酪蛋白酶解产生β-Casomorphin-7样物质的ELISA检测

用酶联免疫吸附分析法(ELISA) 对酪蛋白经胃蛋白酶作用 30,60,90,120和 150 min的酶解消化液中β-Casomorphin－7样物质的含量进行了测定。结果分别为29．5±4．08,47．6±4．17,75．4±4．57,118±7．12和(99．2±5．69)ug/L;平均回收率为97．9%。ELISA方法检测结果表明,酪蛋白2h酶解消化液中β－Casomorphin－7样物质含量最高。

β-casomorphin-7对小鼠的免疫调节作用(英文)

目的:通过体外和体内方法研究β-casomorphin-7对小鼠脾脏淋巴细胞和腹腔巨噬细胞的作用.方法:利用脾细胞增殖试验和腹腔巨噬细胞中NO浓度的变化来研究体外不同的β-casomorphin-7浓度对脾脏淋巴细胞的增殖和腹腔巨噬细胞中NO浓度变化的影响,以及腹腔注射β-casomorphin-7和饮用β-casomorphin-7溶液对上述两个指标的影响.结果:体外试验表明,β-casomorphin-7在不同浓度对脾脏淋巴细胞的增殖显示了刺激和抑制的双向作用,而对NO的产生显示了明显的抑制作用(P＜0.01).体内试验表明,β-casomorphin-7通过腹腔注射和饮用两种给药方式对脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞的作用是一致的.β-casomorphin-7显著地增强了脾淋巴细胞的增殖反应(P＜0.01),且抑制了腹腔巨噬细胞NO的产生.结论:当前的试验表明,β-casomorphin-7具有免疫调节作用,且小鼠在2～3周龄时,可吸收入血发挥免疫调节作用.

大鼠胃肠道食糜中β-Casomorphin-7样物质的酶联免疫吸附分析

利用建立的一种酶联免疫吸附试验 (ELISA)对大鼠胃肠道食糜中的 β 酪啡呔 7(β Casomorphin 7)样物质进行了检测分析。动物试验采用30只成年大鼠 ,随机分为 5组。对照组Ⅰ ,仅喂葡萄糖盐水 ;对照组Ⅱ ,喂大豆和饮水 ;试验组Ⅰ ,仅喂牛奶 ;试验组Ⅱ ,喂不含乳的普通饲料和饮水 ;试验组Ⅲ ,喂混有乳的普通饲料和牛奶。各组均自由采食 ,4d后处死。采集胃和十二指肠食糜 ,对其中 β Casomorphin 7样物质进行定量分析。结果 :在试验组Ⅰ和Ⅲ大鼠的胃、十二指肠食糜中检测到显著量的 β Casomorphin 7样物质 ,平均含量分别为 (1 60 52± 1 0 1 9) ,(1 0 6± 6 85)ng/g和 (2 2 0 48± 1 1 91 ) ,(1 4 2 84±7 72 )ng/g。试验组Ⅱ大鼠的胃和十二指肠食糜中也检测到 β Casomorphin 7样物质 。

β-酪啡肽_7对早期断乳仔猪免疫器官及内分泌功能的影响

将 12头体重相近的三元杂交仔公猪分为两组 :对照组正常吃母乳到 2 8日龄断乳 ;实验组于 2 1日龄断乳后添喂β 酪啡肽7( β CM7) ,进行饲喂实验至 32日龄。结果表明 ,添喂 β CM7的仔猪 ,血清胃泌素水平比对照高 31 76 %(P <0 0 1) ,瘦素水平比对照组高 7 0 % (P <0 0 1) ,皮质醇低于对照组 2 6 19% (P >0 0 5 ) ,IL 2、T3 、T4和胰岛素水平均与对照组的接近。与对照组相比 ,胸腺、腹股沟淋巴结、脾脏的相对重分别增加 31 4 8% ,2 8 2 6 %和 2 7% ,差异均不显著 ;胸腺形态结构未见差别 ,脾脏的中央动脉周围淋巴鞘面积略小 ,回肠派伊尔氏结的总数增多 ,且总面积增加 8 1% 。

β-酪啡肽-7对大鼠血糖及脂质过氧化的影响

目的:观察β-酪啡肽-7(β-casomorphin-7,β-CM-7)对糖尿病大鼠的降血糖作用并初步阐明其作用机制。方法:2月龄SD雄性大鼠40只,用链脲佐菌素(STZ)致大鼠糖尿病,造模成功后将大鼠分为4个组:空白对照组、糖尿病对照组、胰岛素治疗组(优泌林3.7×10-8mol/(只.d))、实验组(β-CM-7 7.5×10-8mol/(只.d))。实验周期30d。测定血清中血糖含量、脂质过氧化物丙二醛(MDA)水平、超氧化物歧化酶(SOD)的活性、胰岛素和胰高血糖素的含量以及腿肌糖原、肝脏糖原的含量。结果:β-CM-7组与胰岛素治疗组大鼠血糖明显下降;同时血清中MDA水平降低,SOD活性升高,与糖尿病对照组相比,具有显著性差异(P<0.05);β-CM-7组胰岛素含量较糖尿病组有所增加,肌糖原含量较空白组显著升高(P<0.05)。结论:β-CM-7具有减轻链脲佐菌素性糖尿病大鼠氧自由基损伤、促进胰岛素分泌、加速肌糖原的合成、降低血糖的作用。

乳源β-酪啡肽7对大鼠葡萄糖吸收的影响及其作用机制

目的:探讨乳源活性肽β-酪啡肽-7(β-Casomorphin-7,β-CM7)应用于食品时对葡萄糖吸收的影响及其作用机制.方法:选用健康成年SD大鼠,分为对照组(0mol/Lβ-CM7),L低剂量组、M中剂量组、H高剂量组(终浓度分别为7.5×10-7,7.5×10-6,7.5×10-5mol/L).利用翻转离体小肠囊模型进行实验:(1)葡萄糖氧化酶法测定翻转后小肠内液葡萄糖含量;(2)比色法测定小肠黏膜Na+-K+-ATP酶活力;(3)荧光定量PCR法分析小肠黏膜组织中钠葡萄糖共转运载体(SGLT-1)和葡萄糖协助扩散转运载体(GLUT-2) mRNA的表达.结果:在离体环境下β-CM7在7.5×10-7-7.5×10-5mol/L浓度下对葡萄糖的吸收均有一定的抑制作用(1.09mol/L,1.24mol/L,1.12mol/L vs 1.74mol/L,P=0.01,0.04,0.02),能够降低Na+-K+-ATP酶活力(85.73,112.06,109.68 vs 114.93,P=0.004,0.73,0.54);荧光定量PCR结果发现:与对照组相比,β-CM7能够显著降低SGLT-1及GLUT-2 mRNA水平(0.46,0.58,0.77 vs 1.11,P=0.20,0.05,0.02;0.50,0.66,0.85 vs 1.14,P=0.30,0.14,0.03).结论:β-CM7可以通过降低Na+-K+-ATP酶活力及下调SGLT-1、GLUT-2 mRNA水平,减少大鼠小肠对葡萄糖的吸收.

β-酪啡肽-7保护链脲佐菌素引起的大鼠肾损伤

研究β-酪啡肽-7(β-casomorphin-7,β-CM-7)对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠肾损伤的保护作用.结果显示:(1)β-酪啡肽-7降低糖尿病大鼠的采食量、饮水量和空腹血糖值,提高糖尿病大鼠的体重,但是差异不显著(P>0.05).(2)β-酪啡肽-7显著降低糖尿病大鼠尿糖、尿蛋白、血清肌酐、血清尿素氮、肾脏指数和血清中转化生长因子-β1(TGF-β1)的含量;Masson染色结果显示,β-酪啡肽-7治疗显著降低糖尿病大鼠肾脏的纤维化程度.(3)RT-RCR结果显示,β-酪啡肽-7显著降低糖尿病大鼠肾脏TGF-β1、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白基因的表达.Western印迹显示,β-酪啡肽-7显著降低糖尿病大鼠肾脏Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的表达.上述结果表明,β-酪啡肽-7能够减缓糖尿病大鼠肾脏功能和肾脏纤维化程度,其机制可能与降低TGF-β1含量、减少胶原蛋白在肾脏的沉积有关.

酪蛋白酶解产物β-酪啡肽-7的HPLC分析和阿片活性鉴定

利用建立的高效液相色谱(HPLC)定量分析法,在酪蛋白2 h酶解液中检测到134.27μg.mL-1的β-酪啡肽-7(β-CM-7);其酶解消化液经葡聚糖凝胶柱层析收集物3、4组中也检测到β-CM-7,含量分别为44.79和18.90μg.mL-1;而1和2组中未检测到。细胞生物学鉴定结果表明:酪蛋白酶解液、柱层析收集的3、4组均能抑制富含δ-阿片受体的神经杂交瘤细胞腺苷酸环化酶活性,降低细胞内cAM P水平,纳洛酮可逆转这种抑制作用,证明有阿片活性。1、2组和酪蛋白本身无阿片作用。HPLC测定结果与细胞生物学鉴定结果相符,证明所建立的HPLC方法可用于酪啡肽的定量分析。

β-酪啡肽-7的多克隆抗体的制备

β-酪啡肽-7 经戊二醛与牛血清白蛋白(BSA)交联后的复合物免疫伊莎蛋鸡5只。6个月后，对鸡血清、所产蛋的卵黄和卵黄氯仿抽提上清液进行琼扩效价分析。结果表明，血清抗体的最高效价达到1∶8，后两者的效价为1∶4。

乳源β-酪啡肽-7对自然衰老小鼠的抗衰老作用研究

探讨了乳源β-酪啡肽-7对自然衰老小鼠的抗衰老作用及其可能机制。选取10只2月龄C57小鼠作为青年对照组;40只16-18月龄C57小鼠随机分为自然衰老模型组β-酪啡肽-7处理组,其中β-酪啡肽-7处理组小鼠在饲喂与模型组相同日粮的基础上,每天灌胃高、中、低3种剂量的β-酪啡肽-7溶液。连续喂养60d后,眼眶采血吸取上清;采血后颈椎脱臼处死,取心脏、肝脏、肾脏、大脑等组织并称重,测定各组小鼠脏器系数以及血清和脏器匀浆液中SOD、MDA、MAO及GSH-Px含量。结果显示:(1)β-酪啡肽-7组对改善自然衰老小鼠脏器指数有促进作用;(2)β-酪啡肽-7能够提高自然衰老小鼠的SOD、GSH-Px活性,降低MDA、MAO在体内的堆积。结果表明添加乳源-酪啡肽-7可以有效改善自然衰老小鼠的脏器指数,缓解自然衰老小鼠的氧化应激反应,且随着灌胃β-酪啡肽-7剂量的增加,延缓衰老效果越显著。

β-酪啡肽-7生物活性肽的检测研究

研究了β-酪啡肽-7的分析检测方法。以β-酪啡肽-7标准品进行了色谱条件的探索,包括分离柱,流动相的选择以及柱温,柱压、流速、检测波长和灵敏度的选择,最后建立了简单有效的检测方法,并确定了β-略啡肽-7高效液相色谱的检测条件。

乳源β-酪啡肽-7对老年小鼠肝脏氧化应激的影响

观察乳源β-酪啡肽-7对老年小鼠肝脏氧化应激的影响。方法:32只老年雄性昆明小鼠随机分为四组(每组8只):模型对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,另设空白对照组,二月龄雄性昆明小鼠8只。对照组和模型组用0.9%的生理盐水连续灌胃30d,各剂量组分别灌胃β-酪啡肽-7溶液2×10-7mol/d、1×10-6mol/d、5×10-6mol/d。连续灌胃30 d后,小鼠颈椎脱臼处死,取肝脏等组织进行超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和单胺氧化酶(MAO)活性与丙二醛(MDA)含量测定。结果显示β-酪啡肽-7能显著提高老年小鼠肝脏超氧化物歧化酶活性(P<0.05),谷胱甘肽过氧化物酶、单胺氧化酶活性变化无统计学差异,而低、高剂量组丙二醛含量显著增加(P<0.05)。结论为β-酪啡肽-7有提高老年小鼠肝脏抗氧化应激的可能,其机制可能与提高老年小鼠肝脏的超氧化物歧化酶活性有关。

酪蛋白酶解液中β-酪啡肽-7的液相色谱检测

研究活性多肽β-酪啡肽-7的检测。采用高效液相色谱法对胃蛋白酶解样品中活性肽(β-酪啡肽-7)进行测定。结果表明,对比标准品的保留时间发现水解0.5,1.5,2.5h的1,3,5号样品含有β-酪啡肽-7。经过重复进样,结果仍然一致。

乳源β-酪啡肽-7对老年小鼠肠黏膜氧化应激的影响

探讨了乳源β-酪啡肽-7(β-Casomorphin-7,BCM-7)对老年小鼠肠黏膜氧化应激的影响。将36只老年雄性昆明小鼠随机分为4组,每组各9只;另有青年雄性昆明小鼠9只,设为空白对照组。低、中、高剂量组每只每天灌胃BCM-7溶液0.5 mL,浓度分别为2×10^(-7),1×10^(-6),5×10^(-6)mol/L;空白对照组和模型对照组按等体积的生理盐水连续灌胃30 d后,小鼠颈椎脱臼处死,取小肠黏膜组织进行超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及过氧化氢酶(CAT)含量测定。结果:低、中剂量组能显著提高小肠黏膜SOD活性;低剂量组能显著提高CAT活性,中、高剂量组可以提高CAT活性,但差异不具有统计学意义;低、中剂量组能降低MDA浓度,高剂量组能显著降低MDA浓度。结果表示:β-酪啡肽-7可以通过提高小肠黏膜SOD、CAT等抗氧化应激酶活性,缓解机体衰老引起的氧化应激产生的自由基对机体的损伤。

体外消化模型中酸乳β-酪啡肽-7和β-酪啡肽-5的释放及阿片活性

酸乳经过人体消化可在胃肠中产生具有舒缓紧张情绪的β-酪啡肽(β-casomorphin,β-CM),为探究其在胃肠道中的释放量及其生物活性,本实验采用体外消化模型,模拟酸乳在体内的消化过程,采用高效液相色谱法检测β-CM-7、β-CM-5的释放;并用NG108-15神经杂交瘤细胞体外实验和小鼠体内实验测定其阿片活性。结果:在模拟胃消化液、胰消化液中,酸乳经消化释放的β-CM-7质量浓度分别是40.24、47.81μg/mL,β-CM-5质量浓度分别是88.00、82.04μg/mL。两种酸乳消化液均能降低NG108-15细胞内腺苷酸环化酶活力,且此作用可被纳洛酮逆转,体现了β-CM的阿片活性。小鼠在注射酸乳胃消化液30 min后达到最强的镇痛活性,痛阈提高率达到59.80%;注射纯化后的高剂量酸乳胃消化液使小鼠的平均游泳时间延长了18.94 min,表明酸乳胃消化液具有较好的抗疲劳作用。结论:人类在饮用酸乳后体内产生了β-CM,且酸乳β-CM具有阿片活性,能够对人体起到镇静舒缓、抗疲劳等功效。

胃蛋白酶水解酪蛋白生成β-酪啡肽-7的研究

研究酪啡肽生成最佳水解条件的确立。首先通过单因素试验研究了底物浓度、酶浓度、温度和pH值对水解的影响,并依据水解度的差异,选取了单因素最佳条件,而后选取4因素3水平正交试验设计对最佳酶解条件进一步探讨,确定最佳酶解条件为酪蛋白底物浓度10mg/mL,酶浓度1%,pH1.6,55℃水浴。

牛乳中β-酪蛋白基因分型及β-酪啡肽-7的研究进展

牛乳营养丰富,乳蛋白是牛乳中最有营养价值的成分。β-酪蛋白约占乳蛋白总量的30%,A1和A2是β-酪蛋白最常见的两种类型,其中A1型为突变型。β-酪蛋白基因多态性是受常染色体上共显性基因所控制的,可通过蛋白水平或分子水平进行检测。A1型β-酪蛋白在人体内消化酶解后可产生多种特定的氨基酸残基片段,其中β-酪啡肽-7(β-casomorphin-7,BCM-7)是具有阿片活性的七肽物质,推测其可能与1型糖尿病、心血管疾病、自闭症、精神分裂症、消化功能紊乱等人体慢性非传染性疾病的发生有密切联系。本文从β-酪蛋白基因变异和分型方法、BCM-7的生成机制及其对人体健康潜在影响等方面进行了综述,为未来β-酪蛋白和A2型牛乳在乳制品行业的研究开发提供一定参考。

乳源β-酪啡肽-7对老年小鼠肾功能的影响

本文研究了β-酪啡肽-7对老年小鼠肾功能可能的影响。50只雄性昆明小鼠,按组分别灌胃0.90%的生理盐水和低、中、高剂量的β-酪啡肽-7。连续灌胃30 d后,收集所有小鼠的血清及组织样本进行检测。组织病理学研究显示β-酪啡肽-7对老年小鼠的肾脏组织老化有一定改善作用,但高剂量组小鼠的肾小体肿胀似乎没有减轻,并且上皮细胞有坏死脱落现象。与模型组相比,中剂量组小鼠的血清肌酐(CRE)水平、肾脏组织中总抗氧化能力(T-AOC),超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性分别增加了22.16%、69.02%、71.26%(p<0.05)和24.41%,而高剂量组分别增加了13.12%、64.88%、67.33%(p<0.05)和17.90%。提示β-酪啡肽-7可以调节老年小鼠的肾功能,增加其抗氧化能力,但不是剂量依赖式作用。此外,干预低中剂量β-酪啡肽-7小鼠的MDA含量都比模型组低(分别降低了15.40%、3.17%),但高剂量组反而提升了16.08%,说明高剂量组小鼠肾脏的氧化有所加重。上述结果表明,β-酪啡肽-7有改善老年小鼠肾功能异常的可能,可能通过提高抗氧化能力来改善衰老引起的老化损伤,但摄入过多β-酪啡肽-7似乎会加重肾脏负担。

牛奶β-酪蛋白水解产物生物活性及A2乳制品的研究进展

乳制品中酪蛋白是许多生物活性肽的重要来源。牛奶的β酪蛋白按基因型可分为13种,最常见的类型是A1和A2酪蛋白,二者的蛋白质一级结构几乎完全相同,唯一的区别是67位上的氨基酸有所不同,导致A1酪蛋白被水解生成“β-酪啡肽-7”的多肽(β-casomorphin-7,BCM-7)和相关的短BCM(BCM-5、BCM-4和BCM-3),而A2酪蛋白水解不会产生此类多肽物质。基于对上述2种主要β-酪蛋白的研究以及其可能会对人体健康产生的影响,该文从生物机理和分子机制角度阐述了A2牛奶在敏感人群中更容易消化的最新研究成果,最后对A2酪蛋白的研究和相关乳制品商业化前景进行了展望。

β-酪啡肽对10日龄仔猪淋巴细胞转化的影响

β-酪啡肽7是 β-酪蛋白在消化道中的不完全酶解产物 ,它可被新生动物吸收入血 ,影响机体的内分泌与免疫系统的功能 ,本实验表明 :0 .2、1 0 μmol/Lβ-酪啡肽 7可显著促进 1 0日龄仔猪外周血淋巴细胞的转化 ,纳洛酮不能阻断此效应。含1 0 %酪蛋白酶解液能极显著促进仔猪淋巴细胞转化 ,纳洛酮不能阻断此效应。 2 5 U/ml的 PHA是淋巴细胞的转化最适宜浓度 ,刺激指数最高。在既有 PHA又有 0 .2 μmol/L的 β-酪啡肽7存在时 。