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EFFECTS OF EPCs OR b-FGF INTRAMYOCARDIAL INFUSION ON CARDIAC FUNCTION AND NEOVASCULARIZATION FOR DILATED CARDIOMYOPATHY RATS
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作者 张昕 魏盟 燕晓宇 《Journal of Shanghai Second Medical University(Foreign Language Edition)》 2008年第2期95-101,共7页
Objective To compare the different effects of endothelia progenitor cells ( EPCs ) or basic fibroblast growth factor (b-FGF) intromyocardial infusion on cardiac function and neovascularization for dilated cardiomy... Objective To compare the different effects of endothelia progenitor cells ( EPCs ) or basic fibroblast growth factor (b-FGF) intromyocardial infusion on cardiac function and neovascularization for dilated cardiomyopathy( DCM) rats. Methods Fifty adult female rats received inguinal subcutaneous injections of isoproterenol (ISO, 250 mg/kg) for induction of DCM. Four weeks later, the model rats were randomly divided into EPCs group, b-FGF group and control group. The 2×106 EPCs ( resolved in 100 μL PBS) , 100 μL b-FGF ( lO0 μg/mL ) and 100 μL PBS were evenly transplanted into the myocardium of EPCs group, b-FGF group and control group, respectively. Three months later, echocardiographic examination and regional myocardial blood flow (RMBF) measurement were performed. EPCs were traced by fluorescence in situ hybridization (FISH). The protein and mRNA expression of b-FGF in each group was measured by ELISA assay and reverse transcription-polymerase chain reaction ( RT-PCR ) . Results Three months after transplantation, sry positive cells were detected only in EPCs group. The cardiac function as well as RMBF was significantly improved in EPCs group compared with b-FGF group or control group. There was higher capillary density in EPCs group. The protein and mRNA expression of b-FGF was stronger than b-FGF group and control group. Conclusion Transplantation of EPCs can improve cardiac function, induce neovascularization and increase RMBF for DCM rats. The treatment with EPCs has better effect than administration of b-FGF alone. 展开更多
关键词 endothelia progenitor cell basic fibroblast growth factor dilated cardiomyopathy neovascularization cardiac function
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年轻干细胞抗原-1阳性骨髓干细胞调控年老小鼠心脏成纤维细胞凋亡的分子机制
2
作者 吕饶 于佳迪 +5 位作者 李柳蓁 湛楚蓝 赵立越 李月亮 董珺 黎佼 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2024年第17期2369-2374,共6页
目的探讨Sca-1骨髓干细胞对小鼠心脏成纤维细胞(CFC)凋亡的影响,阐明年轻Sca-1骨髓干细胞调控心脏成纤维细胞凋亡的潜在分子机制及其优势。方法比较年轻与年老心脏成纤维细胞在缺氧条件下,细胞凋亡及细胞存活率。将Sca-1骨髓干细胞与年... 目的探讨Sca-1骨髓干细胞对小鼠心脏成纤维细胞(CFC)凋亡的影响,阐明年轻Sca-1骨髓干细胞调控心脏成纤维细胞凋亡的潜在分子机制及其优势。方法比较年轻与年老心脏成纤维细胞在缺氧条件下,细胞凋亡及细胞存活率。将Sca-1骨髓干细胞与年老心脏成纤维细胞共培养。通过TUNEL染色、q RT-PCR、Western Blot、CCK8试剂盒分别检测年轻或年老Sca-1骨髓干细胞对年老心脏成纤维细胞凋亡及存活的影响。通过qRT-PCR、ELISA检测年轻与年老小鼠Sca-1骨髓干细胞旁分泌生长因子并鉴定其功能。结果随年龄增加,年老小鼠心脏成纤维细胞凋亡增加,细胞存活减少。与年老细胞相比,年轻Sca-1骨髓干细胞可明显减少年老心脏成纤维细胞凋亡,增加细胞存活。机制研究发现,与年老细胞相比,年轻Sca-1骨髓干细胞可旁分泌更多的生长和分化因子5(GDF5)(P<0.05)。中和GDF5后,使年轻Sca-1骨髓干细胞失去对年老成纤维细胞凋亡及存活的调控作用。结论年轻Sca-1骨髓干细胞可通过旁分泌GDF5减少年老心脏成纤维细胞凋亡。 展开更多
关键词 干细胞 心脏成纤维细胞 凋亡 细胞存活 生长因子 年轻干细胞抗原-1
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心康冲剂含药血清调控GAS5-miR21对心肌成纤维细胞增殖的影响
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作者 刘蓉芳 郭冰 +2 位作者 余意 李园 王敏 《中国中医药信息杂志》 CAS CSCD 2024年第9期102-109,共8页
目的 观察心康冲剂含药血清对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞(CFs)增殖的影响,基于GAS5-miR-21探讨其抑制CFs增殖的作用机制。方法 取SD乳鼠心肌,差速贴壁法分离CFs,采用血管紧张素Ⅱ诱导CFs增殖,在转染微小RNA-21(miR-21)过表达慢... 目的 观察心康冲剂含药血清对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞(CFs)增殖的影响,基于GAS5-miR-21探讨其抑制CFs增殖的作用机制。方法 取SD乳鼠心肌,差速贴壁法分离CFs,采用血管紧张素Ⅱ诱导CFs增殖,在转染微小RNA-21(miR-21)过表达慢病毒、生长阻滞特异性转录本5(GAS5)沉默慢病毒后,分别用心康冲剂含药血清干预24 h。CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期,免疫荧光染色检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,RT-qPCR检测GAS5、miR-2l、磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)mRNA表达,Western blot检测PTEN、Akt、周期蛋白D1(Cyclin D1)和周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)蛋白表达。结果 与空白组比较,模型组CFs细胞活力增强,G0/G1期细胞比例减少,S期细胞比例增加,α-SMA阳性表达升高,GAS5、PTEN mRNA及PTEN蛋白表达降低,miR-21 mRNA及Akt、Cyclin D1、CDK4蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,心康冲剂组CFs细胞活力减弱,G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,α-SMA阳性表达降低,GAS5、PTEN mRNA及PTEN蛋白表达升高,miR-21 mRNA及Akt、Cyclin D1、CDK4蛋白表达降低;mi R-21过表达组和GAS5沉默组CFs细胞活力增强,G0/G1期细胞比例减少,S期细胞比例增加,α-SMA阳性表达升高,GAS5、PTEN mRNA及PTEN蛋白表达降低,miR-21 mRNA及Akt、Cyclin D1、CDK4蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与miR-21过表达组、GAS5沉默组比较,miR-21过表达+心康冲剂组、GAS5沉默+心康冲剂组CFs细胞活力减弱,G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,α-SMA阳性表达降低,GAS5、PTEN mRNA及PTEN蛋白表达升高,miR-21 mRNA及Akt、Cyclin D1、CDK4蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 心康冲剂含药血清可抑制沉默GAS5所致miR-21、Akt表达升高,对抗过表达miR-21所致GAS5和PTEN表达降低,抑制CFs增殖周期,促进GAS5发挥“分子海绵”作用,改善血管紧张素Ⅱ诱导的CFs过度增殖。 展开更多
关键词 心肌纤维化 细胞周期 心康冲剂 生长阻滞特异性转录本5 微小RNA-21 心肌成纤维细胞
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川芎嗪对溶血磷脂酸诱导的心脏成纤维细胞增殖及胶原合成的影响 被引量:18
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作者 蔡辉 修春英 +2 位作者 郭郡浩 沈思钰 赵智明 《医学研究生学报》 CAS 2008年第1期31-33,共3页
目的:观察溶血磷脂酸(LPA)对体外培养的心脏成纤维细胞(CF)增殖的影响,进一步研究中药川芎嗪单体对其的干预作用。方法:用消化法培养新生SD大鼠心脏成纤维细胞,用单四唑(MTT)比色法测定细胞增殖,羟脯氨酸碱水解法测定胶原合成,分别观察... 目的:观察溶血磷脂酸(LPA)对体外培养的心脏成纤维细胞(CF)增殖的影响,进一步研究中药川芎嗪单体对其的干预作用。方法:用消化法培养新生SD大鼠心脏成纤维细胞,用单四唑(MTT)比色法测定细胞增殖,羟脯氨酸碱水解法测定胶原合成,分别观察不同浓度LPA对CF增殖和胶原合成的影响及川芎嗪的干预作用。结果:随着LPA浓度的升高,MTT比色法A490值呈上升趋势。CF分泌的胶原随着LPA浓度和作用时间的增加呈递增趋势。20μg/m l的川芎嗪作用48 h即能明显抑制LPA(10-6μmol/L)诱导的细胞增殖作用(P<0.05)。结论:LPA具有促进SD新生大鼠CF增殖和胶原合成作用,而川芎嗪能对其产生明显的抑制作用,并呈浓度依赖性。 展开更多
关键词 溶血磷脂酸 川芎嗪 心脏成纤维细胞 细胞增殖 胶原合成
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黄连素抗心脏纤维化作用及其机制 被引量:5
5
作者 蔡少艾 胡明 +2 位作者 汤晓燕 陈美婷 罗承锋 《广东医学》 CAS 北大核心 2017年第3期337-339,共3页
目的观察黄连素对心脏纤维化的影响,探讨其可能机制。方法体外使用转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激心脏成纤维细胞,建立心脏纤维化细胞模型。采用不同浓度(10~90μmol/L)黄连素刺激,观察心脏成纤维细胞的活力、胶原Ⅲ和p38 MAPK蛋白表达... 目的观察黄连素对心脏纤维化的影响,探讨其可能机制。方法体外使用转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激心脏成纤维细胞,建立心脏纤维化细胞模型。采用不同浓度(10~90μmol/L)黄连素刺激,观察心脏成纤维细胞的活力、胶原Ⅲ和p38 MAPK蛋白表达水平。结果低浓度的TGF-β1可增加心脏成纤维细胞的活力,促进胶原Ⅲ的合成。黄连素呈浓度依赖性地抑制心脏成纤维细胞的活力,降低胶原Ⅲ的合成,促进p38MAPK蛋白磷酸化。结论黄连素可抑制心脏成纤维细胞的增殖和胶原Ⅲ的合成,其机制可能是通过磷酸化p38MAPK蛋白起作用。 展开更多
关键词 黄连素 心脏成纤维细胞 细胞增殖 胶原Ⅲ P38 MAPK
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环孢霉素A抑制血管升压素诱导的心脏成纤维细胞增殖和胶原合成(英文) 被引量:4
6
作者 尚福军 赵连友 +1 位作者 郑强荪 王捷频 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1044-1049,共6页
目的探讨环孢霉素A(CsA)对血管升压素(AVP)诱导心脏成纤维细胞(CFs)增殖和胶原合成作用的影响。方法采用胰酶消化法培养新生Sprague-Daw ley大鼠CFs,无血清培养基培养24 h以上的细胞在AVP刺激的基础上给予不同浓度的CsA。采用MTT法测定... 目的探讨环孢霉素A(CsA)对血管升压素(AVP)诱导心脏成纤维细胞(CFs)增殖和胶原合成作用的影响。方法采用胰酶消化法培养新生Sprague-Daw ley大鼠CFs,无血清培养基培养24 h以上的细胞在AVP刺激的基础上给予不同浓度的CsA。采用MTT法测定细胞数目,应用流式细胞仪分析细胞周期,羟基脯氨酸比色法测定细胞培养上清液羟基脯氨酸含量,钙调神经磷酸酶(CaN)活性通过分光光度计测定。结果环孢霉素A可剂量依赖性地抑制AVP诱导的心脏成纤维细胞数目的增加,0.05,0.5及5μmol.L-1CsA对CFs的MTT吸收度值的抑制率分别为12%,24%和29%(均P<0.05);细胞周期分析显示,0.5μmol.L-1CsA可降低AVP诱导的S期百分数和增殖指数(P<0.05);0.5及5μmol.L-1CsA可降低细胞培养上清液羟基脯氨酸含量,抑制率分别为29%和33%,有统计学差异(均P<0.05);CsA可完全阻断AVP诱导CFs细胞内CaN活性,而CsA对基础状态下的CaN活性和细胞存活率无明显影响。结论CsA通过阻断CaN信号通路抑制AVP诱导的CFs增殖和胶原合成,可抑制心肌纤维化进程,为心肌纤维化的防治提供了新的治疗靶点。 展开更多
关键词 心脏成纤维细胞 细胞增殖 胶原合成 环孢霉素A 血管升压素
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KLF15基因对心肌纤维化的抑制作用 被引量:4
7
作者 余杨 邹书帆 +3 位作者 马杰 蹇朝 唐富琴 陈林 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第14期1448-1453,共6页
目的探讨心肌成纤维细胞Krüppel样因子15(krüppel-like factor 15,KLF15)在心肌间质纤维化及转归中的作用和分子机制。方法体外培养大鼠心肌成纤维细胞,建立促心肌成纤维细胞肥大模型,构建干涉和过表达KLF15腺病毒载体并转染... 目的探讨心肌成纤维细胞Krüppel样因子15(krüppel-like factor 15,KLF15)在心肌间质纤维化及转归中的作用和分子机制。方法体外培养大鼠心肌成纤维细胞,建立促心肌成纤维细胞肥大模型,构建干涉和过表达KLF15腺病毒载体并转染,分别进行腺病毒组、空病毒组、对照组、阴性干涉组及干涉组细胞玻片染色观察,Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维含量及KLF15、TGF-β(transforming growth factor-β)、CTGF(connective tissue growth factor)、MRTF-A(myocardin-related transcription factor A)细胞因子蛋白表达水平检测。结果在该细胞模型实验中,腺病毒组KLF15表达水平明显高于其余各组(P<0.05),相应的TGF-β、CTGF、MRTF-A表达水平及Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维含量却最低(P<0.05),心肌细胞肥大、纤维化表现显著减轻,而干涉组上述各检测值变化恰与之相反(P<0.05),有更重的心肌细胞肥大、纤维化表现。结论 KLF15可通过反馈调节TGF-β,抑制CTGF及MRTF-A的作用,减轻心肌间质纤维化及心肌成纤维细胞表型转变,从而改善心功能。 展开更多
关键词 KLF15 心肌纤维化 心肌成纤维细胞 细胞培养 腺病毒载体 转染
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苦参碱诱导血管紧张素Ⅱ作用的心肌成纤维细胞凋亡 被引量:13
8
作者 周成慧 欧阳静萍 +3 位作者 周艳芳 胡迎春 杨海鹭 徐怡 《武汉大学学报(医学版)》 CAS 2004年第4期375-379,T002,共6页
目的 :研究苦参碱 (matrine,Mat)诱导血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )作用的小鼠心肌成纤维细胞 (cardiacfi broblast,CFB)凋亡及相关调控蛋白表达的影响。方法 :不同浓度苦参碱作用于体外培养AngⅡ作用的小鼠心肌成纤维细胞 ,利用倒置显微镜、PI... 目的 :研究苦参碱 (matrine,Mat)诱导血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )作用的小鼠心肌成纤维细胞 (cardiacfi broblast,CFB)凋亡及相关调控蛋白表达的影响。方法 :不同浓度苦参碱作用于体外培养AngⅡ作用的小鼠心肌成纤维细胞 ,利用倒置显微镜、PI/Hoechst 33342双染结合荧光显微镜技术观察细胞形态 ;流式细胞术检测其凋亡率、细胞周期及凋亡相关基因Bcl 2、Bax蛋白表达的改变 ;采用WesternBlotting检测Caspase 3蛋白的表达。 结果 :不同浓度Mat处理AngⅡ作用的小鼠心肌成纤维细胞 2 4h ,可见到染色质浓缩、边集、碎裂 ;凋亡率随浓度的升高而升高 ;细胞周期分析显示G1升高 ,S期下降 ,G2 /M期无明显变化 ;,Bcl 2的表达量减少 ;Bax的表达量增加且呈剂量效应 ;WesternBlotting检测显示Caspase 3活化。结论 :Mat诱导AngⅡ作用的小鼠心肌成纤维细胞凋亡且呈剂量效应 ,其机制可能与降低Bcl 2、升高Bax、增强Caspas 3活性有关。 展开更多
关键词 血管紧张素Ⅱ 苦参碱 心肌成纤维细胞 细胞凋亡 细胞周期 Bcl-2 BAX CASPASE-3
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乳鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞体外分离培养方法的优化 被引量:12
9
作者 朱晓丽 王丽 +3 位作者 马依彤 杨毅宁 陈邦党 马苗苗 《中国动脉硬化杂志》 CAS 北大核心 2015年第1期90-93,共4页
目的优化SD乳鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞的体外分离培养的条件和方法。方法分别用胰酶、Ⅱ型胶原酶依次消化分离心肌组织,再通过两次差速贴壁分离法分别收集、培养乳鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞。光学显微镜下分别观察心肌细胞和心肌... 目的优化SD乳鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞的体外分离培养的条件和方法。方法分别用胰酶、Ⅱ型胶原酶依次消化分离心肌组织,再通过两次差速贴壁分离法分别收集、培养乳鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞。光学显微镜下分别观察心肌细胞和心肌成纤维细胞的基本形态特征的变化,原代心肌细胞行心肌肌钙蛋白免疫荧光鉴定,而心肌成纤维细胞则用第2代行波形蛋白免疫荧光鉴定。结果心肌细胞在2~4 h开始贴壁生长,12~24 h贴壁速率大幅增加,并出现自发性搏动,48~72 h心肌细胞粘合成簇,细胞成活率,纯度均达95%以上;心肌成纤维细胞第2~4代细胞生长良好,纯度高达98%以上。结论此种方法可得到产量大,纯度高,活力好的心肌细胞和心肌成纤维细胞,为心血管疾病的基础与临床研究提供了理想的实验模型。 展开更多
关键词 心肌细胞 心肌成纤维细胞 原代培养
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牛磺酸对心肌成纤维细胞细胞周期的影响及其机制的研究 被引量:6
10
作者 王艳春 李红 杨世杰 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1471-1475,共5页
目的研究牛磺酸(taurine,Tau)对血管紧张素Ⅱ(an-giotensinⅡ,AngⅡ)诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞(cardiacfibroblast,CFb)增殖的抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法用AngⅡ诱导新生大鼠CFb增殖,建立心肌纤维化模型,采用四甲基偶氮唑... 目的研究牛磺酸(taurine,Tau)对血管紧张素Ⅱ(an-giotensinⅡ,AngⅡ)诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞(cardiacfibroblast,CFb)增殖的抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法用AngⅡ诱导新生大鼠CFb增殖,建立心肌纤维化模型,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖;羟脯氨酸测定检测胶原含量;流式细胞仪检测细胞周期及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制物p27的变化;免疫细胞化学法测定细胞周期调控蛋白D(cyclin D)及p27蛋白的含量。结果Tau(40、80、160mmol.L-1)可明显抑制AngⅡ诱导的CFb增殖与胶原合成,同AngⅡ组比较差异有显著性(P<0.05或P<0.01),且呈现剂量依赖性。流式细胞仪检测表明Tau在80、160mmol.L-1可促进p27的蛋白表达;细胞G0/G1期百分率随Tau浓度增加而增加,S期细胞百分率随Tau浓度增加而减少,与AngⅡ组相比差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。免疫细胞化学染色结合图像分析系统的分析结果也表明Tau可增加p27的蛋白表达,与AngⅡ组相比差异具有统计学意义(P<0.01)。结论牛磺酸通过促进p27的表达,使细胞周期阻滞于G0/G1期,而抑制CFb增殖和胶原含量的增加。 展开更多
关键词 牛磺酸 心肌成纤维细胞 细胞周期调节蛋白 P^27
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低氧对心脏成纤维细胞增殖细胞核抗原表达与表型的影响 被引量:4
11
作者 于军 朱妙章 +4 位作者 裴建明 陈宝莹 吕顺艳 董明清 魏启明 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第10期1311-1315,T002,共6页
目的 :观察不同程度低氧对乳鼠心脏成纤维细胞 (CFs)增殖细胞核抗原 (PCNA)表达与表型的影响。方法 :分离、纯化、培养乳鼠CFs ,随机分为 3组 :对照组、中度低氧组和重度低氧组 ,以四唑盐 (MTT)比色法检测细胞的增殖情况 ,采用免疫组织... 目的 :观察不同程度低氧对乳鼠心脏成纤维细胞 (CFs)增殖细胞核抗原 (PCNA)表达与表型的影响。方法 :分离、纯化、培养乳鼠CFs ,随机分为 3组 :对照组、中度低氧组和重度低氧组 ,以四唑盐 (MTT)比色法检测细胞的增殖情况 ,采用免疫组织化学的方法检测PCNA的表达情况 ,电镜观察细胞的超微结构 ,并采用激光共聚焦显微镜检测各组细胞内α -actin的表达情况。结果 :中度低氧组MTT的 4 90nm吸光度值 (A490nm)较对照组增加 (18 4±2 5 0 ) % (P <0 0 5 ) ,而重度低氧组A4 90nm值较对照组降低 (15 8± 2 5 0 ) % (P <0 0 5 )。免疫组化结果显示 :对照组CFs的PCNA有一定的基础表达 ,核内阳性反应颗粒较少 ,染色强度为 (92 2± 9 1) %AU ,中度低氧组CFs的PCNA染色强阳性 ,可见密集的阳性反应颗粒 ,染色强度为 (12 8 0± 11 4 ) %AU(P <0 0 5vs对照组 ) ,重度低氧组CFs核内无明显的阳性反应颗粒 ,染色强度为 (89 9± 8 4 ) %AU。透射电镜下 ,正常组CFs呈梭形 ,胞浆内有丰富的粗面内质网和高尔基复合体 ,线粒体和微丝的含量较少 ,无基膜存在 ,呈典型的成纤维细胞表型。中度低氧刺激 72h ,CFs粗面内质网明显减少 ,胞浆内出现大量的微丝 ,以质膜下分布最多 ,呈现肌成纤维细胞表型。重度低氧组CFs内仅有少量的? 展开更多
关键词 缺氧 心脏成纤维细胞 增殖细胞核抗原 表型 肌动蛋白类
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成年小鼠心脏成纤维细胞的分离、纯化和原代培养 被引量:13
12
作者 李如君 龚开政 张振刚 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期67-71,共5页
目的探讨并建立成年小鼠心脏成纤维细胞原代培养方法。方法采用0.8 g/LⅣ型胶原蛋白酶和1 g/L胰蛋白酶为消化液,以多次短时间水浴振荡的方式消化成年小鼠心脏组织,差速贴壁法分离纯化心脏成纤维细胞。波形蛋白免疫荧光细胞化学染色法鉴... 目的探讨并建立成年小鼠心脏成纤维细胞原代培养方法。方法采用0.8 g/LⅣ型胶原蛋白酶和1 g/L胰蛋白酶为消化液,以多次短时间水浴振荡的方式消化成年小鼠心脏组织,差速贴壁法分离纯化心脏成纤维细胞。波形蛋白免疫荧光细胞化学染色法鉴定细胞类型及纯度;倒置相差显微镜观察细胞生长情况,绘制细胞生长曲线;CCK-8法测定细胞增殖能力、Western blot法检测转化生长因子β1(TGF-β1)刺激后细胞SMAD家族成员2/3(Smad2/3)蛋白及磷酸化水平。结果差速贴壁后在相差显微镜下可见大量球形贴壁细胞;3 d后细胞逐渐由圆形伸展为长梭形并迅速增殖,分裂象多见;5 d后细胞数量显著增多,完全汇合无空隙;细胞生长曲线近似"S"形。波形蛋白阳性率可达95%。CCK-8法显示在第3~5天细胞增殖能力最显著,给予第2代心脏成纤维细胞TGF-β1刺激显示Smad2/3蛋白磷酸化水平明显增加。结论建立了一种快速、经济、有效获取成年小鼠心脏成纤维细胞的方法。 展开更多
关键词 成年小鼠 心脏成纤维细胞 原代培养 细胞鉴定
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鸢尾苷元对血管紧张素Ⅱ作用下心肌成纤维细胞增殖和凋亡的影响 被引量:10
13
作者 陈雪斌 汪凤兰 张冠茂 《西北药学杂志》 CAS 2020年第1期62-66,共5页
目的探讨鸢尾苷元对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用下心肌成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法采用差速贴壁法获得纯化的大鼠心肌成纤维细胞,采用MTT法和原位末端标记法检测鸢尾苷元或磷脂肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对An... 目的探讨鸢尾苷元对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用下心肌成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法采用差速贴壁法获得纯化的大鼠心肌成纤维细胞,采用MTT法和原位末端标记法检测鸢尾苷元或磷脂肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对AngⅡ作用下心肌成纤维细胞增殖和凋亡的影响,采用RT-PCR检测鸢尾苷元对AngⅡ作用下心肌成纤维细胞中凋亡相关基因Bcl-2、Bax mRNA表达的影响,Western blot法检测鸢尾苷元对AngⅡ作用下心肌成纤维细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和PI3K/Akt信号通路相关蛋白p-Akt、T-Akt表达的影响。结果AngⅡ能明显促进心肌成纤维细胞增殖,抑制细胞凋亡;给予50,100和200μmol·L^-1鸢尾苷元后,AngⅡ使心肌成纤维细胞促增殖和抑凋亡作用明显受到抑制,且200μmol·L^-1鸢尾苷元作用最显著。200μmol·L^-1鸢尾苷元能够明显抑制AngⅡ诱导的Bcl-2 mRNA和p-Akt、Bcl-2蛋白的表达;减弱AngⅡ对Bcl-2 mRNA和蛋白表达的抑制作用,不影响T-Akt蛋白表达。PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002作用后,AngⅡ使心肌成纤维细胞的促增殖和抑凋亡作用明显受到抑制;而给予PI3K/Akt信号通路激活剂HY-N1412作用后,AngⅡ对心肌成纤维细胞的促增殖和抑凋亡作用明显得到促进,HY-N1412能明显逆转鸢尾苷元对AngⅡ刺激下的心肌成纤维细胞抑增殖和促凋亡作用。结论鸢尾苷元可通过PI3K/Akt信号通路减弱AngⅡ对心肌成纤维细胞促增殖和抑凋亡作用。 展开更多
关键词 鸢尾苷元 心肌成纤维细胞 细胞增殖 凋亡 磷脂肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信号通路
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大鼠心肌成纤维细胞体外培养的生物学特性及转基因研究 被引量:2
14
作者 汪进益 范慧敏 +3 位作者 刘中民 卢蓉 马亮 李杨 《上海医学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期314-316,F0002,共4页
目的观察大鼠心肌成纤维细胞(CFs)体外培养的生长增殖情况及肌肉转录调节因子(MyoD)基因转染对其生物学特性的影响。方法采用改良的差速贴壁法培养大鼠CFs,利用携带MyoD cDNA的真核表达载体pLenti6/V5-DEST-MyoD转导培养的大鼠CF... 目的观察大鼠心肌成纤维细胞(CFs)体外培养的生长增殖情况及肌肉转录调节因子(MyoD)基因转染对其生物学特性的影响。方法采用改良的差速贴壁法培养大鼠CFs,利用携带MyoD cDNA的真核表达载体pLenti6/V5-DEST-MyoD转导培养的大鼠CFs,用稻瘟菌素筛选2周,挑选转基因单克隆细胞,传代培养,进行细胞形态观察、生长曲线以及细胞免疫化学鉴定。结果成功建立高纯度大鼠CFs的细胞培养模型,且具有良好的细胞形态、正常的生长增殖等生物学功能。转染细胞的MyoD cDNA基因表达阳性,其下游抗α-肌动蛋白(α-actin)呈阳性表达,胞质呈棕黄色,并且含有与细胞纵轴平行排列的肌丝,细胞核用苏木素复染后呈淡蓝色。在2.0×10^5/mL细胞密度的CFs接受转MyoD基因后,抗α-actin阳性率为(27.04±9.41)%。结论真核表达载体成功介导MyoD cDNA转导入体外培养的大鼠CFs,诱导其转化为具有潜在功能的类骨骼肌细胞,CFs可成为心血管疾病基因治疗的靶细胞。 展开更多
关键词 心肌成纤维细胞 细胞培养 肌肉转录调节因子 转基因 靶细胞
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血管紧张素Ⅱ对心脏成纤维细胞PTEN基因表达及增殖的影响 被引量:6
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作者 聂凌 王江 +1 位作者 宋熔 祝善俊 《心脏杂志》 CAS 2007年第4期377-379,共3页
目的以AngⅡ刺激乳鼠心脏成纤维细胞(CFC),观察CFC的增殖情况以及第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(PTEN)及转化生长因子-β1(TGF-β1)基因表达。方法以AngⅡ(1×10-7mmol/L)刺激分离培养的CFC,以MTT法检测成纤维细胞的增... 目的以AngⅡ刺激乳鼠心脏成纤维细胞(CFC),观察CFC的增殖情况以及第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(PTEN)及转化生长因子-β1(TGF-β1)基因表达。方法以AngⅡ(1×10-7mmol/L)刺激分离培养的CFC,以MTT法检测成纤维细胞的增殖情况,以RT-PCR的方法检测PTEN及TGF-β1基因表达。结果MTT测定的结果:32 h后AngⅡ刺激组的吸光值(A)显著高于该时间点对照组(P<0.05),与正常对照组相比,AngⅡ作用组PTEN基因表达显著下降(P<0.05),TGF-β1基因显著上调(P<0.05)。结论在AngⅡ的刺激下,CFC的TGF-β1表达上调,抑制PTEN基因表达,并引起细胞增殖。 展开更多
关键词 心脏成纤维细胞 血管紧张素Ⅱ 第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因 转化生长因子-Β1 增殖
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新生大鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞的同时分离 被引量:9
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作者 施雨露 李晓辕 +2 位作者 曹美娜 于姝媛 王苹 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第24期4414-4420,共7页
背景:利用心肌组织中不同细胞的黏附特性差异,通过优化心肌细胞的培养条件,一次分离同时获得心肌和心肌成纤维细胞。目的:探讨新生大鼠心肌和心肌成纤维细胞同时分离的有效方法。方法:采用低浓度胰蛋白酶冷消化结合胶原酶复合消化,差速... 背景:利用心肌组织中不同细胞的黏附特性差异,通过优化心肌细胞的培养条件,一次分离同时获得心肌和心肌成纤维细胞。目的:探讨新生大鼠心肌和心肌成纤维细胞同时分离的有效方法。方法:采用低浓度胰蛋白酶冷消化结合胶原酶复合消化,差速分离心肌和心肌成纤维细胞。通过使用不同种类的血清改良心肌细胞培养条件,免疫荧光鉴定心肌细胞和心肌成纤维细胞纯度。结果与结论:心肌培养48h时TroponinT阳性细胞率为89.3%。第2代的心肌成纤维细胞培养波形蛋白阳性细胞率为93.6%。含马血清的培养基组心肌细胞阳性率明显高于牛血清培养组(P<0.05)。实验应用的新生大鼠心肌细胞分离培养方法,心肌细胞和心肌成纤维细胞纯度高、活性好,且能同时获得心肌细胞和心肌成纤维细胞。 展开更多
关键词 组织构建 心脏组织构建 心肌细胞 心肌成纤维细胞 胰蛋白酶 胶原酶 复合消化 细胞培养 血清 牛血清 增殖 分化
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高糖通过上调Axl受体表达促进心肌成纤维细胞增殖 被引量:3
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作者 刘存飞 杨群芳 +3 位作者 符江琳 徐晓 陈星霖 刘承云 《医学研究杂志》 2011年第9期110-113,共4页
目的探讨不同浓度糖在心肌成纤维细胞增殖中的作用及Axl酪氨酸激酶受体在血糖调控心肌成纤维细胞增殖中的作用。方法分别用不同浓度糖孵育乳鼠心肌成纤维细胞,48h后分别检测细胞增殖、细胞周期以及Axl mRNA的表达量。结果 (1)高糖组心... 目的探讨不同浓度糖在心肌成纤维细胞增殖中的作用及Axl酪氨酸激酶受体在血糖调控心肌成纤维细胞增殖中的作用。方法分别用不同浓度糖孵育乳鼠心肌成纤维细胞,48h后分别检测细胞增殖、细胞周期以及Axl mRNA的表达量。结果 (1)高糖组心肌成纤维细胞增殖显著高于正常糖组[OD490:正常糖组(5mmol/L)0.358±0.023;高糖组(25mmol/L)0.446±0.036;P<0.01]。(2)高糖显著促进Axl表达上调(Ct值:正常糖组28.996±0.579;高糖组27.253±0.548;相对表达量:1∶2.63;P<0.05)。(3)高糖显著促进心肌成纤维细胞进入增殖周期(正常糖组G1%73.89±5.52;G2+S+M%26.11±5.52;高糖组G1%63.22±6.52;G2+S+M%36.78±6.52;P<0.05)。结论高糖能够通过上调Axl受体表达促进离体培养乳鼠心肌成纤维细胞增殖,Axl受体在糖尿病性心肌病变中有可能扮演重要作用。 展开更多
关键词 心肌成纤维细胞 Axl酪氨酸激酶受体 高糖 细胞增殖
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诱导心脏肌成纤维细胞向心肌样细胞转分化的miRNA 被引量:7
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作者 张成 章少中 +4 位作者 张亚洲 张国恒 王韵茹 董红燕 张中明 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第45期7924-7931,共8页
背景:微小RNA(miRNA)是一类非编码小分子RNA,miRNA参与调控基因表达,在促进前体细胞增殖与分化中发挥了重要的作用。miRNA是否可促进前体细胞向心肌细胞的分化则鲜见报道。目的:验证转入特定miRNA(miRNA-1、miRNA-499)诱导新生小鼠心脏... 背景:微小RNA(miRNA)是一类非编码小分子RNA,miRNA参与调控基因表达,在促进前体细胞增殖与分化中发挥了重要的作用。miRNA是否可促进前体细胞向心肌细胞的分化则鲜见报道。目的:验证转入特定miRNA(miRNA-1、miRNA-499)诱导新生小鼠心脏肌成纤维细胞转分化为心肌样细胞的可行性。方法:体外培养新生小鼠心脏成纤维细胞,常氧培养传代至P2;37℃低氧(体积分数3%O2)培养48 h;免疫荧光染色检测心脏成纤维细胞特异性标记物波形蛋白的表达,免疫荧光染色、流式细胞技术检测心脏成纤维细胞向心脏肌成纤维细胞表型转化的标记物α-平滑肌激动蛋白的表达。实验分为4组:miRNA-1转染组、miRNA-499转染组、miRNA-1/miRNA-499共转染组及空白对照组,采用miRNA芯片检测心脏肌成纤维细胞与心肌细胞中微小RNA的表达差异;real-time qPCR方法验证芯片检测结果。结果与结论:心脏肌成纤维细胞中过表达miR-1、miR-499后,心脏发育不同阶段特异性因子发生不同程度的表达变化,与空白对照组相比,其余3组GATA4、Tbx5、Mef-2c、α-MHC表达明显增高,Mesp1、Isl1表达均无显著变化。结果表明,特定miRNAs可诱导心脏肌成纤维细胞表达心肌细胞特异性性标志物,具备诱导心脏肌成纤维细胞向心肌细胞直接转分化的潜力。 展开更多
关键词 干细胞 干细胞培养与分化 miR-1 miR-499 微小RNA 心脏成纤维细胞 心脏肌成纤维细胞 转分化 心肌细胞 波形蛋白 α-平滑肌激动蛋白 国家自然科学基金 干细胞图片文章
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新生大鼠心肌细胞体外培养及其与心肌成纤维细胞形态比较 被引量:4
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作者 范雪晖 王文锋 徐振平 《新乡医学院学报》 CAS 2009年第2期129-132,共4页
目的探索一种快速分离和培养新生大鼠心肌细胞的方法,比较心肌细胞和成纤维细胞的形态差异。方法胰蛋白酶消化法分离新生大鼠心肌细胞进行体外培养,差速贴壁法纯化心肌细胞,倒置显微镜跟踪观察心肌细胞的生长及搏动情况,台盼兰负染法检... 目的探索一种快速分离和培养新生大鼠心肌细胞的方法,比较心肌细胞和成纤维细胞的形态差异。方法胰蛋白酶消化法分离新生大鼠心肌细胞进行体外培养,差速贴壁法纯化心肌细胞,倒置显微镜跟踪观察心肌细胞的生长及搏动情况,台盼兰负染法检测心肌细胞活力,通过HE染色观察心肌细胞和成纤维细胞的形态学差异。结果接种24 h后细胞全部贴壁,部分细胞开始自发性搏动,48 h后,细胞体积增大,并伸出伪足,形状以三角形和梭形为主,3 d后细胞聚集成片并同步搏动且细胞活力均在90%以上。心肌细胞为梭形或三角形,胞质致密,多为单核细胞;心肌成纤维细胞呈泡状,双核和三核细胞较多,培养过程中不发生搏动。结论胰蛋白酶消化法培养新生大鼠心肌细胞快速有效,差速贴壁法纯化的心肌细胞可用于实验研究。 展开更多
关键词 心肌细胞 细胞培养 心肌成纤维细胞 大鼠
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心脏成纤维细胞生物表型多样性 被引量:3
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作者 常玉巧 李辞霞 +1 位作者 贾阳阳 郭志坤 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期317-323,共7页
目的探讨心脏成纤维细胞(CFs)生物表型多样性。方法新生1~3天SD大鼠12只,胰蛋白酶/胶原酶联合消化法分离培养新60只生大鼠CFs,比较原代和传代培养细胞形态学变化,免疫组织化学学检测鉴定常见成纤维细胞标记波形蛋白(vimentin)、成纤维... 目的探讨心脏成纤维细胞(CFs)生物表型多样性。方法新生1~3天SD大鼠12只,胰蛋白酶/胶原酶联合消化法分离培养新60只生大鼠CFs,比较原代和传代培养细胞形态学变化,免疫组织化学学检测鉴定常见成纤维细胞标记波形蛋白(vimentin)、成纤维细胞特异性蛋白1(FSP1)和盘状结构域受体(DDR2)的表达,细胞免疫荧光检测CFs干细胞标记nanog、c-kit、sca-1、CD73和CD90的表达,细胞免疫荧光三标技术检测CFs干细胞标记间的共表达情况。结果酶联合消化法分离培养的CFs收获细胞量大,第3代细胞活力好、纯度高。Vimentin、FSP1和DDR2在CFs中均表达,但DDR2在CFs中呈强表达。部分CFs分别表达nanog、c-kit、sca-1、CD73和CD90,部分nanog阳性的CFs分别和CD73、CD90和sca-1,及其CD90和sca-1存在共表达,nanog^+/CD73^+共表达阳性率最高(59.02%±8.39%),与其他3组相比差异均有极显著性(P<0.01);而nanog^+/CD90^+共表达阳性率与nanog^+/sca-1^+之间差异无显著性(P>0.05),但这两组与CD90^+/sca-1^+相比差异均有极显著性(P<0.01);CD90^+/sca-1^+共表达阳性率均低于其他3组,差异具有极显著意义(P<0.01)。结论 CFs是具有干细胞特征混合细胞群,在表型上具有多样性。 展开更多
关键词 心脏成纤维细胞 干细胞标记 细胞培养 免疫组织化学 新生大鼠
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