Caspase基因家族在妊娠期高血压胎盘组织中的表达

目的研究Caspase-3和Caspase-8在妊娠期高血压疾病胎盘组织中的表达及临床意义。方法随机选择2018年1~12月就诊于浙江省湖州市妇幼保健院的产妇共90例,分为正常妊娠组、妊娠期高血压组、子痫前期组,每组30例。收集所有产妇分娩胎盘组织,采用荧光实时定量RT-PCR和免疫组化方法,分别检测Caspase-3和Caspase-8基因和蛋白质表达水平及临床意义。结果Caspase-3和Caspase-8 mRNA在妊娠期高血压组、子痫前期组的表达水平均高于正常妊娠组,差异具有统计学意义(P<0.05);Caspase-3和Caspase-8蛋白质在正常妊娠组、妊娠期高血压组、子痫前期组胎盘组织的阳性率分别为23.33%与20%、56.67%与50.00%、76.67%与66.67%,疾病组妊娠期高血压组和子痫前期组与正常妊娠组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论Caspase-3和Caspase-8 mRNA和蛋白质在妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中的表达均呈强阳性,表达水平与妊娠期高血压疾病的发生、发展有相关性。

白斑综合症病毒对对虾Caspase基因的调控

研究病毒感染对白斑综合症病毒基因的录调控的影响,将Caspase调控区的DNA进行生物素标记,然后与链霉亲和素修饰的琼脂糖结合.通过下拉发现,Caspase基因的启动子序列与white spot syndromic virus(WSSV)病毒的两个蛋白Vp38和Vp41B有相互作用.通过荧光素酶报告基因发现,Vp38和Vp41B对Caspase启动子活性分别有抑制和激活作用.采用RNAi技术下调两个WSSV蛋白的表达后,研究发现:Vp38和Vp41B分别对对虾血细胞的凋亡水平有促进和抑制的调控作用.

IP_6对人结肠癌细胞HT-29凋亡Caspase3基因作用

目的研究肌醇六磷酸（IP6）对人结肠癌细胞HT-29的诱导凋亡作用,检测Caspase3基因在IP6处理细胞前后表达的变化,并对IP6诱导人结肠癌细胞HT-29的凋亡机制进行初步探讨。方法不同浓度的IP6以不同时间作用于体外培养的HT-29细胞,用MTT法检测IP6持续作用对癌细胞增殖的影响;透射电镜观察癌细胞超微结构的变化;用RT-PCR方法对IP6作用前后以及作用不同浓度和时间的癌细胞内Caspase3活性进行检测。结果IP6能显著抑制人结肠癌细胞HT-29生长,呈剂量与时间依赖性;IP6作用后,HT-29细胞出现凋亡的形态学改变;与对照组相比,不同浓度的IP6作用不同时间后,Caspase3 mRNA表达均升高（F=8.173-91.755,q=3.960-17.095,P〈0.05）,IP6作用6个月组Caspase3 mRNA表达升高较其他时间组显著（q=12.858-14.890,P〈0.01）。结论IP6具有抑制人结肠癌细胞HT-29增殖和诱导凋亡的作用;IP6长期作用诱导细胞凋亡更加显著;Caspase3基因参与细胞的凋亡调节机制,发挥重要作用。

Caspase3基因克隆及在癫痫样放电海马神经元中的表达

目的 探讨海马神经元癫痫样放电引起神经元丢失的机制。方法 采用RT PCR法克隆大鼠全长Caspase3cDNA ,然后采用原位杂交和流式细胞技术检测了海马神经元癫痫模型中Caspase3基因表达和神经元凋亡情况。结果 得到了大鼠的全长Caspase3cDNA ,发现海马神经元癫痫样放电后出现Caspase3基因表达和神经元凋亡的现象。结论 癫痫样放电启动Caspase3表达 。

重构型人caspase-8基因原核表达载体的构建及其表达

目的 :构建三种重构型人caspase - 8基因的原核表达载体 ,转染大肠杆菌并诱导其表达。方法 :将人caspase- 8催化结构域基因及两种大、小亚基基因次序颠倒的重构型人caspase - 8基因克隆入原核表达载体pBV2 2 0 ,转染大肠杆菌并诱导表达。结果 :成功构建了三种重构型人caspase- 8基因的原核表达载体。转染大肠杆菌后 ,经温度诱导 ,重构型人caspase - 8基因获得了高效的表达。结论 :在大肠杆菌中成功表达了三种重构型人caspase - 8基因。

中国明对虾caspase2基因克隆及其在抗白斑综合征病毒中的表达分析

采用RACE技术克隆获得中国明对虾caspase2基因cDNA序列全长,并对该序列进行分析。结果显示,中国明对虾caspase2基因全长为1517 bp,开放阅读框长924 bp,5'非编码区长78 bp,3'非编码区长515 bp,命名为FcCasp2。推测该基因编码307个氨基酸,预测分子量为34.21 ku,理论等电点为7.62。同源性和系统进化分析发现,FcCasp2基因与凡纳滨对虾caspase2和斑节对虾caspase的相似性分别为88%和80%,与其他节肢动物caspase家族基因聚为一类。荧光定量RT-PCR结果显示,FcCasp2基因在肝胰腺中的相对表达量最高,在肌肉中表达量最低。WSSV感染后该基因在中国明对虾肌肉、肝胰腺和鳃丝中的表达量有不同的时空表达趋势,表明FcCasp2基因可能参与中国明对虾生物胁迫的应答反应。

Bcl-xL和Caspase3在人卵巢癌细胞株凋亡过程中的调节作用

目的 探讨 Bcl- x L和 Caspase3基因在顺铂诱导人卵巢癌细胞株凋亡过程中的表达及其在肿瘤细胞凋亡中的作用。方法 应用流式细胞术 ,RT- PCR技术和原位杂交技术 ,分别对顺铂诱导人卵巢癌敏感细胞株 (COC1)及卵巢癌耐药细胞株 (COC1/ DDP)的细胞凋亡及其 Bcl- x L和 Caspase3表达进行研究。结果 1不同顺铂浓度 (3、 6、 9.9μg/m l)作用下 COC1和 COC1/ DDP细胞凋亡率不同 ,COC1/ DDP细胞明显低于 COC1(P<0 .0 5 )。 2 COC1和 COC1/ DDP细胞株中均有 Bcl- x L基因表达 ,但 COC1/ DDP表达明显强于 COC1。在 6μg/ m l顺铂作用下 COC1和 COC1/ DDP细胞株中 Bcl- x L基因表达下调 ,以 COC1下降更明显。3原位杂交结果 ,6μg/ m l顺铂作用后 COC1和 COC1/ DDP细胞 Cas-pase3呈阳性 ,可见到凋亡细胞特征性形态学变化。结论 凋亡抑制基因 Bcl- x L在人卵巢癌多药耐药细胞株 (COC1/DDP)中高表达 ,是导致其细胞凋亡受抑制和对药物敏感性降低的重要原因 ,Caspase3在顺铂诱导凋亡的过程中被激活 。

妇科肿瘤组织中细胞凋亡相关基因表达及其与mtDNA突变相关性的研究

目的 研究妇科肿瘤患者原发性肿瘤组织细胞凋亡相关基因bcl 2、bax、caspase3的表达及其与mtDNA突变的相关性。方法 取 32例妇科恶性肿瘤组织进行研究 ,应用RT PCR方法检测bcl 2、bax、caspase3基因的表达。采用PCR SS CP及DNA测序检测mtDNA突变。结果 在妇科恶性肿瘤组织中 ,bcl 2 ,bax ,caspase3基因的表达率分别为 78 1%、4 3.8%及 34 4 %。bcl 2与caspase3、bax表达之间呈明显的负相关 ,Caspase3与Bax基因表达的共同阳性率和共同阴性率分别为71 4 %及 94 4 %。在mtDNA突变的 2 2例中 ,2 0例 (90 9% )同时检测到bcl 2的表达 ,Bax及caspase3基因在mtDNA突变组的表达率分别为 2 7 3%和 13 6 % ,明显低于非突变组。结论 在妇科恶性肿瘤组织中存在bcl 2基因的高表达和bax、cas pase3基因的低表达。bcl 2与caspase3、bax表达之间呈明显的负相关 ,caspase3与bax基因存在共表达关系。细胞凋亡相关基因表达与mtDNA突变亦存在一定的相关性。

自杀基因作为一种“安全性开关”控制CAR-T细胞毒性的临床前研究

目的:探讨小分子化学诱导药AP1903能否在体内外终止过表达iCasp9自杀基因的CD19靶向嵌合抗原受体修饰T(CD19CAR-T)细胞毒性功能。方法:构建过表达iCasp9的CD19CAR-T(iCasp9-CD19CAR-T)细胞并和AP1903共孵育,采用流式细胞术检测细胞表型及凋亡的方法,分别在K562和T细胞上验证iCasp9/CID自杀基因系统,在体内(观察荷Raji细胞移植瘤NCG小鼠的生存率)和体外(流式细胞术检测细胞的杀伤功能)检测AP1903给药情况下iCasp9-CD19CAR-T细胞的杀伤功能。结果:和CD19CAR-T细胞相比,iCasp9-CD19CAR-T细胞的增殖能力、表型及体内外杀伤功能均无显著差异(均P>0.05)。AP1903给药2 h后双表达i Casp9和CD19CAR的K562和T细胞分别有(33.8±0.9)%和(27.95±0.35)%的细胞出现凋亡,AP1903给药24 h后双表达iCasp9和CD19CAR的K562和T细胞均已经全部死亡。检测AP1903给药和未给药两种条件下的iCasp9-CD19CAR-T细胞体外杀伤效率,前者明显低于后者(P<0.01);iCasp9-CD19CAR-T细胞治疗荷Raji细胞移植瘤NCG小鼠,其60 d生存率同样是AP1903给药的明显低于未给药的(P<0.01)。结论:小分子化学诱导药物AP1903能在体内外有效终止iCasp9-CD19CAR-T细胞毒性功能。

斜纹夜蛾spli caspase-1部分基因的克隆与分析

紫外线、芹菜夜蛾核型多角体病毒(sfMNPV)和苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)都可诱导斜纹夜蛾(Spodoptera littoralis)SL-1细胞凋亡,这说明在SL-1细胞中Caspase表达活性高,本实验从莲纹夜蛾(Spodoptera littoralis)和草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)序列出发,根据其中保守性高的序列设计引物,提取SL-1细胞中的总RNA,并进行逆转录和PCR扩增,获得了一条419bp的cDNA。

caspase3基因表达与原发性肝细胞癌细胞凋亡无关

目的 研究caspase3在原发性肝细胞癌 (HCC)中的表达并观察其与细胞凋亡的关系。方法 原位杂交检测caspase3在HCC中的表达 ,原位末端标记检测细胞凋亡。结果 39例HCC中的2 1例 (5 3 8% )不同程度的表达caspase3,而 46 2 %的HCC未见caspase3表达。HCC中caspase3阳性率低于癌旁非癌肝组织中的阳性率 (87 5 % ,7/ 8) ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。caspase3的表达与肿瘤的分化有关 ,中等至高分化的HCC中阳性率 (72 2 % )明显高于低分化HCC中的阳性率 (38 1% ,P <0 0 5 ) ,而与肿瘤的大小、分级无关。尽管在已转移的HCC中阳性率 (6 2 5 % )高于无转移的HCC中的阳性率 (5 1 6 % ) ,但差异无显著性 (P >0 0 5 )。检测HCC中的细胞凋亡发现 ,肿瘤组织中caspase3的表达与肿瘤细胞的凋亡无明显的关系 ,caspase3阳性的HCC中 ,其细胞凋亡指数 (AI)与caspase3阴性的HCC中的AI相比 ,差异无显著性 (7 1‰∶6 6‰ ,P >0 0 5 )。结论 caspase3失表达在HCC的发生中起重要作用 ,但与HCC中细胞凋亡的关系不很密切。

汉族人群caspase10基因中存在一个新的微卫星位点(英文)

目的检测汉族人群caspase10基因(CASP10)编码区外显子及剪接区域的多态性位点,研究CASP10基因与多基因复杂疾病的关联性。方法采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)、变性高效液相色谱技术(denaturing high-performanceliquid chromatography,DHPLC)、直接测序及克隆测序技术检测CASP10基因第9外显子及其部分侧翼序列。结果CASP10基因第9外显子在本人群70例血样本中未检测到存在于其他人群中已知的单核苷酸多态(single nucleotide polymorphism,SNP),但初步发现在第8内含子中靠近第9外显子处存在连续重复的单核苷酸T,且T的数目在不同的个体中存在差异。测序分析显示该处为一单核苷酸重复序列,提示该位点为一单核苷酸重复微卫星位点。经比较现存的基因组数据库,先前未有类似报道。进一步采用高保真酶扩增及测序都证实同样结果。用DHPLC法检测了70例浙江汉族人群血样本,结果均呈杂合状态,暂命名为IVS8-13(T)n。结论我们的结果提示汉族人群中该位点为一杂合度较高的单核苷酸重复的微卫星位点。这一结果与NCBI的dbSNP数据库中公布的该位点为一缺失型的SNP不同,提示这一位点的遗传差异可能与种族相关。汉族人群CASP10基因中存在的这个微卫星的意义还有待于深入研究。

中医药干预对帕金森病细胞凋亡影响的研究进展

帕金森病(PD)是一种常见于中老年人的运动障碍性疾病,以黑质致密部多巴胺(DA)能神经元及其他含色素神经元(如蓝斑、脑干中的中缝核及迷走神经背核等)大量变性死亡为主要的病理特征。细胞凋亡作为一种多基因调控的程序性细胞死亡,参与了PD神经元细胞的死亡过程,线粒体介导的凋亡是PD细胞凋亡的主要途径,抗凋亡治疗是早期预防和延缓PD进程的一种有效治疗方法。中医药在抗细胞凋亡治疗上疗效明显,大量实验表明中医药干预,包括单味中药、中药复方及针灸等治疗,能通过多种机制调控凋亡相关基因(如抗凋亡基因Bcl-2和Bcl-xL、促凋亡基因Bax和P53等)信号转导,减少Caspases凋亡蛋白的激活及表达,从而抑制PD细胞凋亡。本文将对细胞凋亡分子机制及中医药干预对PD细胞凋亡影响的研究进展做一综述。

灵芪胶囊对直结肠癌lovo细胞凋亡相关基因表达的影响

目的:观察灵芪胶囊对直结肠癌lovo细胞凋亡相关Caspase3基因表达的影响。方法:灵芪胶囊含药血清根据浓度不同分为灵芪胶囊高剂量组、灵芪胶囊中剂量组、灵芪胶囊低剂量组、阳性对照组及空白对照组,将对数生长期的lovo细胞培养至细胞贴壁后,分别放入相应的含药血清,48 h后收集细胞,应用蛋白质印迹法检测各组Caspase3的含量。结果:空白对照组Caspase3蛋白表达量较高,阳性对照组和灵芪胶囊高剂量组Caspase3蛋白表达量小于空白对照组,其结果具有明显统计学差异(P<0.01)。灵芪胶囊中剂量组、灵芪胶囊低剂量组Caspase3表达量与空白对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:体外条件下,灵芪胶囊对lovo细胞具有一定的抑制作用,能够使细胞凋亡发生。灵芪胶囊导致细胞发生凋亡的作用机制可能与抑制Caspase3基因的表达情况有关。