CRISPR-Cas(clustered regularly interspaced short palindromic repeats and CRISPR-associated)系统是在细菌和古细菌基因组中发现的一种由RNA介导、抵挡外源核酸入侵的适应性免疫系统。通过对靶标位点的特异性识别,结合细胞自身的DN...CRISPR-Cas(clustered regularly interspaced short palindromic repeats and CRISPR-associated)系统是在细菌和古细菌基因组中发现的一种由RNA介导、抵挡外源核酸入侵的适应性免疫系统。通过对靶标位点的特异性识别,结合细胞自身的DNA修复功能或转录调控机制,CRISPR-Cas系统可高效编辑靶标序列或精准调控基因的表达,目前已被开发成为基因编辑领域的有力工具。根据效应复合物组成形式的不同,CRISPR-Cas系统分为1类(Ⅰ型、Ⅳ型和Ⅲ型)和2类(Ⅱ型、Ⅴ型和Ⅵ型)两大类。2类中的CRISPR-Cas9系统作为最早发现且被研究透彻的系统之一,应用范围已十分广泛;而1类系统虽占整个CRISPR-Cas系统的90%,但目前还未有开发成熟的应用工具。本综述以1类中的Ⅰ型系统为例,从亚型分类、效应复合物组装与结构、Cas3蛋白的切割降解机制以及近几年在基因编辑中的应用等方面进行总结,为更好地研究该类别的作用机制及后期的开发应用提供新的思路和方法。展开更多
文摘CRISPR-Cas(clustered regularly interspaced short palindromic repeats and CRISPR-associated)系统是在细菌和古细菌基因组中发现的一种由RNA介导、抵挡外源核酸入侵的适应性免疫系统。通过对靶标位点的特异性识别,结合细胞自身的DNA修复功能或转录调控机制,CRISPR-Cas系统可高效编辑靶标序列或精准调控基因的表达,目前已被开发成为基因编辑领域的有力工具。根据效应复合物组成形式的不同,CRISPR-Cas系统分为1类(Ⅰ型、Ⅳ型和Ⅲ型)和2类(Ⅱ型、Ⅴ型和Ⅵ型)两大类。2类中的CRISPR-Cas9系统作为最早发现且被研究透彻的系统之一,应用范围已十分广泛;而1类系统虽占整个CRISPR-Cas系统的90%,但目前还未有开发成熟的应用工具。本综述以1类中的Ⅰ型系统为例,从亚型分类、效应复合物组装与结构、Cas3蛋白的切割降解机制以及近几年在基因编辑中的应用等方面进行总结,为更好地研究该类别的作用机制及后期的开发应用提供新的思路和方法。
文摘目的幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)与消化系统肿瘤密切相关。本研究分析Hp在大肠癌变不同阶段感染情况,探讨Hp感染在大肠癌变过程中的作用,并进一步分析Hp感染与PIK3CA蛋白表达的相关性,初步探讨Hp在大肠癌变过程中的作用机制。方法免疫组织化学的方法检测PIK3CA在不同组织,包括正常大肠组织、腺瘤组织和大肠癌组织的表达情况,同步应用酶联免疫法(ELISA法)检测幽门螺杆菌粪便抗原(stool Hp antigen,HPSA),探讨Hp和PIK3CA在大肠癌变过程中的作用,进一步分析Hp感染与PIK3CA蛋白表达的相关性。结果 (1)在大肠癌、高级别腺瘤、低级别腺瘤和正常黏膜组中Hp的感染率分别为39.7%、42.1%、21.9%和12.5%,在大肠癌组中Hp的感染率显著高于正常黏膜组及低级别腺瘤组(χ~2=4.241,P=0.034;χ~2=4.322,P=0.030),而与高级别腺瘤组相比差异无统计学意义(χ~2=0.254,P=0.382),在高级别腺瘤组中Hp的感染率高于低级别腺瘤和正常黏膜组织,差异有统计学意义(χ~2=4.397,P=0.032;χ~2=5.131,P=0.022)。(2)在大肠癌、高级别腺瘤、低级别腺瘤和正常黏膜组中PIK3CA蛋白的表达率分别为54.4%、55.3%、15.7%和12.5%;在大肠癌组织中PIK3CA蛋白的表达率显著高于正常黏膜组及低级别腺瘤组(χ~2=9.148,P=0.002;χ~2=13.438,P=0.001),而与高级别腺瘤组中相比差异无统计学意义(χ~2=0.007,P=0.548);在高级别腺瘤组中PIK3CA蛋白的表达率高于低级别腺瘤和正常黏膜组织,差异有统计学意义(χ~2=11.690,P=0.001;χ~2=8.421,P=0.004)。(3)幽门螺杆菌感染与大肠癌的分化程度、淋巴结转移及TNM分期有明显的相关性,P<0.05。(4)幽门螺杆菌感染与PIK3CA蛋白的表达呈正相关,r=0.252,P=0.032。结论幽门螺杆菌感染在大肠癌变过程中具有重要作用,且幽门螺杆菌感染与PIK3CA蛋白的高表达具有相关性,为临床检测幽门螺杆菌预防及早期诊断大肠癌提供理论依据。