大花金挖耳细胞悬浮培养及其胞内代谢产物化感潜力的研究

为了优化大花金挖耳（Carpesium macrocephalum Franch.et Sav.）细胞悬浮培养的条件,评价其胞内代谢产物的化感潜力。本文研究了无机盐浓度不同的MS,1/2MS,B5,1/2B5,NT和1/2NT等6种培养基及NT中N,P,Ca,Mg,K等5种大量元素含量对大花金挖耳悬浮培养细胞生物合成黄酮的影响,并采用微量活性测定法测定了其细胞培养物的化感潜力。结果表明：大花金挖耳细胞悬浮培养的最优基本培养基是NT,NT中总氮浓度为50.62 mmol·L^-1,NH4^＋∶NO3^-为2∶3时,黄酮含量最高为1.38%,H2PO4^-,Ca^2＋,Mg^2＋,K^＋等离子依次在5.00,1.50,0.50-1.00,14.39-27.81 mmol·L^-1范围内有利于大花金挖耳悬浮培养细胞的生长和黄酮合成;大花金挖耳悬浮培养细胞的粗提物对供试的紫花苜蓿（Medicago sativaL.）、刺儿菜（Cephalanoplos segetum（Bge.）Kitam.）、反枝苋（Amaranthus retroflexus L.）、小白酒草（Conyza canadensis（L.）Cronq.）和小麦（Triticum aestivumL.）等5种植物幼苗根生长均具有抑制作用,毒力依次为10.66,12.32,15.85,102.16,210.96 mg·mL^-1。

大花金挖耳不同部位挥发油化学成分比较分析

采用GC-MS技术,对利用水蒸气蒸馏法从大花金挖耳根、茎、叶、花及花托等5个部位获得的挥发油组分进行了分析.从大花金挖耳5种挥发油中共鉴定出99种成分,从根、茎、叶、花及花托分别鉴定出了37、34、47、29和40种化合物,已鉴定的组分分别占相应挥发油的85.86%、84.98%、83.06%、84.58%和89.06%.5个部位挥发油化学组成差异较大,根挥发油主要成分为倍半萜类和酯类;茎挥发油主要为倍半萜和烯类(包括烯醇、烯酸、烯酮);叶和花挥发油主要为烯类(包括烯醇、烯酸、烯酮)和酯类;花托挥发油主要为倍半萜类和二萜类.

大花金挖耳愈伤组织诱导与增殖

以大花金挖耳无菌苗的子叶、下胚轴和根为外植体,进行愈伤组织诱导与增殖研究.结果表明：大花金挖耳无菌苗的根是诱导愈伤组织的理想外植体;其愈伤组织诱导的最适培养基为：Bs＋3.0 mg/L NAA＋0.2 mg/L 6-BA,诱导率可达100%;愈伤组织的增殖在45 g/L的蔗糖、pH 5.7、光照12 h/d培养条件下可延迟愈伤组织褐化出现的时间,并维持其良好的组织结构,愈伤组织的最适继代周期为30～40 d.

大花金挖耳细胞培养物中总黄酮含量的检测

[目的]研究大花金挖耳果实和细胞培养物总黄酮含量的定性和定量测定。[方法]采用试管法和紫外分光光度法对大花金挖耳果实和细胞培养物中的黄酮进行定性鉴定;用紫外分光光度法测定总黄酮含量。[结果]试管法和紫外分光光度法检测到大花金挖耳果实细胞培养物含有黄酮;紫外分光光度法测定时,在其最大吸收峰510 nm处测得对照品在8.00～48.00μg/ml范围内线形关系良好(r=0.999 7),平均回收率为98.60%,RSD=1.12(%n=5)。[结论]所用方法简便、准确、稳定、灵敏、重现性好,可用于大花金挖耳果实和细胞培养物总黄酮含量的检测。

2,4-D和KT对大花金挖耳愈伤组织诱导的影响

以大花金挖耳无菌苗的根为外植体，研究了不同质量浓度的2，4-D和KT对愈伤组织诱导的影响。结果表明：低浓度的2，4-D（0．25～0．5mg／L）单独使用促进愈伤组织形成，随着2，4-D质量浓度的增加，愈伤组织的形成逐渐变弱；在培养基、2，4-D和KT诱导愈伤组织的正交试验中，发现2，4-D对愈伤组织诱导率的影响最大，基本培养基次之，KT影响最小，对愈伤组织诱导的较优组合为B2＋2，4-D0．1mg／L＋KT0．4mg／L；在优化诱导愈伤组织的激素浓度配比试验中发现B5＋2，4-D0．1mg／L＋KT0．2～0．4mg／L对大花金挖耳愈伤组织的诱导率为100％，且产生的愈伤组织多为淡黄色、质地疏松、生长快、褐化时间长，适合于大花金挖耳愈伤组织的诱导。

大花金挖耳无菌外植体的获得及愈伤组织诱导的初步研究

以大花金挖耳（Carpesium macrocephalum Franch.et Sav）种子为材料，进行了种子消毒和愈伤组织诱导及继代的初步研究。结果表明，对大花金挖耳种子进行消毒的最佳条件为，以体积分数70％的乙醇消毒5min后，再用50％的NaClO3处理30min。在大花金挖耳无菌苗的根形成愈伤组织的正交试验中，基本培养基对愈伤组织诱导率的影响最大，NAA次之，6-BA影响最小，对愈伤组织诱导的较优组合是B5＋NAA3．0mg／L＋6-BA0．2mg／L，诱导率为100％；在优化诱导愈伤组织的激素浓度配比试验中，B5＋NAA2．0～3．0mg／L＋6-BA0．2～0．4mg／L对大花金挖耳愈伤组织的诱导率为100％，且产生的愈伤组织多为淡黄色、质地疏松、生长势极好、褐化时间长，适合于大花金挖耳愈伤组织的诱导。在培养基中分别添加500mg／LVc、和10000mg／L PVP能抑制大花金挖耳愈伤组织的褐变，且有利于愈伤组织的继代。

大花金挖耳药学研究概况

在广泛文献检索基础上,对大花金挖耳的种属、历史、应用情况、成分、药理和临床应用等进行综述,为其进一步开发和利用提供资料。

大花金挖耳中单萜类化学成分的研究

目的研究大花金挖耳Carpesium macrocephalum全草的化学成分。方法采用硅胶、ODS、Sephadex LH-20等色谱方法进行分离纯化,根据理化性质、波谱数据以及X-射线单晶衍射方法鉴定化合物的结构。结果从大花金挖耳丙酮提取物中分离得到5个百里香酚类单萜,分别鉴定为（Z）-10-异丁酰氧基-9-氯-8,9-二羟基百里香酚（1）、9-异丁酰氧基-7,8-环氧-百里香酚异丁酸酯（2）、8-羟基-9-异丁酰氧基-10（2）-甲基丁酰氧基百里香酚（3）、8,10-二羟基-9-异丁酰氧基百里香酚（4）、10-异丁酰氧基-8,9-二羟基百里香酚（5）。结论化合物1为新化合物,命名为大花金挖耳素;化合物2~5为首次从该属植物中分离得到。