨三磷酸肌醇(IP3)和bax基因表达变化在genistein治疗裸鼠移植人肝癌中的作用。方法:以裸鼠移植人肝癌为对照,对照组腹腔注入含0.04% DMSO的RPMI 1640培养基0.05mL/g,Genistein治疗组腹腔注入genistein 1mg/(kg·d),3周后观察肝癌增长情况,并应用同位素试剂盒检测肝癌组织IP3含量,RT-PCR分析癌组织bax mRNA表达,Western blotting分析肝癌组织bax蛋白表达。结果:Genistein治疗组肝癌体积和重量均显著低于对照组[体积(12.6±11.6)mm3vs(52.3±26.5)mm3,重量(42.7±27.8)mgvs(91.3±31.4)mg),P<0.01],IP3含量显著低于对照组[(13.4±1.4)pmol/mg proteinvs(35.3±6.6)pmol/mg protein,P<0.01],bax mRNA表达显著高于对照组[灰度与面积之积的相对强度(RI)0.88±0.21vs0.56±0.15,P<0.05],bax蛋白表达显著高于对照组[RI2.86±0.80vs1.37±0.48,P<0.05]。结论:Genistein能减少IP3生成,上调肝癌组织bax基因表达,抑制裸鼠移植人肝癌增长。

金雀异黄素调节肝癌HepG2细胞bax基因表达诱导细胞凋亡的实验研究

目的探讨三磷酸肌醇(IP3)和bax基因表达变化在金雀异黄素(genistein,Gen)诱导肝癌细胞凋亡中的作用。方法以0μmol/L Gen作用肝癌HepG2细胞72 h为对照组,以不同浓度(20、40、60及80μmol/L)Gen为浓度依赖性实验;以60μmol/L Gen作用于肝癌HepG2细胞0 h为对照组,60μmol/L Gen作用于HepG2细胞不同时相(6、12、24、48及72 h)为时间依赖性实验;应用同位素试剂盒检测细胞IP3含量;RT-PCR分析baxmRNA表达;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果不同浓度(20、40、60及80μmol/L)的Gen作用于肝癌HepG2细胞72 h后,IP3含量显著低于对照组〔(17.7±1.3)、(11.2±0.9)、(4.9±0.5)、(4.8±0.3)pmol/106cells vs(29.4±0.5)pmol/106cells〕,P<0.01;bax mRNA表达(RI,灰度与面积之积的相对强度)显著高于对照组(0.26±0.02、0.33±0.05、0.35±0.06、0.38±0.05 vs 0.09±0.01),P<0.01;细胞凋亡率也显著高于对照组〔(10.1±0.9)%、(18.7±1.6)%、(28.7±2.5)%、(27.9±2.0)%vs(2.6±0.1)%〕,P<0.01。60μmol/L Gen作用于肝癌HepG2细胞不同时相(6、12、24、48及72 h)后,各时相IP3含量显著低于对照组〔(22.6±0.9)、(12.0±1.4)、(7.5±0.8)、(5.6±0.5)、(4.3±0.6)pmol/106cells vs(29.2±0.6)pmol/106cells〕,P<0.01;12 h后baxmRNA表达显著高于对照组(0.25±0.06、0.29±0.02、0.30±0.02、0.35±0.04 vs 0.09±0.01),P<0.01;24 h后各时相细胞凋亡率明显高于对照组〔(7.4±0.5)%、(20.5±2.0)%、(30.7±1.6)%vs(2.6±0.1)%〕,P<0.01。结论Gen能减少IP3生成,上调bax基因表达,诱导肝癌细胞凋亡。

人肝细胞癌中促凋亡基因bax的原位检测及其临床意义

目的 研究促凋亡基因bax在人肝细胞癌 (HCC)中的表达及其意义。方法 采用免疫组织化学和原位杂交方法检测石蜡包埋的人HCC标本中促凋亡基因bax的表达。结果 在免疫组织化学检测的 40例人HCC中 ,bax阳性 19例 ;14例肝硬变组织中 ,bax阳性 11例 ;bax在HCC中的表达低于肝硬变 (P <0 .0 5 ) ;高、中分化型HCC的bax表达高于低分化型 ,而且AFP≤ 40 0 μg/L的患者bax表达高于AFP >40 0 μg/L的患者 ,HCC临床分期为 Ⅰ～Ⅱ期者明显高于Ⅲ期者 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ;但在不同性别和不同年龄组 (>6 0岁与≤ 6 0岁 )患者之间则无显著性差异 (均P >0 .0 5 )。原位杂交证实 ,baxmRNA在HCC中的阳性率与免疫组织化学检测结果无显著性差异。结论 促凋亡基因bax在HCC中的表达对肝癌细胞的凋亡起调节作用 ,并与HCC分化程度、临床分期。

Bax蛋白稳定高表达肝癌细胞的建立及其凋亡

目的 建立稳定高表达 Bax蛋白的肝癌细胞 .方法 用脂质体介导的基因转染法分别将含人 bax c DNA的p BK- bax和 p BK- CMV空载体质粒导入人肝癌细胞系 HCC-92 0 4细胞中 .经 G- 4 18筛选获得细胞克隆 .ABC法和图像定量分析检测 Bax蛋白在细胞中的表达情况 .HE染色观察细胞形态学变化 .TU NEL 法检测细胞凋亡发生情况 .结果 转染后用 G- 4 18筛选 2 wk,获得了细胞克隆 .转染 p BK- bax细胞的 Bax蛋白表达强度明显强于转染 p BK- CMV或未转染的 HCC- 92 0 4细胞 (P<0 .0 5 ) ,而转染 p BK- CMV的细胞与未转染的 HCC- 92 0 4细胞的 Bax蛋白表达强度未见明显差异 .p BK- bax转染的细胞有的可见细胞固缩、变圆、浓染和“出泡”等凋亡形态学变化 ,并且其 TU NEL 指数明显高于转染 p BK-CMV或未转染的 HCC- 92 0 4细胞 (P<0 .0 5 ) .结论 获得了稳定高表达 Bax蛋白的肝癌细胞 .bax基因转染的 HCC-92 0

经肝动脉注射双腺病毒载体诱导Bax基因在肝脏靶向表达实验探讨

目的:探讨Bax基因对肝癌细胞促凋亡作用及转基因途径对转染效率的影响。方法:双腺病毒载体系统介导Bax基因转染人肝癌细胞系QGY7703,并将Bax基因通过鼠尾静脉、肝动脉进行转染,观察细胞凋亡及不同转染途径对靶器官的影响。结果:1)Bax基因转染导致人肝癌细胞凋亡。实验组凋亡百分率明显高于各对照组。2)肝动脉插管组LacZ在靶肝细胞转染率高;非靶器官分布表达少,靶/非靶比值大(P<0.05);阻断血供有利于以较小病毒滴度获得较高的转染率;尾静脉组靶肝细胞转染率低,在非靶器官分布表达多。结论:应用肝动脉超选择技术,经肝动脉传输Bax基因治疗肝癌具有安全、低毒和靶向选择性,为Bax经肝动脉基因治疗提供了实验依据。

五羟黄酮调节肝癌HepG2细胞bax基因表达诱导细胞凋亡的实验研究

目的探讨三磷酸肌醇(IP3)和bax基因表达变化在五羟黄酮(Quercetin)诱导肝癌细胞凋亡中的作用。方法以肝癌HepG2细胞培养72h为对照,以20,40,60,80μmol/L Quercetin作用于HepG2细胞72h时和60μmol/LQuercetin作用于HepG2细胞6,12,24,48,72h,应用同位素试剂盒检测细胞IP3含量,RT-PCR分析bax mRNA表达,Western blotting分析细胞bax蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果各浓度的Quercetin作用于肝癌HepG2细胞72h,IP3含量显著低于对照组(P<0.01),bax mRNA和bax蛋白表达显著高于对照组,细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.01);60μmol/L Quercetin作用于肝癌HepG2细胞6,12,24,48,72h,各时相IP3含量显著低于对照组(P<0.01);12h后bax mRNA和bax蛋白表达显著高于对照组,24h后各时相细胞凋亡率为显著高于对照组(P<0.01)。结论Quercetin能减少IP3生成,上调bax基因表达,诱导肝癌细胞凋亡。

bcl-2基因表达在genistein抑制裸鼠肝癌生长中的作用

目的:探讨bcl-2基因表达变化在genistein治疗裸鼠移植人肝癌中的作用。方法:以裸鼠移植人肝癌为对照,对照组腹腔注入含0.04%DMSO RPMI-1640培养基0.05 L/kg,genistein治疗组腹腔注入genistein 1mg kg-1·d-1,3周后观察肝癌增长情况,并应用同位素试剂盒检测肝癌组织IP3含量,RT-PCR分析癌组织bcl-2 mRNA表达,Western blotting分析肝癌组织Bcl-2蛋白表达。结果:治疗组肝癌体积和重量均显著低于对照组[体积:(42.7±27.8)mm3vs(52.3±26.5)mm3;重量:(42.7±27.8)mgvs(91.3±31.4)mg],IP3含量显著低于对照组[(13.4±1.4)nmol/g proteinvs(35.3±6.6)nmol/g protein],bcl-2 mRNA表达显著低于对照组[RI(灰度与面积之积的相对强度)0.48±0.02vs0.56±0.15],P<0.01,Bcl-2蛋白表达显著低于对照组[RI(灰度与面积之积的相对强度)1.69±0.52vs1.37±0.48]。结论:Genistein能减少IP3生成,下调肝癌组织bcl-2基因表达,抑制裸鼠移植肝癌的生长。

两元腺病毒载体系统转移bax基因诱导肝癌细胞凋亡的研究

目的 采用两元腺病毒载体系统,介导bax基因转移至培养的肝癌细胞SMMC-7721,探讨腺病毒介导转移bax基因抗肝癌的活性。方法 常规方法在293细胞中扩增腺病毒Ad/GT-Bax和Ad/PGK-GV16,CsCl密度梯度离心法纯化病毒后测定病毒滴度。结果 (1)Bax蛋白表达情况:感染Ad/GT-Bax和Ad/PGK-GV16的SMMC-7721细胞,其在24、48和72小时的Bax蛋白表达量依次为阴性对照细胞的2.5、3.1和3.9倍;(2)PI染色后,感染Ad/GT-Bax和Ad/PGK-GV16的SMMC-7721细胞出现亚二倍体峰,该峰面积占总面积的值在24、48、72小时时依次为31.65％、50.44％和61.81％。结论 两元腺病毒载体系统介导转移Bax基因可诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡,可望成为治疗肝癌的有力工具。

条斑紫菜多糖对人肝癌Bel7402抗肿瘤作用的初步研究

目的:研究条斑紫菜多糖对人肝癌Bel7402体外抗肿瘤作用。方法:采用MTT法观察条斑紫菜多糖体外对肝癌Bel7402的增殖抑制作用;荧光显微镜观察不同浓度条斑紫菜多糖诱导Bel7402细胞凋亡作用情况,RT-PCR检测Survivin、Bax基因表达量的变化。结果:条斑紫菜多糖对人肝癌Bel7402细胞有显著地增殖抑制作用,能诱导Bel7402细胞凋亡,并且能上调Bax、降低Survivin表达。结论:条斑紫菜多糖体外有一定的抗肿瘤作用,并能促进Bel7402细胞凋亡,其机制可能与激活Bax、抑制Survivin表达有关。

Quercetin治疗裸鼠移植人肝癌的作用及机制

目的探讨quercetin治疗裸鼠移植人肝癌中的作用及三磷酸肌醇(IP3)和Bax基因表达变化。方法采用quercetin治疗实验性肝癌,观察肝癌增长情况;用同位素试剂盒检测肝癌组织IP3含量;RT-PCR分析癌组织bax mRNA的表达;Western blotting分析肝癌组织bax蛋白的表达。结果治疗组肝癌体积和重量均显著低于对照组[体积(15.8±10.1)mm3vs.(52.3±26.5)mm3;重量(44.8±10.4)mgvs.(91.3±31.4)mg;均P<0.01],IP3含量显著低于对照组[(15.9±2.8)pmol/mg vs.(35.3±6.6)pmol/mg;均P<0.01],bax mRNA表达与对照组无显著性差异[RI(灰度与面积之积的相对强度)(0.64±0.12)vs.(0.56±0.15),P>0.05],但bax蛋白表达显著高于对照组[RI(3.16±0.95)vs.(1.37±0.48)]。结论结论Quercetin能减少IP3生成,上调肝癌组织bax蛋白的表达,抑制裸鼠移植人肝癌的增长。

Bax基因的过表达上调HCC-9204细胞系对阿霉素的敏感性

目的 探讨Bax基因的过表达是否能够调节HCC 92 0 4细胞系对阿霉素的敏感性。方法 采用一种可诱导性表达系统、MT Ⅱ调节系统 ,在外加锌离子 (ZnSO4,10 0 μmol/L)的条件下 ,诱导Bax基因过表达。以克隆形成实验来判断Bax是否能够降低阿霉素处理后肿瘤细胞的克隆存活率。以MTT实验来反映细胞活力的改变。凋亡性细胞死亡的鉴定是通过形态学标准并结合TUNEL和细胞周期的分析加以证实。结果 阿霉素能够显著诱导HCC 92 0 4细胞发生凋亡。TUNEL染色显示典型的凋亡特征如新月体样或环状染色体边集于核膜 ,胞浆皱缩并且“发泡”。流式细胞仪分析显示 ,在处理后 2 4h出现显著的亚二倍体峰。Bax能够显著降低阿霉素处理组的克隆存活率 ,Bax也能够降低药物处理后的细胞活力 ,呈时间依赖性。结论 Bax基因的过表达能够增加HCC 92 0

白毛藤对人肝癌Bel7402细胞增殖抑制及凋亡作用

目的探讨白毛藤体外对人肝癌Bel7402细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制。方法采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法和荧光显微镜观察白毛藤对人肝癌Bel7402细胞的增殖抑制作用和其诱导Bel7402细胞凋亡情况;用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测survivin、bax基因表达量的变化。结果随白毛藤浓度增加、作用时间延长,对人肝癌Bel7402细胞的增殖抑制作用均明显增强(P<0.01);4,8,16 mg/mL白毛藤组人肝癌Bel7402细胞凋亡率分别为10.98%、17.02%、26.78%,均高于对照组6.18%(P<0.01);作用48 h后,4,8,16 mg/mL白毛藤组人肝癌Bel7402细胞中survivin基因灰度比值分别为(0.43±0.01)、(0.38±0.02)、(0.29±0.01),均低于对照组(0.65±0.05),差异均有统计学意义(P<0.01);4,8,16 mg/mL白毛藤组人肝癌Bel7402细胞中bax基因灰度比值分别为(0.47±0.05)、(0.56±0.04)、(0.73±0.06),均高于对照组(0.36±0.02),差异均有统计学意义(P<0.01)。结论白毛藤可抑制人肝癌Bel7402细胞增殖、诱导其细胞凋亡,并能调控survivin及bax基因的表达。