小檗碱通过ROS及caspase通路对肝癌HepG2细胞凋亡的作用

目的探究小檗碱(BBR)对肝癌HepG2细胞的增殖抑制及作用机制。方法采用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度(0、10、20、40、80μmol/L)BBR对肝癌HepG2细胞的抑制作用;采用Hoechst 33342染色观察处理后HepG2细胞形态学变化;用流式细胞仪检测HepG2细胞凋亡率;间接荧光标记法检测BBR对细胞内活性氧簇(ROS)水平的影响;JC-1染色法检测细胞内线粒体膜电位的变化;应用Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax、caspase-3、Cleaved-caspase-3的表达变化。结果 MTT法显示BBR可呈剂量、时间依赖性抑制肝癌HepG2细胞活力(P<0.05);Hoechst 33342染色发现细胞形态发生明显变化,0μmol/L BBR处理的细胞呈淡蓝色,处理组细胞核固缩,形成凋亡小体,细胞凋亡率与药物浓度呈正相关(P<0.05)。流式细胞术发现BBR能使细胞内ROS升高,线粒体膜电位水平下降。Western blot法显示随着药物浓度升高,Bax、Cleaved-caspase-3、cleaved-聚腺苷二磷酸核糖聚合酶表达增强,Bcl-2蛋白表达降低,凋亡相关蛋白caspase-3表达下降。结论 BBR在体外可能通过增加ROS、提高促凋亡蛋白Bax并激活caspase-3表达抑制肝癌HepG2细胞增殖并诱导细胞凋亡。

DEHP体外对大鼠睾丸间质细胞凋亡Caspase通路的影响

目的:通过对原代培养的大鼠睾丸间质细胞进行邻苯二甲酸二乙基己酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)染毒,探讨DEHP体外对大鼠睾丸间质细胞凋亡通路Caspase-3和Caspase-9表达以及细胞凋亡的影响。方法:体外分离和原代培养大鼠睾丸间质细胞,用不同浓度的DEHP(10、50、100 nmol/L)染毒24 h。荧光定量PCR法检测间质细胞Caspase-3和Caspase-9 mRNA表达,Western印迹检测间质细胞Caspase-3和Caspase-9蛋白表达,流式细胞术检测间质细胞凋亡率。结果:与对照组相比,DEHP各组睾丸间质细胞Caspase-3 mRNA(1.69±0.38 vs3.82±0.39、6.91±0.40、15.47±0.40)和蛋白(0.18±0.09 vs 0.32±0.10、0.61±0.08、0.89±0.09)表达显著增加(P均<0.05),Caspase-9 mRNA(2.24±0.41 vs 5.16±0.43、9.61±0.45、19.22±0.43)和蛋白(0.26±0.07 vs0.40±0.08、0.68±0.09、0.96±0.08)表达也显著增加(P均<0.05),细胞凋亡率(4.36±1.11 vs 7.52±1.09、12.72±1.10、24.59±1.11)也显著增加(P均<0.05),呈浓度依赖关系。结论:DEHP可通过激活细胞凋亡Caspase通路而诱导大鼠睾丸间质细胞凋亡,进而影响间质细胞功能。

邻苯二甲酸二乙基己酯在体外对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡Caspase通路的影响

目的通过对原代培养的大鼠卵巢颗粒细胞进行邻苯二甲酸二乙基己酯(di-2-ethylhexylphthalate,DEHP)染毒,探讨DEHP在体外对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡通路Caspase-3和Caspase-9基因表达以及细胞凋亡的影响。方法分离和培养原代未成熟大鼠的卵巢颗粒细胞,用不同浓度的DEHP(0、10、50、100 nmol/L)染毒24 h。荧光定量PCR法检测颗粒细胞的Caspase-3和Caspase-9基因mRNA表达水平,Weastern blot检测颗粒细胞Caspase-3和Caspase-9蛋白表达水平,流式细胞术检测颗粒细胞凋亡率。结果与对照组相比,各DEHP处理组卵巢颗粒细胞Caspase-3基因mRNA和蛋白表达水平下降(P<0.05),Caspase-9基因mRNA和蛋白表达水平也降低(P<0.05),同时细胞凋亡率增加(P<0.05),呈浓度依赖关系。结论 DEHP可通过激活Caspase通路而诱导大鼠卵巢颗粒细胞凋亡,进而影响卵巢功能。

麦冬皂苷D对大鼠心肌细胞凋亡及caspase通路的影响

目的:观察麦冬皂苷D对糖尿病(DM)大鼠心功能、心肌细胞凋亡的影响并探讨其机制。方法:将90只大鼠随机分为空白对照组、DM模型组、麦冬皂苷D低(10 mg·kg^(-1))、中(20 mg·kg^(-1))、高(40 mg·kg^(-1))剂量组、阳性对照(二甲双胍,160 mg·kg^(-1))组,每组15只。除空白对照组外,其余各组均采用腹腔注射链脲佐菌素复制DM模型。造模成功后,分别灌胃给药,空白对照组和DM模型组给予等量生理盐水,qd,持续4周。给药结束后,采用多普勒彩色超声评估各组大鼠心脏功能;苏木素-伊红(HE)染色观察心肌组织形态结构;激光共聚焦显微镜检测心肌细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹分析caspase 3通路及其上游相关蛋白表达情况。结果:与空白对照组比较,DM模型大鼠心功能下降、心肌组织现病理损伤、细胞凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.05); Bax和cleaved-caspase 3蛋白在心肌组织表达上调(P<0.05),Bcl-2、p-Akt和p-GSK-3β蛋白在心肌组织表达下调(P<0.05)。与DM模型大鼠比较,麦冬皂苷D各剂量组大鼠心功能增强、心肌组织病理损伤程度减轻、细胞凋亡率降低(P<0.05); Bax和cleaved-caspase 3蛋白在心肌组织表达下调(P<0.05),Bcl-2、p-Akt和p-GSK-3β蛋白在心肌组织表达上调(P<0.05)。麦冬皂苷D低、中剂量组的各指标水平与阳性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:麦冬皂苷D可能通过调节Akt/GSK-3β抑制caspase 3通路,减轻糖尿病大鼠心肌损伤。

宣肺败毒方调控TLR4/NLRP3/Caspase1信号通路抗小鼠急性肺损伤的作用机制研究

[目的]基于Toll样受体4(TLR4)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase1)信号通路研究宣肺败毒方(XFBD)对IgG免疫复合物(IgG-IC)诱导小鼠急性肺损伤(ALI)的药效作用及机制研究。[方法]采用IgG-IC诱导小鼠构建ALI模型,灌胃XFBD 4 g生药/kg和8 g生药/kg,单次给药;苏木素-伊红染色法(HE)观察肺组织病理变化;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒测定细胞活力;荧光定量PCR法检测小鼠肺组织细胞因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-18(IL-18)、白细胞介素-1β(IL-1β)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)以及TLR4/NLRP3/Caspase1信号通路相关因子mRNA表达量;免疫组化法检测小鼠肺组织TLR4、NLRP3和消皮素D(GSDMD)蛋白表达;蛋白免疫印迹法检测小鼠肺组织闭合蛋白(Occludin)、闭锁连接蛋白1(ZO-1)以及TLR4/NLRP3/Caspase1信号通路相关因子蛋白表达水平。[结果]与正常组相比,模型组小鼠肺组织炎性细胞浸润,肺泡间隙增厚,肺组织病理损伤评分和肺组织脏器系数显著升高,LDH及细胞因子表达明显升高,Occludin和ZO-1表达下调,TLR4/NLRP3/Caspase1信号通路相关因子mRNA和蛋白水平显著升高;与模型组相比,XFBD显著缓解急性肺损伤小鼠肺组织炎症细胞浸润,降低细胞因子表达,上调Occludin和ZO-1,显著下调TLR4/NLRP3/Caspase1信号通路相关因子mRNA和蛋白水平。[结论]XFBD可通过调控TLR4/NLRP3/Caspase1信号通路发挥抗小鼠ALI的作用。

长春胺衍生物Vin24通过Bcl-2/Bax/Caspase3通路改善糖尿病小鼠周围神经病变研究

目的探讨长春胺衍生物Vin24对糖尿病周围神经病变(DPN)小鼠病理症状的保护作用及其作用机制。方法40只8周龄雄性C57BL/6N小鼠随机分为对照组、模型组、长春胺给药组和Vin24给药组。除对照组外,其余3组小鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ,150 mg·kg^(-1))诱导1型糖尿病模型,6周后开始给药。30只18周龄雄性db/db小鼠随机分为模型组、长春胺给药组和Vin24给药组,10只同窝阴性小鼠作为对照组。给药组每天灌胃长春胺(30 mg·kg^(-1))或Vin24(46.8 mg·kg^(-1)),对照组和模型组每天灌胃等体积的生理盐水,持续4周。通过检测机械异位痛觉和热痛觉阈值来评价小鼠感觉功能。利用激光散斑成像仪检测小鼠外周血流量。取足垫表皮组织进行PGP9.5免疫荧光染色评价表皮内神经纤维(IENF)密度;提取原代背根底神经节(DRG)神经元进行β-tubulinⅢ免疫荧光染色评价DRG神经元突起生长情况。此外,取DRG组织进行ATF3免疫荧光染色以及Western blot检测Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase3和Caspase3的蛋白水平来评价DRG神经元凋亡水平。结果与模型组相比,Vin24给药组小鼠的机械异位痛和热痛觉阈值降低(P<0.01,P<0.001),外周血流量增加(P<0.001);IENF密度增加(P<0.05,P<0.01),DRG神经元突起生长得到改善(P<0.001)。荧光染色结果显示,Vin24给药后小鼠DRG组织中神经元凋亡标记物ATF3的表达减少(P<0.01,P<0.001)。Western blot结果显示,抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白水平显著增加(P<0.05),促凋亡蛋白Bax和Cleaved-Caspase3的蛋白水平显著降低(P<0.05)。结论长春胺衍生物Vin24通过调控Bcl-2/Bax/Caspase3通路,抑制Cleaved-Caspase3的激活,降低神经元的凋亡水平,从而减轻DRG神经元损伤,改善糖尿病小鼠周围神经病变。

从bFGF/Akt/Caspase通路探讨生肌象皮膏促进糖尿病大鼠溃疡愈合的机制

目的：通过观察2型糖尿病Sprague Dawley（SD）大鼠溃疡创面肉芽组织中碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）,丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（serine/threonine kinase,Akt）,半胱氨酸天冬氨酸酶-9（cystein-asparate protease-9,Caspase-9）的表达,探讨生肌象皮膏促进糖尿病大鼠溃疡愈合的作用机制。方法：制备2型糖尿病SD大鼠溃疡模型,随机分为糖尿病生肌象皮膏组、糖尿病凡士林组、糖尿病生理盐水组,正常组大鼠溃疡模型成模即为模型组。糖尿病生肌象皮膏组用生肌象皮膏纱条外敷,糖尿病凡士林组用凡士林纱条外敷,糖尿病生理盐水组和模型组用生理盐水纱条外敷伤口。各组分别于在造模后第1,3,7,14,21天观察创面愈合情况,取溃疡创面肉芽组织备用。采用苏木素-伊红（hematoxylineosin staining,HE）染色法于光镜下观察创面肉芽组织形态学变化,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测创面中bFGF的表达,酶联免疫吸附法（ELISA）测定创面p-Akt含量,免疫组织化学法检测创面中Caspase-9表达情况。结果：与糖尿病凡士林组、糖尿病生理盐水组比较,生肌象皮膏显著上调了溃疡创面肉芽组织中bFGF表达水平（P〈0.05）,增加了p-AKT的含量（P〈0.05）,同时抑制了Caspase-9的表达（P〈0.05）。结论：生肌象皮膏可通过bFGF/Akt/Caspase通路,促进糖尿病难愈创面愈合。

Caspase信号通路调控大鼠再生肝肝细胞的凋亡

目的从基因转录水平了解Caspase信号通路各途径对大鼠再生肝肝细胞凋亡的调节作用。方法将114只大鼠随机分为19组,包括9个部分肝切除组,9个假手术组和1个正常对照组。于手术后10个不同时间点用常规的两步灌流法和Percoll密度梯度离心法分离大鼠肝细胞,用大鼠Genome 230 2.0芯片检测在大鼠肝再生(LR)中Caspase信号通路相关基因表达变化,用荧光定量PCR确定芯片结果的可靠性,用生物信息学和系统生物学等方法分析基因表达变化预示的Caspase信号通路在调控大鼠再生肝肝细胞凋亡中的作用。结果 Caspase信号通路涉及38条途径和123个基因,大鼠Genome 230 2.0芯片含其中的106个基因,38个基因在大鼠肝再生中与肝细胞相关。Caspase信号通路抑制细胞凋亡的21条途径中,途径1、2和11在大鼠部分肝切除(PH)后的30h,途径27、29和31在72h,途径15和16在2h和30h,途径3和4在30h和72h抑制肝细胞凋亡。促进细胞凋亡的17条途径中,途径14在2h,途径34在6h,途径7在30h,途径13在2h和30h,途径36在6h和30h促进肝细胞凋亡。同时,尚未发现其他途径参与肝细胞增殖和(或)凋亡调控。结论 Caspase信号通路的15条途径和38个基因调控大鼠再生肝的肝细胞凋亡。

哈巴苷对急性脑缺血小鼠神经细胞及caspase非依赖性凋亡通路的影响

目的研究哈巴苷对急性脑缺血小鼠海马神经细胞、线粒体功能及caspase非依赖性细胞凋亡通路的影响。方法采用大脑中动脉阻塞法(middle cerebral artery occlusion,MCAO)复制小鼠急性脑缺血模型。造模后,各组分别立即尾静脉注射哈巴苷(4、8、12 mg·kg^(-1))、依达拉奉(3.2 mg·kg^(-1)),模型组及假手术组同法给予等量生理盐水(10 m L·kg^(-1))。造模6 h后,采用流式细胞术检测MCAO小鼠海马神经细胞凋亡率及线粒体膜电位;透射电镜观察MCAO小鼠海马神经细胞线粒体内外膜的清晰度、线粒体嵴的完整性、线粒体基质电子密度的高低变化及线粒体肿胀情况;采用Western blot法检测MCAO小鼠脑组织线粒体中AIF及Endo G的蛋白表达;采用q PCR法检测MCAO小鼠海马组织中AIF及Endo G mRNA的表达。结果造模6 h后,与假手术组相比,模型组小鼠脑组织海马神经细胞凋亡率明显增加(P<0.01);海马神经细胞线粒体膜电位明显降低(P<0.01);神经细胞线粒体超微结构受损严重,线粒体结构松散,可见明显肿胀;脑组织线粒体中AIF及Endo G蛋白表达明显降低,线粒体AIF及Endo G蛋白释放增加(P<0.01);海马组织AIF及Endo G mRNA表达明显增加(P<0.01);与模型组相比,哈巴苷各剂量组小鼠脑组织海马神经细胞凋亡率明显降低(P<0.05,P<0.01);海马神经细胞线粒体膜电位明显升高(P<0.01);神经细胞线粒体超微结构明显改善;哈巴苷8、12 mg·kg^(-1)组小鼠脑组织线粒体中AIF及Endo G蛋白表达明显增加,线粒体AIF及Endo G蛋白释放减少(P<0.05,P<0.01),哈巴苷4 mg·kg^(-1)组小鼠脑组织线粒体中Endo G蛋白表达明显增加,线粒体Endo G蛋白释放明显减少(P<0.05);哈巴苷8、12 mg·kg^(-1)组小鼠海马组织AIF及Endo G mRNA表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论哈巴苷对急性脑缺血有保护作用,其机制可能与保护大脑神经细胞及线粒体生理活性,抑制caspase非依赖性细胞凋亡通路相关。

白藜芦醇调控ROS/NLRP3/Caspase1通路介导的细胞焦亡对重症肺炎大鼠肺损伤的保护作用

目的探讨白藜芦醇对重症肺炎大鼠肺损伤的保护作用以及活性氧簇(ROS)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)/天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase1)通路在其中作用。方法取10只正常SD大鼠为空白对照组、40只SD大鼠建立重症肺炎病模型组,随机分为模型组、白藜芦醇低剂量组(6.5 mg/kg灌胃)、中剂量组(13.0 mg/kg灌胃)、高剂量组(26.0 mg/kg灌胃)各10只,空白对照组及模型组均经尾部静脉注射等体积生理盐水,连续8周。比较各组SD大鼠相关血清炎症因子水平、肺组织病理学变化、肺组织中ROS/NLRP3/Caspase1通路相关蛋白表达情况以及细胞焦亡关键蛋白Gasdermin D的N末端片段(GSDMD⁃N)的表达水平。结果干预治疗8周后,模型组TNF⁃a、IL⁃6、IL⁃1β、ROS、NLRP3、caspase⁃1和GSDMD⁃N水平>白藜芦醇低剂量组>白藜芦醇中剂量组>白藜芦醇高剂量组,差异有统计学意义(P<0.05);干预治疗8周后,与空白组SD大鼠比,模型组SD大鼠肺组织明显损伤,有大量炎症细胞浸润;模型组SD大鼠比,白藜芦醇各组SD大鼠肺泡内渗出、炎症细胞浸润等症状均明显改善。结论白藜芦醇可改善重症肺炎大鼠肺损伤,其机制可能与通过下调ROS/NLRP3/Caspase1信号通路表达水平,抑制炎症因子和细胞焦亡的发生相关。

黄芪桂枝五物汤对膝骨关节炎大鼠软骨损伤及NLRP3/Caspase1通路的影响

目的:探讨黄芪桂枝五物汤对膝骨关节炎(KOA)大鼠软骨损伤及核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)/天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase1)通路的影响。方法:将120只SD大鼠随机分成对照组、模型组、美洛昔康组、黄芪桂枝五物汤低、中、高剂量组。除对照组外,其余各组建立KOA软骨损伤模型。模型制备成功后对照组、模型组给予等体积的生理盐水;美洛昔康组给予40.0 mg/kg的美洛昔康溶液;黄芪桂枝五物汤低、中、高剂量组分别按20.0、40.0、80.0 mg/kg的剂量给予黄芪桂枝五物汤。实验结束后,进行大鼠关节炎症积分、KOA软骨Mankin's评分,测定机械痛阈(PWPT)及热刺激潜伏期(PWTL);测定膝关节软骨组织中NLRP3、Caspase1 mRNA及蛋白表达水平,白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平。结果:与对照组比较,模型组PWPT、PWTL降低(P<0.05);关节炎症积分,Mankin's评分,NLRP3、Caspase1 mRNA及蛋白表达水平,IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达水平升高(P<0.05)。与模型组比较,美洛昔康组和黄芪桂枝五物汤各剂量组PWPT、PWTL升高(P<0.05);关节炎症积分,Mankin's评分,NLRP3、Caspase1 mRNA及蛋白表达水平,IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达水平降低(P<0.05),且黄芪桂枝五物汤各剂量组存在明显的剂量-效应关系(P<0.05)。与美洛昔康组比较,黄芪桂枝五物汤低、中剂量组PWPT、PWTL较低(P<0.05);关节炎症积分,Mankin's评分,NLRP3、Caspase 1 mRNA及蛋白表达水平,IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达水平较高(P<0.05);而黄芪桂枝五物汤高剂量组以上各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:黄芪桂枝五物汤能减轻KOA软骨损伤程度,其高剂量效果尤为明显;其机制与黄芪桂枝五物汤能降低炎症信号通路NLRP3、Caspase1 mRNA及蛋白的表达,进而抑制炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达有关。

甲胎蛋白对人肝癌Bel 7402细胞caspase信号传递及耐受TRAIL的影响

目的研究甲胎蛋白(AFP)对人肝癌Bel 7402细胞内caspase信息通路信号传递的影响,以及对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导肝癌细胞凋亡的对抗作用。方法激光共聚焦显微镜观察AFP与caspase-3、caspase-8在Bel 7402细胞内的共定位;免疫共沉淀(Co-IP)技术研究AFP与caspase-3、caspase-8的相互作用;RNA干扰(RNAi)技术封阻AFP表达,并用Western blotting检测RNAi干扰肝癌Bel 7402细胞内AFP表达的效果;用蛋白酶活性比色法检测AFP对肝癌细胞caspase-3、caspase-8活性的影响;MTT法分析干扰AFP表达30 h后再给予TRAIL(2 nmol/L)处理24 h,Bel 7402细胞的生长情况,并用荧光显微镜观察经TRAIL处理后肝癌细胞的凋亡状况。结果共聚焦显微镜观察发现AFP、caspase-3、caspase-8主要表达于Bel 7402细胞的细胞质,发现AFP能与caspase-3共定位于细胞质,但与caspase-8在细胞质的共定位可能性很小;Co-IP技术研究发现AFP能与caspase-3结合,但不能与caspase-8结合;2 nmol/L剂量的TRAIL单独处理Bel 7402细胞并不能显著改变caspase-3活性,但能提升caspase-8活性,而用全反式维甲酸(ATRA)40μmol/L加TRAIL(2 nmol/L)处理时,则能提高Bel 7402细胞caspase-3活性;干扰AFP表达后,单独用TRAIL(2 nmol/L)也能激活caspase-3,而干扰AFP表达前后对caspase-8活性没有显著性改变;MTT分析发现,2 nmol/L剂量的TRAIL对Bel 7402细胞的生长并没有显著性抑制作用,但是干扰AFP表达后TRAIL(2 nmol/L)能明显抑制Bel 7402细胞生长(抑制率为48.4%);荧光显微镜观察表明,干扰AFP表达后TRAIL(2 nmol/L)能诱导Bel 7402细胞凋亡。结论AFP选择性抑制caspase-3活性是阻断人肝癌Bel7402细胞内凋亡信息传递的重要机制,也是AFP抵抗TRAIL诱导肝癌细胞凋亡的关键环节。

Caspase信号途径及其在乳腺癌治疗中的作用研究进展

乳腺癌是女性常见恶性肿瘤,具有死亡率高、易复发、转移率高等特点。细胞凋亡阻断是包括乳腺癌在内的恶性肿瘤的一大特征,而Caspase信号途径在细胞凋亡中有着十分重要的作用。现通过探讨乳腺癌细胞中Caspase信号通路的异常分子机制,总结影响Caspase信号通路的乳腺癌治疗方法,以期找到能够更好地诱导乳腺癌重新进入凋亡途径的方法。

胰激肽原酶与吡拉西坦片联合治疗老年T2DM认知功能障碍的疗效及其对Cyt-C/Caspase信号通路的调控作用

目的探讨胰激肽原酶(PK)与吡拉西坦片(Piracetam)联合治疗老年2型糖尿病认知功能障碍(T2DM-CI)的疗效及其对细胞色素C(Cyt-C)/Caspase信号通路的调控作用。方法共86名T2DM-CI患者被随机均分为观察组和对照组。对照组采用Piracetam治疗,观察组在对照组基础上增加PK治疗。比较两组血糖、血脂、神经功能评分、肾功能指标、认知功能评分、日常生活能力评分以及Cyt-C和Caspase-3水平。结果两组患者治疗后的血糖指标、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇水平和Cyt-C、Caspase-3水平均低于治疗前,且观察组低于对照组(P<0.05);治疗后的高密度脂蛋白胆固醇、简易精神状态评价量表评分和日常生活活动评分(ADL)评分均高于治疗前,且观察组高于对照组(P<0.05)。两组治疗后的胰岛素敏感性指数和胰岛素抵抗的同稳态评估模型均较治疗前改善,且观察组较对照组更明显(P<0.05)。结论PK和Piracetam联合治疗能有效改善老年T2DM-CI患者的血糖控制和认知功能,可能与调节Cyt-C/Caspase信号通路有关。

长链非编码RNA TFPI2AS1通过AKT通路调控胃癌细胞的增殖和凋亡

目的:探讨长链非编码RNA TFPI2AS1对胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的作用及分子机制。方法:采用lipofectamine2 000转染siRNA构建两组胃癌MGC-803细胞模型:TFPI2AS1靶向转染组(si-TFPI2AS1组)和非TFPI2AS1靶向转染组(NC组)。实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测两组TFPI2AS1、TFPI2、Bcl-2和Bax mRNA表达,细胞毒性活性检测(CCK8)和流式细胞术分别检测两组细胞增殖和细胞凋亡,Western blot检测两组p-AKT、cleaved caspase 9、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:qPCR检测结果显示,si-TFPI2AS1组TFPI2AS1和Bcl-2的mRNA表达水平明显低于NC组,TFPI2和Bax的mRNA表达水平明显高于NC组(均P<0.01)。CCK8检测结果显示,si-TFPI2AS1组细胞在培养24 h和48 h后细胞增殖能力均低于NC组(均P<0.01)。流式细胞术检测结果显示,si-TFPI2AS1组细胞凋亡率显著高于NC组细胞凋亡率(P<0.01)。Western blot结果显示,si-TFPI2AS1组p-AKT、cleaved caspase 9和Bax蛋白表达水平显著高于NC组,而Bcl-2蛋白表达水平显著低于NC组(均P<0.01)。结论:TFPI2AS1可通过下调TFPI2的表达促进胃癌细胞增殖,抑制细胞凋亡,其可能通过抑制AKT/cleaved caspase 9信号通路而发挥作用。

济阴颗粒对围绝经期综合征大鼠卵巢Caspase依赖性细胞凋亡通路的影响

目的探讨济阴颗粒干预围绝经期综合征的作用机制。方法雌性SPF级SD大鼠105只,随机选择10只正常大鼠为空白对照组,其余95只采用每日1次腹腔注射去氧乙烯基环己烯(VCD)溶液的方法造模,连续60 d。动情周期紊乱,血清雌二醇(E2)含量低于空白对照组最低值,卵泡雌激素(FSH)高于空白对照组最高值为造模成功。将造模成功大鼠随机分为6组,每组10只,分别为模型组、补佳乐组、坤宝丸组和济阴颗粒低、中、高剂量组。分组后,空白对照组与模型组给予蒸馏水,其他各组给予相应剂量药物,每日1次,连续30 d。采用荧光RT-PCR法检测卵巢组织Caspase-3,8,9 mRNA,Apaf-1 mRNA的表达。结果与空白对照组比较,模型组大鼠卵巢细胞中Caspase-3,8,9 mRNA,Apaf-1 mRNA的表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,济阴颗粒可显著降低卵巢细胞中Caspase-3,8,9 mRNA,Apaf-1 mRNA的表达。结论济阴颗粒可通过下调Caspase依赖性细胞凋亡通路的传导;抑制卵巢细胞凋亡,可能是其干预围绝经期综合征的作用机制之一。

济阴颗粒对绝经综合征大鼠卵巢Caspase非依赖性细胞凋亡通路的影响

目的探讨济阴颗粒治疗绝经综合征的可能作用机制。方法 105只大鼠随机选择10只作为空白对照组,其余95只采用腹腔注射去氧乙烯基环己烯溶液建造绝经综合征大鼠模型,将造模成功60只大鼠随机分为模型组、西药对照组、中药对照组和济阴颗粒低、中、高剂量组,每组10只。造模后空白对照组与模型组给予蒸馏水10ml/(kg·d)灌胃,济阴颗粒低、中、高剂量组分别给予济阴颗粒3.9、7.8、15.6 g济阴颗粒/(kg·d)灌胃,西药对照组给予戊酸雌二醇片0.105 mg/(g·d)灌胃,中药对照组给予坤宝丸10.5g/(kg·d)灌胃,每日灌胃1次,连续30天。免疫组织化学法检测卵巢细胞P53蛋白表达,荧光RT-PCR法检测卵巢细胞凋亡诱导因子(AIF)和核酸内切酶G(Endo-G)mRNA表达。结果与空白对照组比较,模型组卵巢细胞P53蛋白表达及AIF、Endo-G mRNA表达均升高(P<0.01),而济阴颗粒各剂量组均能降低卵巢细胞P53蛋白、AIF mRNA与Endo-G mRNA表达(P<0.01)。济阴颗粒低剂量组下调P53蛋白最显著,而高剂量组下调AIF mRNA作用最显著(P<0.01)。结论济阴颗粒可抑制Caspase非依赖性细胞凋亡通路,从而抑制卵巢细胞凋亡,可能是其治疗绝经综合征的作用机制之一。

肝豆汤改良方对Wilson's病模型TX乳鼠神经元内Cyt C/Caspase信号通路的分子调控机制

目的:探讨肝豆汤改良方调控TX乳鼠神经元内细胞色素C(Cyt C)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)信号通路的分子靶点并观察其相应的调控机制。方法:本实验乳鼠神经元通过原代方法分离培养所得,分为正常组、模型组、肝豆汤改良方组、丁苯酞组,正常组为正常DL乳鼠神经元,用完全培养基培养,模型组为TX乳鼠神经元,用10%空白兔血清培养,肝豆汤改良方组为TX乳鼠神经元,加入含体积浓度(5%,10%,15%,20%)肝豆汤改良方兔血清的培养基继续培养,丁苯酞组为TX乳鼠神经元,用10%含丁苯酞兔血清培养。采用原子吸收分光光度法检测不同浓度含肝豆汤改良方兔血清作用24 h后,对TX乳鼠神经元内微量元素的影响;流式细胞仪检测经肝豆汤改良方兔血清作用后活性氧(ROS)释放量的变化;蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测经含肝豆汤改良方兔血清作用后Cyt C,Caspase-9,Caspase-3蛋白的表达。结果:与模型组比较,含肝豆汤改良方兔血清可显著降低TX乳鼠神经元内铜、铁含量,增加锌含量(P<0.01)。流式细胞仪检测发现,含肝豆汤改良方兔血清较模型组可显著降低TX乳鼠神经元内ROS的释放量(P<0.01)。Western blot检测结果显示与模型组比较,含肝豆汤改良方兔血清可显著降低TX乳鼠神经元内Cyt C,Caspase-9,Caspase-3蛋白表达(P<0.01)。结论:肝豆汤改良方可能是通过促进过量铜排出而抑制神经元内Cyt C,Caspase-9,Caspase-3表达,从而减轻高铜对神经元的损伤作用。肝豆汤改良方可通过减少脑内铜含量,进而调控Cyt C/Caspase信号通路达到减轻高铜诱导的神经元损伤的治疗效果。

芪石升降归元颗粒对胃食管反流病大鼠的干预作用及可能作用机制

目的分析芪石升降归元颗粒对胃食管反流病(gastroesophageal reflax disease,GERD)大鼠的干预作用,并基于B细胞淋巴瘤2(B cell lymphoma 2,Bcl-2)/细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)/Caspase3通路探讨其作用机制。方法将42只SPF雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、西药组、中药组。除假手术组10只外,其余各组均采用食管支架植入术制作GERD大鼠模型。造模成功后,西药组予以枸橼酸莫沙必利分散片联合兰索拉唑肠溶片灌胃,中药组给予芪石升降归元颗粒灌胃,疗程均为14 d。干预结束后,采用苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠食管下段组织形态学变化;酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清中Bcl-2、Caspase3及Cyt C的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,real-time PCR)检测食管组织内Bcl-2 mRNA、Caspase3 mRNA、Cyt C mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测食管组织内Bcl-2、Caspase3、Cyt C蛋白表达水平。结果GERD模型大鼠精神状态差,活动及进食量减少,光镜下观察可见细胞排列紊乱,鳞状上皮增生,固有层乳头延伸,上皮细胞炎性浸润。经西药及芪石升降归元颗粒治疗后,大鼠精神状态佳,进食量及活动正常,光镜下观察可见细胞排列规整,鳞状上皮增生好转,无固有层乳头延伸,未见明显炎症细胞浸润。与假手术组比较,模型组食管组织中的Cyt C mRNA、Caspase3 mRNA及蛋白表达水平均升高(P<0.05,P<0.01,P<0.001);模型组血清Bcl-2表达量降低(P<0.001),Cyt C和Caspase3表达量升高(P<0.001,P<0.01)。与模型组比较,西药组食管组织中的Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.01,P<0.05),Caspase3 mRNA表达量降低(P<0.05);血清中Cyt C的浓度降低(P<0.001)。与模型组比较,中药组食管组织Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.05,P<0.001),Cyt C mRNA和Caspase3 mRNA及蛋白表达水平均降低(P<0.001);血清Bcl-2浓度升高(P<0.001),Cyt C和Caspase3浓度降低(P<0.05,P<0.001)。与西药组比较,中药组食管组织Bcl-2、Cyt C和Caspase3蛋白表达水平降低(P<0.001),Cyt C和Caspase3 mRNA表达水平降低(P<0.01,P<0.001)。结论芪石升降归元颗粒均可调控Bcl-2/Cyt C/Caspase3通路,抑制食管细胞凋亡,进而调节组织脏腑功能而有效干预GERD,且芪石升降归元颗粒效果优于枸橼酸莫沙必利分散片联合兰索拉唑肠溶片。

基于Caspase3通路探究敲低miR-6861-5p对乳腺癌细胞凋亡和侵袭的影响

目的探讨通过Caspase3通路分析敲低miR-6861-5p对乳腺癌细胞凋亡和侵袭的影响。方法购买乳腺癌细胞株T47D常规培养至对数时期,分装6个孔板1.5×106个孔中,随机分为3组,分为空白组、过表达组及敲低组,每组5个复孔,等待细胞贴壁生长分别用磷酸盐缓冲液(PBS)干预进行细胞培养和miR-6861-5p转染。过表达组转染si-6861-5p-NC质粒,敲低组转染si-6861-5p质粒,空白组细胞不进行处理,转染24 h后鉴定转染效率。比较干预24 h、48 h及72 h细胞增殖、凋亡及抑制率,细胞迁移、侵袭情况;检测细胞Caspase3通路蛋白表达状况。结果过表达组miR-6861-5p表达量为(2.42±0.86),空白组miR-6861-5p表达量为(1.52±0.43),敲低组miR-6861-5p表达量为(0.75±0.12),3组间比较,差异有统计学意义(F=4.440,P<0.05)。过表达组miR-6861-5p表达量高于空白组,差异有统计学意义(t=2.093,P<0.05);敲低组miR-6861-5p表达量低于过表达组,差异有统计学意义(t=4.300,P<0.05);敲低组miR-6861-5p表达量低于空白组,差异有统计学意义(t=3.857,P<0.05)。过表达组细胞增殖率、迁移数、侵袭数及MMP2蛋白表达量均高于空白组,细胞凋亡率、Bcl-2、Bax、Cyt-c及Caspase3蛋白表达量均低于空白组,差异均有统计学意义(均P<0.05);敲低组细胞增殖率、细胞迁移数、侵袭数及MMP2蛋白表达量低于空白组,细胞凋亡率、Bax、Bcl-2、Cyt-c及Caspase3蛋白表达量均高于空白组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论敲低miR-6861-5p可促进乳腺癌细胞凋亡,抑制细胞增殖、迁移及侵袭,其作用影响可能与Caspase3信号通路相关。