胡萝卜抗冻蛋白在大肠杆菌中的高效表达

以pET - 11a为载体构建了胡萝卜抗冻蛋白非融合表达的重组质粒 ,并在大肠杆菌菌株BL2 1(DE3,pLysS)中成功地进行了高效表达。表达的蛋白质以包涵体的形式存在 ,相对分子质量为 36 80 0。经正交试验得到了优化的诱导表达条件。包涵体经各种缓冲液洗涤纯化、溶解、复性和超滤浓缩后 ,经SDS -PAGE电泳检测 ,纯度达单一带水平。生物学活性研究表明 ,重组表达的胡萝卜抗冻蛋白具有很强的热滞活性和提高细菌耐寒性的作用。

室温贮藏过程中胡萝卜口感及部分营养成分含量变化

胡萝卜（Daucus carota var．sativaDC．）别名红萝卜，为2年生草本植物，原产于中亚、西亚和非洲北部，于13世纪末传人中国；其根部营养物质丰富，特别是胡萝卜素及维生素等含量较高。胡萝卜在中国南北方栽种广泛，主要种植在长江以北地区，特别是高寒地区，是该地区主要冬贮蔬菜之一。中国是胡萝卜栽种和产量大国，栽种面积占全球栽种面积的40％，产量占全球总产量的30％左右。

外源GA_3对高原夏季胡萝卜肉质根发育的影响

为了揭示外源 GA3对胡萝卜肉质根发育的影响机理,并为高原夏季胡萝卜安全高效栽培技术研究提供参考理论,本试验以耐先期抽薹的胡萝卜品种为试材,采用酶联免疫吸附法（ELISA）,研究了外源 GA3对高原夏季胡萝卜肉质根膨大、木质化及其内源激素含量的影响。结果表明,在叶片旺盛生长期和肉质根迅速膨大期分别喷施5.78×10-4 mol·L-1外源GA31次,或在苗期、叶片旺盛生长期和肉质根迅速膨大期喷施5.78×10-4 mol·L-1外源GA31~3次,能显著降低高原夏季胡萝卜苗期肉质根日鲜重增长速率与库活力,促进肉质根木质化。与对照相比,喷施外源 GA3,可显著降低苗期肉质根内源 GA3、IAA、GA4、ABA、DHZR与 IPA含量,显著提高肉质根内源ZR含量；显著降低叶片旺盛生长期肉质根内源GA3、IAA、GA4、IPA含量,显著提高内源ZR含量；显著提高迅速膨大期肉质根内源 IAA、GA4、ZR 含量；显著降低肉质根迅速膨大期之前的 IAA/ZR 和GA4/ZR比值。随着外源GA3喷施次数的增多, IAA/ZR和GA4/ZR比值在肉质根迅速膨大期有逐渐增高的趋势。外源GA3通过改变内源激素含量及其平衡状态来影响高原夏季胡萝卜肉质根的发育。

胡萝卜肉质根线粒体DNA提取方法研究

本研究以胡萝卜根为材料,通过高盐差速离心和蔗糖沉淀差速离心两种方法提取线粒体DNA。通过改变缓冲液、使用DNaseⅠ处理得到了无核DNA污染的线粒体。用SDS和蛋白酶K裂解线粒体,经酚:氯仿:异戊醇抽提除去蛋白,并用RNaseA消化从而得到单纯线粒体DNA。本实验还特别设计了叶绿体特异性引物检测线粒体DNA纯度。结果表明:利用优化后的蔗糖沉淀差速离心法提取胡萝卜线粒体DNA,所得线粒体DNA纯度高、产量高,每克肉质根能够得到27.60μg线粒体DNA。

胡萝卜ISSR反应体系优化的研究

以改良CTAB法提取胡萝卜基因组DNA作为ISSR-PCR模板,通过单因素试验建立了一套适合胡萝卜ISSR-PCR的优化的反应体系,即25μL反应液中含10×buffer2.5μL,2.0mmol.L-1Mg2+,200μmol·L-1dNTPs,Taq酶1.5U,引物0.5μmol·L-1,DNA模板20ng。PCR扩增程序为:94℃预变性4min,94℃变性40s,48～58℃退火45s,72℃延伸2min,进行35个循环,72℃延伸8min,在16℃保存。应用该优化反应体系筛选出了24条有效引物。