温针灸对兔膝骨关节炎软骨中ASC、Caspase-1和P2X7蛋白表达的影响

目的 观察温针灸对膝骨关节炎(KOA)模型兔关节软骨组织中凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、嘌呤能离子通道型受体7(P2X7)表达的影响,研究温针灸治疗KOA的作用机制。方法 取40只雄性新西兰兔随机分为空白组、模型组、抑制剂组和温针灸组,每组10只。除空白组外,其余各组采用经典右后肢膝关节伸直位,用石膏管型固定4周制备兔KOA模型。造模成功后,各组给予相应干预措施。应用Lequesne MG评分量表评估兔膝关节状态改变与行为学改变,HE染色观察膝关节软骨病理形态学改变,免疫组织化学法和Western blot法检测软骨组织中ASC、Caspase-1、P2X7蛋白的表达,免疫荧光检测Caspase-1蛋白的表达。结果 造模前,各组实验兔Lequesne MG评分差异无统计学意义(P>0.05);造模后,与空白组相比,其余组Lequesne MG评分均上升(P<0.05);干预治疗后,与模型组比较,温针灸组和抑制剂组评分降低(P<0.05)。HE染色显示,空白组软骨表面结构完整,软骨细胞排列均匀;模型组软骨表面粗糙不平,软骨受损明显,软骨细胞形态大小不一,排列紊乱;抑制剂组和温针灸组软骨表面相对光滑、完整,软骨细胞分布较为均匀,软骨层结构相对清晰。与空白组比较,模型组Mankin’s评分升高(P<0.05);与模型组比较,温针灸组和抑制剂组Mankin’s评分降低(P<0.05)。免疫组织化学法、免疫荧光及Western blot检测结果显示,与空白组比较,模型组ASC、Caspase-1、P2X7的表达均升高(P<0.05);与模型组比较,温针灸组和抑制剂组ASC、Caspase-1、P2X7的表达均降低(P<0.05);温针灸组和抑制剂组相比,ASC、Caspase-1、P2X7表达差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 温针灸可减轻兔KOA软骨损伤,其机制可能与ASC、Caspase-1、P2X7表达降低及细胞焦亡抑制有关。

丙泊酚通过NLRP3/ASC/Caspase-1通路对肺癌A549细胞增殖及焦亡的影响

目的探讨丙泊酚通过核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/凋亡相关斑点样蛋白(ASC)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)通路对肺癌A549细胞增殖及焦亡的影响。方法将肺癌A549细胞随机分为空白对照组、低浓度丙泊酚组(30μmol/L)、中浓度丙泊酚组(60μmol/L)、高浓度丙泊酚组(120μmol/L)、高浓度丙泊酚+NLRP3抑制剂组(120μmol/L+100 nmol/L);各组进行相应处理后。四甲基偶氮唑蓝法检测肺癌A549细胞增殖;酶联免疫吸附法检测肺癌A549细胞上清白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)水平;Hoechst/碘化丙啶(PI)双重染色检测肺癌A549细胞焦亡;荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法分别检测肺癌A549细胞增殖[原癌基因(c-Myc)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)]、焦亡[消皮素D-N端(GSDM D-N)、IL-1β]及NLRP3、ASC、Caspase-1信使核糖核酸(mRNA)和蛋白表达水平。结果空白对照组细胞呈蓝色荧光;低、中、高浓度丙泊酚组红色荧光逐渐增加;与高浓度丙泊酚组相比,高浓度丙泊酚+NLRP3抑制剂组红色荧光较少;表明丙泊酚可促进肺癌A549细胞焦亡,NLRP3抑制剂可反转高浓度丙泊酚的作用效果。与空白对照组相比,低、中、高浓度丙泊酚组肺癌A549细胞存活率、c-Myc、CyclinD1 mRNA和蛋白表达水平依次降低,上清IL-6、IL-1β、IL-18水平、GSDM D-N、IL-1β、NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA和蛋白表达水平依次升高(P<0.05);与高浓度丙泊酚组相比,高浓度丙泊酚+NLRP3抑制剂组肺癌A549细胞存活率、c-Myc、CyclinD1 mRNA和蛋白表达水平升高,上清IL-6、IL-1β、IL-18水平、GSDM D-N、IL-1β、NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论丙泊酚可能通过激活NLRP3/ASC/Caspase-1通路来抑制肺癌A549细胞增殖,促进细胞焦亡。

麦芽提取物调控NLRP3/Caspase-1/IL-1β通路抑制高催乳素血症大鼠垂体前叶细胞增殖及催乳素分泌

目的探讨麦芽提取物(ME)调控Nod样受体蛋白3(NLRP3)/胱天蛋白酶-1(Caspase-1)/白细胞介素-1β(IL-1β)通路对高催乳素血症(HPRL)大鼠垂体前叶细胞增殖及催乳素(PRL)分泌的影响。方法分别分离正常大鼠、HPRL大鼠的垂体前叶细胞,依次命名为NC组和Model组,免疫组织化学染色鉴定细胞中生长激素、PRL表达。将Model组细胞分别用0、25、50、100 mg/L ME,5 mmol/L腺苷三磷酸(ATP),100 mg/L ME+5 mmol/L ATP处理48 h,依次命名为空白组(Blank组)、ME低剂量组(ME-L组)、ME中剂量组(ME-M组)、ME高剂量组(ME-H组)、ATP组、ME-H+ATP组,光学显微镜观察细胞形态;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;酶联免疫吸附试验检测上清液中PRL水平;Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)、多巴胺受体D2(DRD2)、多巴胺转运体(DAT)、NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达。结果成功分离大鼠垂体前叶细胞;与NC组比较,Blank组细胞体积变小,形状不规则,OD450值、PRL水平、DAT、PCNA、NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达升高,细胞凋亡率、DRD2蛋白表达降低(P<0.05);与Blank组比较,ME-L组、ME-M组、ME-H组细胞形态有所改善,OD450值、PRL水平、DAT、PCNA、NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达降低,细胞凋亡率、DRD2蛋白表达升高,且呈剂量依赖性,而ATP组对应指标变化趋势与上述相反(P<0.05);ATP减弱了高剂量ME对HPRL大鼠垂体前叶细胞增殖与PRL分泌的抑制作用。结论ME可能通过下调NLRP3/Caspase-1/IL-1β通路蛋白表达抑制HPRL大鼠垂体前叶细胞增殖及PRL分泌。

直肠癌患者的血清C型凝集素受体及其下游效应分子CARD9表达与临床病理特征和预后的关系

目的探究直肠癌患者的血清C型凝集素受体(CLR)及其下游效应分子胱天蛋白酶募集域蛋白9(CARD9)表达与临床病理特征和预后的关系。方法选择2018年3月至2020年3月国药同煤总医院收治的98例直肠癌患者作为研究对象(设为观察组),另选择45名同期在该院体检的健康志愿者设为对照组。采用ELISA法检测血清可溶性树突状细胞特异性细胞间黏附分子3结合非整合素(sDC-SIGN)和CARD9表达水平,并分析其与直肠癌患者临床病理特征的关系。采用Pearson相关性分析探讨血清sDC-SIGN与CARD9表达的关系。入组直肠癌患者术后均随访3年,计算3年总生存(OS)率。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,分析血清sDC-SIGN和CARD9表达与直肠癌患者预后的关系。采用多因素Cox回归分析探讨直肠癌患者预后的影响因素。采用ROC曲线分析血清sDC-SIGN和CARD9对直肠癌患者术后生存情况的预测价值。结果与对照组相比,观察组的血清sDC-SIGN表达水平降低,血清CARD9表达水平升高,2组的差异均有统计学意义(P均<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,直肠癌患者的血清sDC-SIGN与CARD9表达呈显著负相关(r=-0.743,P<0.05)。与无淋巴结转移的直肠癌患者相比,有淋巴结转移的患者的血清sDC-SIGN表达水平显著降低,而血清CARD9表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。sDC-SIGN低表达组的3年OS率显著低于sDC-SIGN高表达组,CARD9高表达组的3年OS率显著低于CARD9低表达组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示,分化程度、TNM分期、淋巴结转移、血清sDC-SIGN和CARD9均是影响直肠癌患者预后的独立危险因素(P均<0.05)。血清sDC-SIGN和CARD9联合预测直肠癌患者术后3年生存情况的ROC曲线下面积(AUC)为0.896,均大于两者单独预测的AUC(P均<0.05)。结论血清sDC-SIGN和CARD9表达水平均与直肠癌发生密切相关,且血清sDC-SIGN低表达及血清CARD9高表达均提示直肠癌患者术后预后较差,其可能成为直肠癌诊断和预后预测的新血清学标志物。

活动性肺结核患者血清中SAMD9L水平变化及与巨噬细胞相关细胞因子的关系

目的 探讨血清中无菌α基序域9样蛋白(SAMD9L)和巨噬细胞相关细胞因子在活动性肺结核(APTB)患者诊断中的应用价值。方法 回顾性选取2019年5月至2022年5月就诊的APTB患者84例为APTB组,另选取同期84例潜伏期结核感染(LTBI)患者作为LTBI组,并选取同期84例健康志愿者作为对照组。检测3组患者血清SAMD9L、iNOS和Arg-1表达量。Pearson法分析APTB组血清SAMD9L与iNOS、Arg-1表达水平间的相关性;多因素Logistic回归模型分析发生APTB的影响因素。ROC曲线分析SAMD9L、iNOS和Arg-1表达量对APTB的预测价值。结果 APTB组血清中SAMD9L和Arg-1水平显著高于LTBI组和对照组(P<0.05);iNOS水平显著低于LTBI组和对照组(P<0.05)。iNOS水平分别与SAMD9L和Arg-1水平呈负相关(r=-0.405、-0.585,P<0.05),SAMD9L与Arg-1水平呈正相关(r=0.416,P<0.05)。Logistic回归显示iNOS含量是APTB患者的保护因子(P<0.05),SAMD9L和Arg-1含量是APTB患者危险因子(P<0.05)。SAMD9L、iNOS和Arg-1三者联合诊断APTB的结果优于任何一项单独分析(Z三项联合-SAMD9L=1.730,Z三项联合-iNOS=2.839,Z三项联合-Arg-1=2.086;P<0.05);治疗半年后血清中SAMD9L和Arg-1表达水平下降,iNOS表达量上升(P<0.05)。结论 APTB患者血清中SAMD9L与Arg-1表达水平上调,二者与巨噬细胞相关细胞因子关系密切,且三者联合检测对APTB的诊断具有临床意义。

金银花提取液通过调控NLRP3/ASC/caspase-1信号通路对溃疡性结肠炎大鼠肠道黏膜的影响

目的:探讨金银花提取液通过调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族吡啉结构域蛋白3(NLRP3)/含CARD结构域的凋亡相关颗粒样蛋白(ASC)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1)信号通路对溃疡性结肠炎(UC)大鼠肠道黏膜的影响。方法:随机选取10只大鼠为对照组,另取55只大鼠在肛门约8 cm结肠处注射含5%TNBS和50%乙醇的混合液(4 ml/kg)构建大鼠UC模型,将造模成功的50只大鼠分为UC组、金银花低、中、高剂量组和金银花+NSS(NLRP3激活剂)组,每组10只。金银花低、中、高剂量组分别灌胃给予40、80、120 mg/(kg·d)金银花提取液,金银花+NSS组灌胃给予120 mg/(kg·d)金银花提取液和4 mg/(kg·d)NSS,对照组、UC组灌胃给予等体积生理盐水。观察大鼠一般情况,末次给药24 h后腹主动脉取血,处死大鼠,收集结肠组织,量取结肠长度。试剂盒检测大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、TNF-α、IL-6水平;HE染色检测大鼠结肠黏膜病理学变化;RT-PCR和Western blot检测大鼠肠道黏膜NLRP3/ASC/caspase-1通路mRNA和蛋白表达。结果:与对照组比较,UC组大鼠疾病活动指数(DAI)、结肠黏膜损伤程度、血清LDH、MDA、TNF-α、IL-6水平及结肠黏膜组织NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β mRNA和蛋白表达显著升高,结肠长度、血清SOD水平显著降低(P<0.05);与UC组比较,金银花低、中、高剂量组DAI、结肠黏膜损伤程度、LDH、MDA、TNF-α、IL-6水平及NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β mRNA和蛋白表达显著降低,结肠长度、血清SOD水平显著升高(P<0.05),且呈剂量依赖性(P<0.05);与金银花高剂量组比较,金银花+NSS组DAI、结肠黏膜损伤程度、LDH、MDA、TNF-α、IL-6水平及NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β mRNA和蛋白表达显著升高,结肠长度、SOD水平显著降低(P<0.05)。结论:金银花提取液可能通过抑制NLRP3/ASC/caspase-1信号通路激活缓解UC大鼠肠道黏膜损伤。

脂联素通过A20/NLRP3/caspase-1途径抑制脂多糖诱导的小胶质细胞炎症反应

目的探讨脂联素(adiponectin,APN)抑制脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小胶质细胞炎症反应的机制。方法以未干预组作为对照,外源性APN干预1 h后LPS刺激小胶质细胞复制小胶质细胞炎症模型,将细胞分为对照组、APN组、LPS组和LPS+APN组。分别采用q-PCR和ELISA法检测各组细胞中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)mRNA的表达和分泌水平;Western blotting检测各组细胞核因子-κB调节蛋白3(tumor necrosis factorα-induced protein 3,TNFAIP3/A20)、含NLR家族PYRIN域蛋白3(NOD-,LRR-and pyrin domain-containing 3,NLRP3)和胱冬肽酶-1(caspase-1)的表达。采用基因沉默技术敲除小胶质细胞A20后,APN干预,再次通过Western blotting检测各组细胞A20、NLRP3和caspase-1的表达。结果APN干预后,LPS+APN组细胞TNF-α和IL-1β的mRNA转录水平(P=0.018;P=0.009)和分泌量(P=0.0001;P=0.0001)较LPS组明显降低,并且A20蛋白表达明显增加、NLRP3和caspase-1蛋白表达降低(P=0.001;P=0.003;P=0.006)。敲除小胶质细胞A20可以逆转APN对NLRP3和caspase-1的下调作用(P=0.012;P=0.024)。结论APN对LPS诱导的小胶质细胞炎症反应有抑制作用,其作用可能是通过A20抑制NLRP3和caspase-1表达来实现的。

大黄素调控NLRP3/Caspase-1信号通路对实验性自身免疫性甲状腺炎大鼠的免疫调节作用

目的分析大黄素调控含有pyrin结构域的蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)信号通路对实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)大鼠的免疫调节作用。方法选取SPF级6~8周龄SD大鼠60只,12只作为对照组,其余48只建立EAT模型,建模成功后剔除死亡大鼠,将剩余40只大鼠随机分为模型组、大黄素低剂量组、大黄素中剂量组、大黄素高剂量组各10只。建模成功后开始灌胃,对照组、模型组给予5 mg/kg生理盐水,大黄素低剂量组给予生理盐水+15 mg/kg大黄素,大黄素中剂量组给予生理盐水+75 mg/kg大黄素,大黄素高剂量组给予生理盐水+150 mg/kg大黄素。观察每组甲状腺球蛋白抗体(TgAb)、白细胞介素-4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)、CD3^(+)CD4^(+)、CD3^(+)CD8^(+)、NLRP3/Caspase-1信号通路蛋白表达量。结果与对照组相比,其他4组TgAb、IL-4、IFN-γ、CD3^(+)CD4^(+)、CD3^(+)CD8^(+)、NLRP3、ASC、Caspase-1水平较高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,大黄素低、中、高剂量组TgAb、IL-4、IFN-γ、CD3^(+)CD4^(+)、CD3^(+)CD8^(+)、NLRP3、ASC、Caspase-1水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);大黄素中剂量组TgAbIL-4、IFN-γ、CD3^(+)CD4^(+)、CD3^(+)CD8^(+)、NLRP3、ASC、Caspase-1水平低于大黄素低、高剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论大黄素可调节EAT大鼠的免疫功能,并通过抑制CD4^(+)、CD8^(+)增殖使IL-4、IFN-γ分泌减少,其作用机制可能与NLRP3/Caspase-1通路有关。

胱天蛋白酶募集域蛋白9的可溶性表达及纯化

目的 制备可溶性TrxA-CARD9蛋白及其临床突变型。方法 将构建好的原核系统表达质粒转化至大肠杆菌感受态细胞后,通过不同诱导条件筛选合适的表达条件。使用精氨酸辅助目的蛋白进行非变性溶解,并通过聚乙烯亚胺和硫酸铵沉淀法去除核酸和杂蛋白,最终利用阴离子交换和肝素亲和色谱柱纯化融合蛋白。结果 成功构建表达质粒并纯化融合蛋白,酶切去除TrxA标签后通过质谱鉴定其为可溶性CARD9蛋白。结论 成功实现了全长CARD9序列在原核系统中的高可溶性表达,为研究CARD9蛋白生物结构和功能提供了基础,并为寻找治疗真菌感染的潜在靶点和治疗方法提供新思路。

动态观察胱天蛋白酶募集域蛋白9在心肌梗死后表达的基础研究

目的:探讨心肌梗死后小鼠胱天蛋白酶募集域蛋白9(caspase recruitment domain-containingprotein 9,CARD9)的表达及其与炎症的关系。方法:选择野生型小鼠和CARD9敲除小鼠各26只,分为野生型对照组、野生型心肌梗死组、CARD9敲除对照组和CARD9敲除心肌梗死组共4组,每组13只。心肌梗死模型组是通过结扎冠状动脉前降支复制心肌梗死模型,而对照组仅穿线不结扎。于模型复制后第1天,从每组随机抽取3只小鼠处死并行氯化三苯四氮唑(TTC)染色,观察模型是否复制成功;于第3天和第28天,每组分别随机各抽取3只小鼠,处死后取心肌组织行石蜡切片,苏木素伊红(HE)染色和免疫组化染色观察炎症细胞浸润,免疫组化染色和蛋白定量观察CARD9表达。结果:TTC证实心肌梗死模型复制成功;免疫组化染色和蛋白印迹证实,与野生型对照组比较,野生型心肌梗死组3d及28d时梗死区域CARD9表达均增高(P<0.05)与野生型心肌梗死组比较,3 d时CARD9敲除组心肌梗死组巨噬细胞浸润增加(P<0.05)。结论:心肌梗死后CARD9表达上调,而CARD9敲除炎症细胞浸润增加,提示CARD9参与心肌梗死并对早期炎症可能有一定抑制作用。

蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2对去血清培养诱导的293T细胞凋亡的作用

目的:探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2对去血清培养诱导人胚肾293T细胞凋亡的作用。方法:将pIRES-GFP空载体、pIRES-GFP-SHP-2(WT)野生型及pIRES-GFP-SHP-2C459S突变体通过脂质体法转染293T细胞,MTT测定去血清培养对293T细胞增殖的抑制情况,去血清培养293T细胞3 d后,电镜观察超微结构、流式细胞仪检测细胞凋亡率、免疫组织化学方法测定caspase-3表达。结果:去血清培养293T细胞3 d,转染pIRES-GFP-SHP-2(WT)野生型组的293T细胞凋亡率明显低于对照组和pIRES-GFP-SHP-2C459S突变体组;而2转染组超微结构均发生早期凋亡,但并无明显差异;caspase-3免疫组化结果显示SHP-2(WT)野生型组的caspase-3表达率明显低于SHP-2C459S突变体组。结论:SHP-2可能参与到去血清培养诱导细胞凋亡的信号转导通路中并通过caspase-3依赖途径,对细胞的生存起到正向调节作用。

CARD9 PKM2 CMTM6在乳腺癌组织中的表达及相关性研究

目的:探究胱天蛋白酶募集域蛋白9(CARD9)、M2型丙酮酸激酶(PKM2)、趋化因子样因子超家族成员6(CMTM6)在乳腺癌组织中的表达及相关性。方法:选取2019年11月至2020年11月我院接诊的79例乳腺癌患者研究对象。免疫组化法检测癌组织、癌旁组织中CARD9、PKM2、CMTM6表达情况,实时荧光定量(RT-PCR)检测癌组织、癌旁组织中CARD9、PKM2、CMTM6表达情况。分析CARD9、PKM2、CMTM6表达与乳腺癌的关系。结果:与癌旁组织相比,癌组织中CARD9、PKM2、CMTM6表达较高(P<0.05)。与高中分化程度、无淋巴结转移、Ⅰ~Ⅱ期乳腺癌患者相比,低分化程度、有淋巴结转移、Ⅲ~Ⅳ期乳腺癌患者CARD9、PKM2、CMTM6表达较高(P<0.05)。CARD9、PKM2、CMTM6之间相关性分析显示CARD9、PKM2之间正相关(r=0.257,P=0.022);CARD9、CMTM6之间正相关(r=0.260,P=0.021);PKM2、CMTM6之间正相关(r=0.254,P=0.024)。与CARD9、PKM2、CMTM6单项相比,三者联合对乳腺癌的预测价值较高,具有统计学差异(P<0.05)。结论:CARD9、PKM2、CMTM6在乳腺癌组织中呈异常高表达且CARD9、PKM2、CMTM6呈线性正相关,与患者分化程度、淋巴结转移、临床分期相关,参与乳腺癌的发生、发展过程,三项联合检测对乳腺癌的预测价值较高。

血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白在AP患者中的变化及其意义

目的探讨血尿淀粉酶、C反应蛋白(CRP)、胱天蛋白酶募集域蛋白9(Card9)在急性胰腺炎(AP)患者中的表达及其意义。方法选取本院2014年6月至2016年12月确诊的128例AP患者(AP组)、年龄及性别相匹配的健康自愿者64例(对照组),采用全自动生化法检测两组的血尿淀粉酶、血清CRP水平,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测两组外周血单核细胞中Card9蛋白表达水平,并根据AP患者病情分为轻症AP、重症AP进行分层分析。结果AP组患者的血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白水平均显著的高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);重症AP组患者的血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白水平均显著的高于轻症AP组患者,差异具有统计学意义(P<0.05);AP组患者的血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白水平与Ranson评分均呈显著的正相关关系(P<0.05)。结论AP患者血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白水平升高显著,并且与病情的严重程度具有一定的相关性。

宫颈癌患者血清核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体和相关细胞因子表达及临床意义

目的探究宫颈癌患者血清核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体和相关细胞因子的表达水平及临床意义。方法选取2021年3月至2024年3月收治的宫颈癌患者78例作为癌变组,选取同期宫颈上皮内瘤变患者78例作为癌前病变组。比较2组血清NLRP3炎症小体[NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)]、白细胞介素-18(IL-18)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平;采用Pearson相关性分析血清NLRP3、ASC、Caspase-1与IL-18、IL-1β的关系;分析宫颈癌患者相关细胞因子水平和临床病理特征之间的关系。结果癌变组血清IL-18、IL-1β、NLRP3、ASC、Caspase-1水平均高于癌前病变组(P<0.01);Pearson相关性分析结果显示,患者血清NLRP3、ASC、Caspase-1水平与IL-18和IL-1β水平均呈正相关(P<0.05,P<0.01)。宫颈癌患者肿瘤临床分期越高、分化程度越低,IL-18和IL-1β水平越高(P<0.01);有淋巴结转移和无淋巴结转移的宫颈癌患者IL-18和IL-1β水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论宫颈癌患者血清IL-18、IL-1β水平和血清NLRP3炎症小体均异常升高,且其水平变化与肿瘤恶性进展有关。

生长抑素对急性胰腺炎患者外周血单核细胞CARD9、BCL-10水平的影响

目的分析生长抑素对急性胰腺炎患者外周血单核细胞胱天蛋白酶募集域蛋白9(CARD9)、B细胞淋巴瘤因子-10(BCL-10)水平的影响。方法124例急性胰腺炎患者依据随机数字表法分为2组,对照组(n=62)行常规治疗方案,研究组(n=62)在常规治疗的基础上使用生长抑素。比较2组外周血单核细胞CARD9、BCL-10水平、炎性因子、胰腺体部血流指标、血清胰腺消化酶水平。结果2组治疗后外周血单核细胞CARD9、BCL-10水平均明显低于治疗前(P<0.05),且研究组外周血单核细胞CARD9、BCL-10水平低于对照组(P<0.05);2组治疗后血肿瘤坏死因子、白介素-6、血白细胞水平均明显低于治疗前(P<0.05),且研究组血肿瘤坏死因子、白细胞介素-6、血白细胞水平低于对照组(P<0.05);2组治疗后血流量、血容量水平均明显高于治疗前(P<0.05),毛细血管表面通透性明显低于治疗前(P<0.05),且研究组血流量、血容量水平高于对照组(P<0.05),毛细血管表面通透性水平低于对照组(P<0.05);2组治疗后胰蛋白酶原2、胰淀粉酶、胰脂肪酶水平均明显低于治疗前(P<0.05),且研究组胰蛋白酶原2、胰淀粉酶、胰脂肪酶水平低于对照组(P<0.05)。结论急性胰腺炎患者在接受常规治疗基础上应用生长抑素,对外周血单核细胞CARD9、BCL-10水平的调节作用较为明显,可有效减轻炎症,改善胰腺血流、消化功能。

胱天蛋白酶募集域蛋白9在中重度缺血性脑卒中发病早期阶段的作用

目的观察胱天蛋白酶募集域蛋白9(CARD9)在急性中重度缺血性脑卒中发病早期阶段的作用,探讨脑卒中炎症的发病机制。方法入选36例美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分> 5分的急性中度及以上缺血性脑卒中患者为病例组;入选20例年龄、高血压、糖尿病等基础病与病例组差异无统计学意义的志愿者作为对照组。采集病例组发病第1、3、7天及对照组第1天外周血单个核细胞(PBMC)。Western blot检测CARD9表达水平及核转录因子-κB(NF-κB)活性(p-p65/p65水平);RT-PCR检测炎症因子肿瘤坏死因子-ɑ(TNF-ɑ)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6) mRNA的表达水平;病例组第1、3、7天使用NIHSS评分评估脑缺血损伤程度。结果 Western blot结果表明,入院第1、3、7天时,病例组CARD9表达及NF-κB活性与对照组比较显著升高(CARD9:1.17±0.14、1.08±0.15、0.97±0.16 vs. 0.34±0.02,NF-κB:1.78±0.06、1.70±0.07、1.46±0.04 vs. 1.21±0.12,P均<0.05);RT-PCR结果表明,入院第1、3、7天时,病例组TNF-αmRNA表达与对照组比较显著升高(5.34±0.14、4.57±0.15、3.58±0.19 vs. 1.00±0.08,P均<0.01),病例组IL-1βmRNA表达与对照组比较显著升高(6.49±0.12、4.85±0.23、3.38±0.31 vs. 1.00±0.11,P均<0.01),病例组IL-6 mRNA表达与对照组比较显著升高(10.29±0.55、7.32±0.44、4.56±0.33 vs. 1.00±0.07,P均<0.01)。Pearson相关分析表明,脑卒中患者PBMC中NF-κB活化、TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA及NIHSS评分与CARD9表达呈正相关(r值分别为0.971、0.974、0.970、0.982、0.891,P均<0.01)。结论 CARD9在早期中重度缺血性脑卒中患者PBMC中的表达增高,可能通过NF-κB信号通路介导缺血性脑损伤炎症反应。

胱天蛋白酶募集域蛋白9?麦芽糖结合蛋白融合蛋白的原核表达及纯化

目的胱天蛋白酶募集域蛋白9(CARD9)可激活核因子?κB(NF?κB)、丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)等通路参与免疫,但其作用机制至今尚未阐明。为进行相关体外实验,构建CARD9?麦芽糖结合蛋白(MBP)融合蛋白的原核表达载体,并对融合蛋白进行表达鉴定及纯化。方法利用PCR技术分别扩增CARD9和MBP基因的编码序列,将两者正确插入pET?30a(+)载体中得到重组质粒,后转化至大肠埃希菌DH5α感受态细胞中,并进行PCR和酶切鉴定以及基因测序。将正确的重组质粒转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,筛选不同条件进行IPTG诱导表达,通过SDS?PAGE电泳检测目的蛋白质的相对分子质量。通过MBP麦芽糖层析柱和分子筛层析柱对CARD9?MBP融合蛋白进行纯化,用HRV3C蛋白酶酶切去除MBP标签后进行MALDI?TOF质谱鉴定。结果成功构建CARD9?MBP融合蛋白的原核表达载体,PCR和酶切鉴定为阳性且基因测序结果与目的序列一致。SDS?PAGE电泳显示,在大肠埃希菌BL21(DE3)中成功诱导表达出相对分子质量约为105 000的目的蛋白。通过MBP麦芽糖层析柱的初步纯化后,可得到相对较纯的融合目的蛋白,经HRV3C蛋白酶酶切去除MBP标签后行MALDI?TOF质谱鉴定其确为CARD9蛋白。后期通过分子筛层析柱进一步纯化得到了更纯的CARD9?MBP融合蛋白。结论成功构建了重组CARD9?MBP融合蛋白的原核表达载体,并进行了大量可溶性表达。通过MBP麦芽糖层析柱和分子筛层析柱的纯化,可得到较纯的目的蛋白。

CARD9突变在真菌感染性疾病中的研究进展

胱天蛋白酶募集域蛋白9(caspase recruitment domain-containg protein 9,CARD9)属于CARD家族中的一员,存在于脾、肝、胎盘、肺、脑等人体多种组织中,是高度表达于中性粒细胞、巨噬细胞及树突细胞等髓系细胞中的一个重要衔接蛋白。CARD9可与Bcl-10、黏膜相关淋巴组织淋巴瘤转运蛋白1(mucosaassociated lymphoid tissue lymphoma translocation protein 1,MALT-1)结合并形成CARD9-Bcl-10-MALT-1(CBM)复合体,作为C型凝集素受体(C-type lectin receptor,CLR)等通路的重要媒介,激活核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)等炎症信号通路,在抗真菌免疫中发挥重要作用。迄今为止,全世界已报道14个国家共56例患者发生18种CARD9突变的报道,真菌类型涉及念珠菌、皮肤癣菌、暗色真菌及曲霉等。本文针对CARD9突变在不同真菌感染性疾病中的研究进展进行综述。

CARD9在感染性疾病中的研究进展

胱天蛋白酶募集域蛋白9(CARD9)是CARD蛋白家族中的一员,是重要的衔接蛋白,通过蛋白-蛋白相互作用调节细胞内信号传递。CARD9能高效整合多种固有免疫受体的识别信号,在机体对真菌、细菌、病毒等的识别和抵抗方面起重要作用。近年来有多例因CARD9缺陷导致的深部真菌病和泛发性复发性皮肤黏膜真菌感染的病例报道,使得CARD9在感染性疾病中的研究日益受到关注。本文就CARD9在感染性疾病中的分子调控机制进行了综述。

肝细胞肝癌组织中硫氧还蛋白9表达水平与经肝动脉化疗栓塞术治疗疗效的关系

目的探究硫氧还蛋白9(TXNDC9)在肝细胞肝癌(HCC)组织中的表达及其与TACE治疗疗效的关系。方法选择2013年1月至2016年1月诊断为HCC的97例患者作为研究对象。用改良实体瘤疗效评价标准(mRECIST)评价TACE疗效。用免疫印迹法检测HCC组织中TXNDC9水平,并分析其与HCC患者TACE治疗疗效的关系。结果完全缓解(CR)组(17例)、部分缓解(PR)组(30例)、疾病稳定(SD)组(21例)和疾病进展(PD)组(29例)HCC组织中TXNDC9水平分别为(0.66±0.09)、(0.75±0.09)、(0.94±0.12)和(1.08±0.11),差异有统计学意义(P<0.05)。HCC组织中TXNDC9水平与TACE治疗疗效呈负相关(P<0.05)。TXNDC9诊断HCC预后的受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)、灵敏度和特异度分别为0.930、73.91%和96.08%。多因素Cox回归分析结果显示肿瘤直径、Child-Pugh分级和TXNDC9是HCC患者预后的独立影像因素(P<0.05)。结论HCC组织中TXNDC9水平高提示TACE治疗疗效较差,预后不良风险较高。