X-染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1通过自噬途径调控Caspase 1介导的胃肠道间质瘤细胞焦亡

目的:探究X-染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1(XAF1)对人胃肠道间质瘤(GIST)细胞中半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase 1)介导的细胞焦亡的影响及机制。方法:实时荧光定量PCR和Western blot检测人正常胃黏膜上皮细胞系(RGM-1)和GIST细胞系(GIST-T1、GIST-430、GIST-882)中XAF1的表达水平;采用脂质体介导转染法将pcDNA3.1-XAF1重组质粒染进GIST-882细胞,以构建高表达XAF1的GIST-882细胞。GIST-882细胞分为对照组、pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1空载体质粒)、pcDNA3.1-XAF1组(转染pcDNA3.1-XAF1重组质粒)、pcDNA3.1-XAF1+Rap组(转染pcDNA3.1-XAF1重组质粒并给予自噬激活剂雷帕霉素处理),免疫荧光染色检测各组细胞内微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达情况,Western blot检测各组细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值与Beclin1蛋白表达水平,ELISA法检测各组细胞上清中白细胞介素,IL-1β、IL-18含量,乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测各组细胞LDH释放率,Western blot检测各组细胞中Caspase-1及其活化形式cleaved-Caspase-1、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、消皮素D(GSDMD)蛋白表达水平。结果:与RGM-1细胞比较,GIST-T1、GIST-430、GIST-882细胞中XAF1 mRNA和蛋白相对表达量显著减少(P<0.05);细胞转染后,pcDNA3.1-XAF1组GIST-882细胞中XAF1 mRNA和蛋白相对表达量均显著高于pcDNA3.1组、对照组(P<0.05)。与对照组比较,pcDNA3.1-XAF1组GIST-882细胞内LC3荧光强度明显减弱,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin1蛋白相对表达量显著减少(P<0.05),细胞上清液IL-1β、IL-18含量及LDH释放率显著升高(P<0.05),Caspase-1、cleaved-Caspase-1、NLRP3、GSDMD蛋白相对表达量也显著增加(P<0.05);与pcDNA3.1-XAF1组比较,pcDNA3.1-XAF1+Rap组GIST-882细胞内LC3荧光强度明显增强,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin1蛋白相对表达量显著增加(P<0.05),同时,细胞上清液IL-1β、IL-18含量及LDH释放率显著下降(P<0.05),Caspase-1、cleaved-Caspase-1、NLRP3、GSDMD蛋白相对表达量也显著减少(P<0.05)。结论:XAF1在GIST细胞中表达下降,提高XAF1表达能通过抑制自噬从而促进Caspase 1介导的GIST细胞焦亡,发挥抗肿瘤作用。

联合应用PARP-1与Caspase-3抑制剂对脊髓损伤大鼠神经细胞凋亡的影响

目的：探讨联合应用多聚腺嘌呤二核苷酸核糖聚合酶-1（PARP-1）抑制剂3-氨基苯甲酰胺（3-aminobenzamide,3-AB）和Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK对脊髓损伤大鼠神经细胞凋亡的影响。方法：120只成年健康SD大鼠随机分为假手术组（A组）、模型组（B组）、PARP-1抑制剂组（C组）和联合用药组（D组）,每组30只。以Allen′s打击法制备大鼠脊髓损伤模型,每组分别于造模后1d、3d、7d取5只大鼠行BBB评分,处死后利用免疫组化方法检测损伤部位脊髓内PARP-1、凋亡诱导因子（AIF）、Caspase-3及Bcl-2的表达;各时间点各组剩余大鼠处死后利用Western blotting检测PARP-1、Caspase-3蛋白表达水平,实时荧光定量PCR检测PARP-1、AIF、Caspase-3及Bcl-2的m RNA水平,采用原位末端标记（TUNEL）法检测神经细胞凋亡情况。结果：造模后1d时B、C、D组大鼠BBB评分均为0分;3d时三组间的评分无统计学差异;7d时D组及C组明显高于B组,且D组最高（P〈0.05）。免疫组化及Western blotting结果显示,脊髓损伤后1-7d,B组脊髓组织中PARP-1、AIF及Caspase-3表达逐渐增强,Bcl-2表达逐渐减弱（P〈0.05）;与B组比较,D组及C组的PARP-1、AIF、Caspase-3表达均显著降低,且D组最低（P〈0.05）;而D组及C组的Bcl-2表达显著高于B组,且D组最高（P〈0.05）。实时荧光定量PCR检测各目的基因表达水平与其蛋白水平一致。TUNEL结果显示,B组脊髓损伤后3d凋亡细胞最多,7d时数量减少,但仍保持在较高水平（P〈0.05）;D组及C组凋亡细胞指数均显著低于B组,且D组最低（P〈0.05）。结论：联合应用PARP-1抑制剂3-AB和Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK可有效抑制大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡,其机制可能与PARP-1、AIF、Caspase-3的表达抑制及Bcl-2的表达上调有关。

带有caspase富集功能域的凋亡抑制因子对急性病毒性心肌炎小鼠心肌的保护作用

目的研究急性病毒性心肌炎(AVMC)小鼠的带有caspase富集功能域的凋亡抑制因子(ARC)的表达及对心肌的保护。方法将60只成功建立AVMC模型的小鼠随机分为ARC反义寡核苷酸组(A组)、ARC错义寡核苷酸组(B组)和生理盐水对照组(C组),每组20只。分期分别采集标本测定外周血心肌钙蛋白T(cTnT)、心肌钙蛋白I(cTnⅠ)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同功酶(CK-MB)水平和ARC、动力相关蛋白1(Drp1)表达等数据。结果造模后第7、14、21天,3组外周血cTnT、cTnⅠ、CK、CK-MB水平差异有统计学意义(P<0.05),C组与B组相近(P>0.05),但均低于A组(P<0.05)。造模后第7天,3组ARC与Drp1蛋白表达水平差异有统计学意义(P<0.05),C组ARC表达与B组相近(P>0.05),但均高于A组(P<0.05),C组Drp1蛋白表达与B组相近(P>0.05),但均低于A组(P<0.05);造模后第14、21天3组ARC与Drp1蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论小鼠发生AVMC后高表达的ARC可抑制心肌细胞凋亡,对心肌组织有保护作用。

X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1启动子的克隆及其转录活性检测

目的:X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1能够诱导半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3凋亡,其具体转录调控机制尚不十分清楚。克隆X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1基因启动子,检测干扰素对其转录活性的影响。方法:实验于2006-05/2007-07在香港大学分子生物学研究所和洛阳华美生物工程公司完成。①材料:结肠癌细胞株Lovo和Sw1116来自美国AmericanTypeCultureCol-lection。pGL3basic载体,内参照pRL-CMV载体和Dual-luciferasereporterKit,T4DNA连接酶,限制性内切酶KpnI和XhoI均由Promega公司提供。②实验方法:采用PCR法扩增获得X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1基因的启动子片段,将之定向克隆到含荧光素酶报告基因的pGL3basic载体上,获得的报告基因质粒命名为pLUC107,瞬时转染Lovo和Sw1116细胞株,经α-干扰素刺激处理,启动子转录活性用荧光素酶相对表达活性表示。结果:①PCR扩增结果:在预期的271bp处出现清晰DNA片段,无非特异扩增现象,证明其为X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1启动子的PCR扩增产物。②重组质粒的酶切鉴定及测序:重组质粒pLUC107双酶切后可见约为271bp的DNA片段,与理论值相一致。DNA测序证实含X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1启动子荧光素酶报告基因质粒构建成功。③干扰素对X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1启动子转录活性的影响:与未经α-干扰素处理的含pLUC107的Lovo和Sw1116细胞的荧光素酶相对活性值比较,经α-干扰素处理后两种细胞的荧光素酶相对活性值均明显升高(P均<0.05),且升高幅度与α-干扰素呈剂量依赖性。结论:成功克隆出X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1基因启动子片段,并利用荧光素酶报告基因证实α-干扰素可上调其转录活性。

PD-1靶向纳米投递系统对胃癌细胞活性及T细胞免疫应答因子的影响

目的探讨PD-1靶向纳米投递系统对胃癌细胞活性及T细胞免疫应答因子的影响。方法取胃癌细胞,将其分为空白对照组、程序性细胞死亡蛋白-1(Programmed Cell Death-1,PD-1)抑制剂组和PD-1靶向组3组。用乳化溶剂挥发法制备PD-1靶向纳米投递系统,荧光倒置显微镜下观察转染情况,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,实时PCR法及免疫印迹法检测T细胞免疫应答因子表达。结果与空白对照组相比,PD-1抑制剂组、PD-1靶向组的转染率和凋亡率依次升高,且差异均有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组相比,PD-1抑制剂组、PD-1靶向组细胞增殖率依次降低,且差异均有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组相比,PD-1抑制剂组、PD-1靶向组细胞INF-γ、IL-2、CD80的mRNA表达及蛋白表达依次升高,TNF-α、TGF-β1、PD-1的mRNA表达及蛋白表达依次降低,且差异均有统计学意义(P<0.05)。结论PD-1靶向纳米投递系统可高效传送PD-1抑制剂到胃癌细胞,并有效改善细胞活性,调控T细胞免疫应答因子表达,可为胃癌治疗领域的进一步研究和临床应用提供新的思路和方向。

过表达SIRT1基因通过PI3K/AKT信号通路抑制高糖刺激心肌H9c2细胞凋亡和活性氧水平

目的:探讨过表达沉默信息调节因子1(SIRT1)对高糖刺激心肌H9c2细胞凋亡和活性氧簇(ROS)水平的影响。方法:分别用空载质粒(pcDNA3.1-NC)和SIRT1过表达质粒(pcDNA3.1-SIRT1)转染心肌细胞,并进行高糖诱导。实验分为对照组、高糖组、高糖+pcDNA3.1-NC组和高糖+pcDNA3.1-SIRT1组,用qPCR和Western blot法分别检测各组心肌H9c2细胞的SIRT1表达,噻唑蓝(MTT)法检测细胞的活力,流式细胞术检测细胞凋亡,DCFH-DA检测细胞内ROS水平,Western blot检测细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K、AKT和磷酸化AKT的蛋白水平。结果:与对照组相比,高糖诱导的心肌H9c2细胞中SIRT1表达显著降低,细胞活力显著下降,ROS水平和细胞凋亡率增加,PI3K和AKT磷酸化蛋白水平下调(P<0.05);过表达SIRT1可诱导高糖刺激的心肌H9c2细胞活力增加,ROS水平和凋亡率降低,PI3K和AKT磷酸化蛋白水平上调(P<0.05)。结论:过表达SIRT1可通过调控PI3K/AKT信号通路逆转高糖刺激心肌H9c2细胞活力的降低及凋亡率和氧化应激的增加。

基质金属蛋白酶组织抑制剂1对细胞因子诱导的胰岛β细胞凋亡的保护作用

目的探讨基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)对细胞因子IL-1β、TNF-α和干扰素γ(IFN-γ)诱导的胰岛β细胞凋亡的保护作用及其可能机制。方法实验分TIMP-1干预组、细胞因子刺激组和对照组。细胞因子刺激组应用细胞因子(IL-1β 10μg/L,TNF-α 50μg/L,IFN-γ 50μg/L)诱导大鼠胰岛瘤细胞株RINm5F细胞凋亡;TIMP-1干预组在细胞因子刺激前予以TIMP-1(50μg/L)预处理1 h;对照组采用无血清培养基同步培养。应用四甲基偶氮唑盐比色法和Caspase-3分光光度法检测各组细胞活力和Caspase-3活性,采用DNALadder进行凋亡鉴定。结果与对照组比较,细胞因子IL-1β、TNF-α和IFN-γ联合刺激组细胞活力明显降低,并呈时间依赖性(Pa<0.05,0.001);TIMP-1干预组较细胞因子刺激组细胞活力上升约14%,Caspase-3活性下降约38%,二组比较差异有显著性意义(Pa<0.001)。DNA Ladder检测,细胞因子刺激组可见特征性的梯状条带,TIMP-1干预组梯状条带不明显,出现与对照组相似的2条基因组大分子条带。结论IL-1β、TNF-α和IFN-γ联合刺激可诱导RINm5F细胞凋亡,TIMP-1对细胞因子诱导的RINm5F细胞的凋亡有一定的保护作用,此作用可能与其抑制Caspase-3活性有关。

血管内皮生长因子和血管生成素-1抑制心脏成肌细胞凋亡研究

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF165)和血管生成素-1(angiopoietin-1)抑制心肌细胞凋亡的作用机制。方法:将编码人VEGF165或angiopoi-etin-1的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-VEGF165或Ad-Ang1)转染大鼠心脏成肌细胞(H9C2),24h后以H2O2诱导细胞凋亡,分析VEGF165和an-giopoietin-1的抗凋亡作用。腺病毒转染24h后检测细胞中三磷酸肌醇激酶(phosphatidylinositol-3kinase)活性和bcl-2表达水平。结果:VEGF165和angiopoietin-1可不同程度抑制H9C2细胞凋亡。VEGF165和Ang1作用下细胞内三磷酸肌醇激酶活性和bcl-2表达水平增高。结论:VEGF165和/或Ang1可抑制心脏成肌细胞凋亡,这种保护作用与其激活细胞内三磷酸肌醇激酶途径和促进抗凋亡分子bcl-2的表达相关。血管生长因子VEGF165和angiopoietin-1的心脏成肌细胞保护作用为其功能学研究和临床应用开辟了新的方向。

髓系白血病细胞中细胞因子信号转导抑制因子1基因启动子去甲基化对细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨髓系白血病(ML)细胞中细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS-1)基因启动子去甲基化对细胞增殖、凋亡的影响。方法收集78例ML患者的骨髓标本(实验组)以及人ML细胞系U937、HL-60、K562为研究对象,另外收集50例健康捐献者的骨髓标本作为对照组。甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)检测ML患者骨髓标本中SOCS-1基因启动子甲基化状态,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测ML患者骨髓标本以及人ML细胞系中SOCS-1 mRNA表达;Western blot检测ML患者骨髓标本以及人ML细胞系中SOCS-1蛋白表达。用0、0.8、1.6、3.2μmol/L地西他滨(DCA)分别处理U937细胞,并分别命名为空白组、DCA-L组(DCA低剂量)、DCA-M组(DCA中剂量)、DCA-H组(DCA高剂量)。MS-PCR检测各组细胞中SOCS-1基因启动子甲基化状态;qRT-PCR检测各组细胞中SOCS-1 mRNA表达;Western blot检测各组细胞中SOCS-1蛋白表达;CCK-8法检测各组细胞增殖情况;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果SOCS-1在ML患者中呈高甲基化状态,SOCS-1 mRNA及SOCS-1蛋白在ML患者中的表达低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);人ML细胞系U937、HL-60、K562中SOCS-1 mRNA及SOCS-1蛋白表达低于人骨髓基质细胞HS-5,差异有统计学意义(P<0.05),且U937细胞中SOCS-1 mRNA及SOCS-1蛋白表达水平最低,因此,以U937细胞为研究对象进行后续实验。与空白组比较,DCA-L组、DCA-M组、DCA-H组中SOCS-1甲基化水平、450 nm处光密度值(OD_(450 nm))(24、48、72 h)降低,SOCS-1 mRNA及SOCS-1蛋白表达水平、细胞凋亡率升高(P<0.05),且随着DCA浓度的升高,上述指标的相应趋势越明显。结论SOCS-1去甲基化可抑制ML细胞增殖、促进细胞凋亡。

细胞因子信号传导抑制蛋白1对肿瘤坏死因子-α诱导的肾小管细胞凋亡的影响

目的观察细胞因子信号传导抑制蛋白1(SOCS-1)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导肾小管上皮细胞(HKC)凋亡的影响。方法体外培养人肾小管上皮细胞(HKC),应用脂质体2000分别转染pCR3.1/SOCS-1表达质粒和pCR3.1空质粒载体,G418筛选阳性克隆。给予TNF-α(20μg.L-1)进行刺激。采用Western blot检测SOCS-1、Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3、Caspase-3、Janus酪氨酸激酶2(JAK2)、信号转导和转录活化因子1(STAT1)、磷酸化JAK2(p-JAK2)和磷酸化STAT1(p-STAT1)的表达;流式细胞术和原位缺口末端标记法(TUNEL)观察HKC细胞凋亡情况。结果与对照组相比,TNF-α组肾小管上皮细胞凋亡明显增加,凋亡相关Cleaved caspase-3蛋白表达明显上调,Bax/Bcl-2蛋白比率升高;SOCS-1过表达能够抑制TNF-α刺激引起的HKC细胞的凋亡,下调JAK2和STAT1的磷酸化水平及Cleavedcaspase-3蛋白的表达,降低Bax/Bcl-2蛋白比率。结论 SOCS-1过表达抑制TNF-α诱导的肾小管上皮细胞凋亡可能是通过抑制JAK/STAT信号通路活化实现的。

凋亡抑制因子Livin和细胞周期蛋白D1在外鼻基底细胞癌的表达及意义

目的检测凋亡抑制因子Livin和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)在外鼻基底细胞癌中的表达,探讨两者在外鼻基底细胞癌发生、发展过程中的作用及其相关性。方法采用免疫组织化学技术检测凋亡抑制因子Livin和Cyclin D1在30例外鼻基底细胞癌和18例外鼻正常组织中的表达,并观察两者在外鼻基底细胞癌表达的相关性。结果 Livin和Cyclin Dl在外鼻基底细胞癌组织中阳性表达率53.33%(16/30)和63.33%(19/30),明显高于外鼻正常组织11.11%(2/18)和16.67%(3/18),差异均有显著性(P<0.01)。两者在外鼻基底细胞癌中的表达呈正相关。结论凋亡抑制因子Livin和Cyclin D1均参与外鼻基底细胞癌的发生、发展过程,并且两者之间存在反馈调节机制,在外鼻基底细胞癌的形成中起协同作用。

细胞因子信号传导抑制蛋白-1减轻细胞因子诱导胰岛β细胞促凋亡基因的表达

目的构建稳定表达细胞因子信号传导抑制蛋白-1(SOCS-1)蛋白的细胞,探讨其在胰岛β细胞凋亡中的保护作用。方法克隆大鼠SOCS-1基因,构建表达载体pEGFP-C1-SOCS1并转染入大鼠胰岛细胞系RINm5F中,构建稳定表达SOCS-1蛋白的细胞。分别用细胞因子IL-1β、TNF-α、IFN-γ、IL-1β联合IFN-γ、IL-1β联合TNF-α及IFN-γ刺激24 h,RT-PCR与Western blot检测凋亡相关指标。结果成功构建了稳定表达SOCS-1蛋白的细胞。用IFN-γ、IL-1β联合IFN-γ、IL-1β联合TNF-α及IFN-γ刺激后,未转染SOCS-1质粒的细胞iNOS转录水平显著升高。在用所有细胞因子刺激后,未转染SOCS-1质粒的细胞caspase-3表达及活性均显著升高。结论 SOCS-1蛋白能减轻多种细胞因子诱导的胰岛β细胞促凋亡基因的表达。

端粒酶抑制因子X1过表达对人食管癌EC1细胞增殖及凋亡的影响

目的探究端粒酶抑制因子X1(PinX1)对人食管癌EC1细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养人食管癌细胞系EC1细胞株,并将其分为空白对照(NG)组(空白对照细胞)、pcDNA组(转染阴性对照质粒)、pcDNA-PinX1组(转染PinX1过表达质粒)、N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)组(加入信号通路抑制剂)。采用实时荧光定量PCR法检测各组PinX1 mRNA的表达水平。分别采用CCK-8法和流式细胞术检测各组细胞的增殖、凋亡情况。采用荧光探针法检测各组活性氧簇(ROS)水平。采用蛋白质印迹法检测各组腺苷酸激活蛋白激酶/信号转导与转录激活因子3(AMPK/STAT3)信号通路相关蛋白的表达水平。结果经成功转染细胞后,与NG组、pcDNA组比较,pcDNA-PinX1组细胞的增殖抑制率、凋亡率、ROS水平、p-AMPK/AMPK均升高,而p-STAT3/STAT3均降低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。与pcDNA-PinX1组比较,NAC组细胞的增殖抑制率、凋亡率、ROS水平、p-AMPK/AMPK均降低,p-STAT3/STAT3升高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论PinX1过表达可抑制人食管癌EC1细胞增殖并诱导其凋亡,可能通过促进ROS/AMPK/STAT3信号通路活化来实现。

X连锁凋亡抑制蛋白相关因子-1抑制肝癌裸鼠移植瘤生长的研究

目的研究X连锁凋亡抑制蛋白相关因子-1(XAF1)基因对人肝癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法建立人肝癌细胞株SMMC7721裸鼠荷瘤模型,每组5只裸鼠分别在瘤内分3点注射相同感染滴度的重组腺病毒Ad5/F35-XAF1、Ad5/F35-Null对照空病毒及等体积的磷酸缓冲液(PBS),隔天注射1次,疗程2周。每3天测量各组裸鼠移植瘤的体积,观察Ad5/F35-XAF1组移植瘤的生长与其他两组的差异。原位末端标记TUNEL法检测移植瘤细胞的凋亡,免疫组织化学法检测移植瘤中XAF1蛋白表达和微血管密度(MVD)。结果与PBS组和Ad5/F35-Null组比较,瘤内注射Ad5/F35-XAF1组裸鼠移植瘤体积、质量和MVD显著减小(P<0.05或P<0.01),而移植瘤细胞的凋亡指数和XAF1蛋白的表达率均明显增高(P<0.01)。结论腺病毒介导XAF1基因可抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长,可能与该基因诱导肝癌细胞凋亡和抑制肿瘤血管形成有关。

川芎嗪对人肝星状细胞凋亡与基质金属蛋白酶抑制因子-1 mRNA表达的影响

目的:观察川芎嗪(TMP)对人肝星状细胞(HSC)凋亡与基质金属蛋白酶抑制因子-1mRNA(TIMP-1 mRNA)表达的影响。方法:采用人肝星状细胞株LX-2作为理想的肝星状细胞研究模型,LX-2细胞经不同剂量TMP(终浓度为50、100、200、400mg/L)作用48h后,应用流式细胞仪Annexin/PI双染方法检测TMP对LX-2细胞凋亡的影响;应用RT-PCR检测TMP对LX-2细胞TIMP-1 mRNA表达的影响。结果:TMP可显著促进LX-2细胞凋亡,细胞早期凋亡率随TMP浓度增加而提高,与空白对照组相比凋亡率显著升高(P<0.01或P<0.05);同时TMP可显著降低LX-2细胞TIMP-1mRNA的表达,与空白对照组相比差异显著(P<0.01)。结论:促进HSC凋亡,抑制其TIMP-1 mR-NA的表达是TMP抗肝纤维化的部分机制。

转化生长因子-β_1对兔膝骨关节炎软骨细胞凋亡的抑制作用

骨关节炎（osteoarthritis，OA）主要的病理改变是关节软骨的退行性变化，这是因为在OA时关节液中大量炎症因子产生，如白细胞介素（IL）-1、IL-6、一氧化氮（NO）等。这些炎症因子可加速软骨基质降解，从而导致软骨组织代谢失衡，

川芎嗪联合顺铂对老年肺癌病人基质细胞衍生因子-1、凋亡抑制蛋白因子与基质金属蛋白酶表达的影响

目的探究川芎嗪联合顺铂对老年病人(SDF-1)、凋亡抑制蛋白因子(Livin)、基质金属蛋白酶(MMPs)表达的影响。方法选取2016年6月至2018年6月攀钢集团总医院密地院区收治的老年肺癌病人140例,采用随机数字表法分为观察组和对照组,每组各70例。对照组采用NP化疗方案,观察组在对照组基础上联合使用川芎嗪。比较两组治疗效果、生活质量、SDF-1、Livinα、Livinβ、MMP-2、MMP-9水平。结果两组治疗有效率比较,差异无统计学意义[32(45.7%)比43(61.4%),χ~2=3.475,P=0.062];观察组生活质量评分高于对照组[(23.46±4.21)分比(14.19±3.32)分,t=14.466,P=0.000];观察组SDF-1、Livinα、Livinβ、MMP-2、MMP-9等均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组不良反应发生率低于对照组[40(57.1%)比51(72.9%),χ~2=4.272,P=0.039]。结论川芎嗪联合顺铂治疗老年肺癌病人能够降低肿瘤组织SDF-1、Livin、MMPs表达,提高临床疗效,有助于提高病人生活质量,降低不良反应的发生。

肝癌调控细胞凋亡抑制因子1的表达及其对细胞增殖和凋亡的影响

目的探究TP53调控细胞凋亡抑制因子1(TRIAP1)对肝癌细胞Huh7和HepG2增殖和侵袭能力的影响。方法本研究首先使用TCGA数据库分析肿瘤组织和正常组织中TRIAP1的表达差异,分析TRIAP1表达与肝癌病人预后的相关性。通过在肝癌细胞Huh7和HepG2中转染siRNA及siControl构建敲低TRIAP1的细胞系,Western blot验证转染TRIAP1 siRNA的敲低效率及其他相关蛋白水平。Capase3/7活性细胞凋亡试剂盒、Annex inV/PI法检测在肝癌细胞中敲低TRIAP1对肝癌细胞凋亡的影响,CCK8检测TRIAP1对肝癌细胞增殖的影响。结果TCGA数据库分析显示,肝癌细胞中TRIAP1表达上调,且与肝癌病人预后呈负相关。在肝癌细胞Huh7和HepG2中敲低TRIAP1实验组TRIAP1的表达比对照组表达明显下降,敲低TRIAP1后实验组中p21在mRNA和蛋白表达水平均出现上调,敲低TRIAP1实验组的增殖能力显著下降,而凋亡细胞数量明显增加。结论TRIAP1在肝癌细胞中表达上调,负调控细胞周期相关基因p21的表达调节肿瘤细胞周期,抑制TRIAP1可显著上调p21,抑制肝癌细胞增殖能力,促进肝癌细胞凋亡进程。

α干扰素对结肠癌细胞株lovo和sw1116中X染色体连锁凋亡抑制相关因子1表达调节作用

目的:研究α干扰素(IFN-α)对结肠癌细胞株lovo和sw1116中X染色体连锁凋亡抑制相关因子1(XAF1)表达调节作用。方法:以不同浓度(250、125、62.5和0 U/ml)的IFN-α作用细胞,荧光素酶报道系统检测IFN-α对XAF1启动子活性的影响,运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质免疫印迹等方法观察IFN-α对XAF1的mRNA和蛋白表达水平的影响。结果:IFN-α可提高XAF1启动子活性,在lovo和sw1116中分别达到61.7%和87.1%(P<0.05),同时在mRNA和蛋白水平上调XAF1表达,并呈剂量依赖关系(P<0.05)。结论:IFN-α可上调XAF1表达,提示XAF1可能是干扰素刺激基因(ISG)。

生长抑制因子1剪接变异体调控p53信号通路诱导肝癌细胞凋亡

目的探讨生长抑制因子(ING1)调控p53信号通路诱导肝癌细胞凋亡的途径。方法通过脂质体转染的方法在体外培养的肝癌细胞株HepG2中过表达ING1基因3种剪接变异体,采用流式细胞仪检测各实验组细胞凋亡率和细胞周期变化,实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western blot法检测ING1、p53及其下游信号基因bcl-2、bax、p21waf1、mdm2、p14arfmRNA和蛋白表达情况,荧光素酶双标报道基因检测下游p21waf1启动子活性,Western blot检测野生型p53蛋白半衰期变化,使用免疫共沉淀法(IP)观察ING1剪接体与mdm2、p14arf蛋白间的结合情况。结果 HepG2细胞转染过表达ING1不同剪接变异体,pcDNA3-ING1b[(24.36±0.97)%]和pcDNA3-ING1c[(27.33±1.12)%]组细胞凋亡率显著高于空载体组[(8.22%±0.86)%](P<0.01),而pcDNA3-ING1a组细胞凋亡率[(8.90±1.03)%]与空载体组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空载体组比较,pcDNA3-ING1b和pcDNA3-ING1c组均出现G0/G1期阻滞(P<0.05);而pcDNA3-ING1a组各细胞周期的比例与空载体组比较差异无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR及Western blot法结果显示过表达ING1b或ING1c使HepG2细胞内源性bax、p21waf1、p14arfmRNA及蛋白表达量明显增高(P<0.01);内源性bcl-2、mdm2 mRNA及蛋白表达量明显降低(P<0.01);过表达ING1a的HepG2细胞bax、bcl-2、p21waf1、mdm2、p14arfmRNA及蛋白表达与空载体组比较差异无统计学意义(P>0.05)。ING1b和ING1c增强p21waf1启动子活性,延长野生型p53蛋白的半衰期,促进p53蛋白乙酰化,并且与p53反馈调节环路基因mdm2和p14arf结合,维持p53蛋白的稳定性和促进p53蛋白的活性。结论 ING1剪接变异体通过与p53负反馈调节基因mdm2竞争性结合p53蛋白,延长野生型p53蛋白半衰期,并促进p53蛋白乙酰化,增强p53蛋白下游基因bax、p21waf1、p14arf表达,抑制bcl-2、mdm2基因表达,促进肝癌细胞凋亡。