SYBR Green实时荧光PCR快速鉴定枣实蝇技术

应用SYBR Green实时荧光PCR技术,建立SYBR Green实时荧光PCR快速鉴定枣实蝇的方法。利用枣实蝇（mtDNA）中COⅠ基因序列,设计筛选出1对种的特异引物CarF/CarR。引物的特异性分别用桔小实蝇、瓜实蝇、南瓜实蝇、番石榴实蝇和桃果实蝇5种实蝇来验证。SYBR Green PCR实时荧光反应的灵敏度用40,20,10,1,0.1,0.01,0.001 ng·μL^-1 7个浓度枣实蝇DNA模板来检测。结果表明：SYBR Green PCR的检测限度达0.01 ng·μL^-1以下,最适模板DNA浓度为1～20 ng·μL^-1。SYBR Green实时荧光PCR的可靠性可用枣实蝇不同虫态（幼虫、蛹、成虫）的扩增曲线、熔解曲线及PCR产物的琼脂糖凝胶电泳来检验。成虫、幼虫和蛹3种不同虫态的枣实蝇有一致的扩增曲线,熔解曲线分析和琼脂糖凝胶电泳条带分别用来确认实时荧光PCR产物的特异性;其平均熔解温度为（75.3±0.1）℃,并获得一段长为205 bp的特异性目标片段,说明在枣实蝇成虫为模板的基础上建立的SYBR Green实时荧光PCR方法同时适用于幼虫、蛹的快速鉴定,可将不同虫态的枣实蝇与近似种类区分开来。

检疫性害虫枣实蝇的鉴定与入侵威胁

枣实蝇Carpomya vesuviana Costa是我国2007年新增补的进境植物检疫性有害生物,枣实蝇的入侵可能对我国枣业生产构成毁灭性危害。文章详细介绍枣实蝇的鉴别特征及其和近缘种的区别,对枣实蝇的危害、生物学特性和防治技术进行介绍,对我国警惕枣实蝇入侵提出预警。

枣实蝇不同发育阶段过冷却点及结冰点的测定

为初步探究枣实蝇耐寒能力,利用过冷却点测定仪对枣实蝇(Carpomya vesuviana Costa)不同发育阶段的过冷却点及体液结冰点进行测定。结果表明,枣实蝇不同发育阶段的过冷却点不同,同一虫态个体间的过冷却点出现不同程度的差异。不同虫龄的过冷却点和体液结冰点差异显著,表现为随着虫龄的增加过冷却点和体液结冰点降低。其中枣实蝇3龄幼虫的过冷却点平均值为(-9.75±0.64)℃,体液结冰点平均值为(-5.53±0.46)℃。枣实蝇30日龄蛹过冷却点平均值为(-22.71±1.21)℃,1日龄蛹平均值为(-7.28±1.08)℃;而枣实蝇30日龄蛹的体液结冰点平均值为(-17.01±2.34)℃,1日龄蛹平均值为(-5.49±0.56)℃。可见,栆实蝇过冷却点较低,具有很强的耐寒性,极有可能适宜在中国大部分枣产区生存。

枣实蝇在中国适生性初步研究

枣实蝇是严重危害枣类生产的重要害虫。本文采用CLIMEX模型与ArcGIS分析相结合的预测方法对枣实蝇在我国的适生性进行了研究,在明确枣实蝇CLIMEX参数指标体系和适生性评判标准的基础上,分析了该实蝇在我国的适生区域和适生程度。结果表明,枣实蝇在我国的适生区域广泛,适生程度偏高:山东、河南、陕西、山西、河北、北京、天津及云南大部分地区,辽宁和广西西部,四川和甘肃东部,江苏、安徽和湖北北部,以及新疆西部和北部的适生程度为高;辽宁和广西中东部,四川西部,重庆大部,湖北和安徽中部,江苏中北部,福建、江西和湖南的零星地区具有中度适生性。鉴于枣实蝇在我国的适生性研究结果,建议采取有效的防控策略,加强枣实蝇检疫措施,完善监测体系,严防该虫的入侵和扩散。

检疫性有害生物枣实蝇研究进展

枣实蝇为国家进境检疫性有害生物和全国林业检疫性有害生物,专性危害枣属植物,以幼虫蛀食枣果果肉进行危害,严重影响枣果的品质,造成巨大的经济损失。综述枣实蝇的分类地位、分布与寄主、生物生态学特性及防治措施等方面的内容,并对今后的研究进行展望。

枣实蝇产卵选择习性研究

通过枣实蝇产卵选择习性研究,发现枣实蝇喜欢产卵于枣果的背阴面及底部,其产卵孔周围呈现凹陷或瘤状凸起症状,且对不同品种枣果的产卵选择性不同,‘鸡心枣’、‘骏枣’对枣实蝇的抗性大于‘梨枣’、‘灰枣’和‘相枣’;枣果受伤害程度越重,产卵量就越少;不同大小的枣果均受到危害,且以中型果受害最为严重;随枣果成熟度的增加其产卵量逐渐减少,且不产卵于完全红的枣果上。同时枣实蝇对枣、海棠果、青杏、番茄、葡萄等不同寄主的产卵选择性均存在显著性差异,但更喜欢产卵于枣果。胁迫性寄主试验中不同寄主果实的产卵量存在显著差异,但枣果与杏之间的产卵量差异不明显,而且枣实蝇可以在杏果中化蛹并羽化。

枣实蝇4个地理种群的线粒体Cytb、基因序列分析

新人侵重大检疫性害虫枣实蝇（Carpomya vesuviana）于2007年首次在吐鲁番地区发现，对该地区枣（Zizyphus jujuba）产业造成了毁灭性损失，且疫情有向其他地区扩散的趋势。枣实蝇原产印度，现已扩散至阿富汗、塔吉克斯坦、泰国、意大利等国家（张润志等，2007）。枣实蝇以成虫产卵和幼虫蛀食危害枣果，成虫产卵于果实表面，致使产卵孔周围组织发育停止，形成凹陷或畸形。

枣实蝇成虫飞行能力的测定

【目的】为了明确枣实蝇Carpomya vesuviana Costa成虫飞行扩散能力及相关因子对其飞行能力的影响。【方法】本研究以SUN-FL型智能昆虫飞行信息系统（飞行磨）吊飞方法,测定了不同日龄、性别的枣实蝇成虫的飞行能力,并探究了温度对枣实蝇飞行能力的影响。【结果】羽化后12 d左右的枣实蝇飞行能力最强,雌虫平均飞行距离和最远飞行距离分别为1.037和3.192 km,雄虫分别为0.943和3.085 km;枣实蝇飞行能力随着日龄的增加呈现先增强后减弱的趋势;相同日龄的雌成虫平均飞行距离、平均飞行时间略高于雄虫,雌、雄虫的平均飞行距离、平均最快飞行速度、平均飞行时间之间没有显著性差异;环境温度28~34℃为枣实蝇最佳飞行温度区间,且31℃条件下飞行能力最强。【结论】由此可见,枣实蝇成虫具有较强的迁飞扩散能力。

枣实蝇及其他5种检疫性实蝇的PCR-RFLP快速鉴定

枣实蝇(Carpomya vesuviana Costa)是一种新入侵检疫性有害生物。应用PCR-RFLP技术,快速区分鉴定了枣实蝇与我国口岸截获频率较高的5种检疫性实蝇。研究表明:设计出的2对引物对6种供试实蝇线粒体DNA(mtDNA)进行PCR扩增,其扩增片断大小分别为350 bp和450 bp。PCR扩增产物用2种限制性内切酶Dra I和MseI进行酶切,根据不同的酶切位点准确区分了6种供试的实蝇。此方法可用于口岸截获实蝇的快速检疫鉴定。

枣实蝇成虫饲养初报

不同饲料饲养的枣实蝇成虫产卵、孵化、寿命有很大的差异。采用蜂蜜(A)、酸水解酪蛋白+蔗糖(B)、酵母浸粉+蔗糖(C)3种饲料饲养枣实蝇成虫,结果表明:饲料C饲养的枣实蝇单组平均产卵量为(116.33±6.73)粒,与饲料A,B组差异显著;饲料C单组平均孵化率86.13%±1.31%,与饲料A,B差异性不显著;饲料C饲养的枣实蝇最长寿命128 d,优于饲料A(95 d)和饲料B(108 d)。饲料C饲养枣实蝇,各项指标均达到满意的要求。

枣实蝇生物学特性研究

枣实蝇Carpomy avesuviana Costa作为一种高度危险性的外来有害生物,为害枣树并严重影响枣产品质量及其商品价值。本文通过在新疆进行的人工饲养和野外观察试验,对枣实蝇的羽化、交尾、产卵和有效积温等生物学特性进行了研究。结果表明:枣实蝇羽化主要集中在8:00-11:00,占总羽化数的86.3%,其羽化高峰期出现在10:00前后。交尾平均时长为309.00±8.46min,交尾高峰分别出现在11:00-12:00和20:00-21:00。雌虫产卵平均时长为8.20±0.51min;产卵节律不明显,9:00之前和21:00之后产卵量较小,白天各个时间段产卵量无显著性差异。成虫单日产卵量最高为16粒,平均每天产6～9粒,每产卵孔内有1～6粒卵。卵的发育起点温度为13.57℃,有效积温为48.18日·度;蛹的发育起点温度为6.38℃,有效积温为357.17日·度;卵到蛹期的发育起点温度为8.78℃,有效积温为283.29日·度;幼虫的发育起点温度6.39℃,有效积温为245.61日·度。本研究为进一步开展枣实蝇科学防控提供了基本资料。

枣实蝇在陕西省的风险性分析及检疫对策

为了评估枣实蝇(Carpomya vesuviana Costa.)在陕西的潜在危险性,以制定科学的检疫对策。参照国际上的有害生物风险分析方法,结合陕西省枣树资源分布情况,对枣实蝇在陕西省的3个地理区域进行了风险性分析和综合评估。结果表明:枣实蝇在陕北、关中和陕南的评估风险性R值分别为2.239、2.065、1.469,枣实蝇在陕北和关中为高度危险性害虫,在陕南为低度危险性害虫。根据枣实蝇在陕西3个地区的风险性分析的评估结果,提出了防止枣实蝇入侵陕西的检疫对策。

枣实蝇不同地理种群的亲缘关系

枣实蝇是一种高度危险性外来有害生物。对吐鲁番市、KSS、HSX和HMS4个不同地区采集的枣实蝇mtDNACOI基因片段测序,并进行序列比较和系统发育分析。结果表明:采自吐鲁番市、HSX、HMS的枣实蝇遗传距离最近,为0.002,其相似性高达99.8%。吐鲁番市枣实蝇和HMS枣实蝇分别与KSS枣实蝇的遗传距离最远,为0.062,其相似性为94.1%。对以上几个地点采集的枣实蝇基因序列与已公开报道的外群蔷薇咔实蝇Carpomya schineriR248FJ571365.1、蔷薇咔实蝇Carpomya schineriR141FJ571364.1、樱桃绕实蝇Rhagoletis cerasiGQ175823.1同源序列进行相似性比较分析,结果显示HMS枣实蝇与蔷薇咔实蝇相似性高达96.5%。根据进化树对比分析,吐鲁番市、HSX和HMS的枣实蝇来自同一地区,而KSS枣实蝇从另一地区传入。

枣实蝇mtDNA COI基因片段克隆技术研究

利用DNA克隆技术,首次克隆了检疫性害虫——枣实蝇不同地理种群mtDNA COI基因从M7至COOH之间的片段,从而初步建立了枣实蝇的基因片段库,为枣实蝇的分子生物学鉴定和分子系统发育等相关研究提供数据。

枣实蝇药剂防治试验初报

经室内外药效对比试验,筛选出对枣实蝇幼虫和蛹防效较好的药剂。试验结果表明,供试药剂中对蛹土壤处理效果好的药剂是20%辛硫.灭多威乳油和48%毒死蜱乳油,其室内药效达到了95%以上。5%吡虫啉乳油、11.1%顺式氯氰菊酯乳油、2.5%功力乳油对蛹的药效较差。田间树冠喷雾防治幼虫药效好的药剂是5%吡虫啉乳油,药效达到92.37%。48%毒死蜱乳油、20%辛硫.灭多威乳油、11.1%顺式氯氰菊酯乳油对幼虫的药效较差。

枣实蝇对枣果挥发物的选择行为

[目的]探究对枣实蝇有引诱作用的挥发性物质,研发基于行为调节的防治技术。[方法]采用Y型嗅觉仪测定了枣实蝇成虫对6种枣果挥发物的选择行为反应,并在室内试验的基础上进行田间引诱试验。[结果]室内试验结果显示,枣实蝇成虫对6种枣果挥发物具有显著正趋性。枣实蝇雌虫对棕榈酸乙酯、月桂酸乙酯、肉豆蔻酸的选择率较强,选择率均为30%以上;雄虫对亚油酸乙酯、油酸乙酯的选择率较强,选择率均为25%以上,从不同浓度梯度(原液、10%溶液、1%溶液)的选择率和选择系数来看,随浓度的递减,其选择率和选择系数也在递减,原液的选择率分别为10%溶液及1%溶液的2.5倍及5倍以上。田间试验发现:肉豆蔻酸对枣实蝇雌虫的诱集效果较强,2 d最多诱捕数量为15头·只^-1,平均诱捕数量为11.4头·只^-1,十四酸乙酯次之。在6种不同挥发物中油酸乙酯和亚油酸乙酯对枣实蝇雄虫的引诱效果较强。经单因素方差分析发现,在6种挥发性物质及混合物中,月桂酸乙酯及十四酸乙酯对枣实蝇雌雄虫的引诱效果之间存在显著性差异。其他挥发物之间无显著差异。[结论]枣果挥发物中棕榈酸乙酯、月桂酸乙酯、肉豆蔻酸与枣实蝇偏爱选择密切相关。在田间试验中:枣实蝇成虫对肉豆蔻酸的选择率较强,为研发枣实蝇引诱剂提供了理论依据。

检疫性有害生物枣咔实蝇的快速分子鉴定

枣咔实蝇Carpomya vesuviana Costa是枣树果实的一种重要检疫性害虫,其寄主枣树在我国种植广泛,该虫一旦传入和扩散,将对我国新疆红枣产业造成严重危害。本研究以枣咔实蝇蛹和成虫为对象,通过提取枣咔实蝇蛹和成虫样品的基因组DNA,借助生物信息学分析软件挖掘枣咔实蝇ITS2、16S rRNA、CYT-B-D、CYT-B-C、COI-5'、COI-3'、COII等分子鉴定靶点序列并设计扩增引物,以建立枣咔实蝇的快速分子鉴定技术。PCR扩增、测序和序列相似性结果显示,从枣咔实蝇蛹和成虫中获得的16条序列(含14条新序列),分析表明其中CYT-B、COI、COII可作为枣咔实蝇分子鉴定序列。该技术可应用于枣咔实蝇的识别鉴定、实时监测、早期防治等项工作。

枣实蝇对不同发育期骏枣和酸枣果实的生物学响应变化

【目的】研究枣实蝇在寄主植物果实不同发育期的危害程度对其最佳防治期。【方法】分析枣园对不同寄主枣树样枝套袋枣实蝇的蛀果率,调查虫口密度;室内饲养测定果实不同发育期对枣实蝇生长发育和繁殖的影响,分析和评价枣实蝇对不同发育期骏枣和酸枣果实的生物学响应变化。【结果】枣实蝇对骏枣果实的蛀果率均大于对酸枣的蛀果率,并且枣实蝇在骏枣果实成熟期蛀果率为最大;成熟期骏枣上的虫口密度也最大;骏枣上雌虫产卵痕数、幼虫数和卵的孵化率均大于酸枣上的枣实蝇。在枣果着色期和成熟期,蛹的各项生长指标均高于膨大期;果实不同发育期,骏枣上的蛹各项生长指标均显著大于(P<0.05)酸枣上的;骏枣上枣实蝇的蛹期、雌虫怀卵量、性成熟历期、交配时间以及雌雄成虫寿命均略大于酸枣,但无显著差异(P>0.05)。【结论】枣实蝇对骏枣的选择性强于酸枣,并且成熟期的骏枣果实更适宜枣实蝇生长发育。

枣实蝇触角感器的超微结构初步研究

应用扫描电镜技术,对枣实蝇触角感器的类型、分布数量以及雌雄间的差异进行了初步研究。结果表明,枣实蝇触角上共有5种感器类型:鬃形感器、毛形感器、锥形感器、腔锥形感器和棒状感器。触角各节的感器类型和分布差异较大,以毛形感器分布数量最多,在触角各节均有分布,成簇着生于触角上,主要位于触角鞭节上;鬃形感器常成簇分布于柄节和梗节基部,而下颚须上松散分布,是所有感器当中最长的;锥形感器仅簇生于鞭节上,有大小锥两类;腔锥形感器是一类具孔感觉锥,位于表皮凹陷中的感受器,形状似圆锥,多分布于鞭节,是所有感器中最小的;棒状感器形态似棒球仅生于鞭节基部,长度似微毛。雌虫和雄虫的感器类型、分布和数量基本一致。

枣实蝇入侵我国的风险分析

根据国内外相关文献,对枣实蝇(Carpomya vesuviana Costa)在我国的分布、控制措施、扩散蔓延的可能性,对经济和环境的影响等进行了概述,并应用多指标综合分析法对其蔓延的风险进行评估,结果表明,枣实蝇是我国枣类(Ziziphusspp.)的重要有害生物,其风险值为2.20,在我国属高度危险有害生物。