脑缺血后神经元Caspase-3mRNA表达的研究进展

脑缺血损伤过程中神经元存在两种死亡形式:坏死(necrosis)和凋亡(apoptosis).细胞的死亡形式取决于细胞类型及其受到的损伤的性质和强度.轻度、短时间的缺血刺激常表现为凋亡.凋亡是指细胞程序性死亡过程,涉及一系列基因的激活和其表达调控的改变.内源性凋亡调节基因的表达可能在决定缺血性神经细胞的生死命运中起重要作用.Caspase是涉及细胞凋亡的蛋白酶,参与缺血缺氧性脑损伤的病理过程.

益气明目丸对视网膜色素变性大鼠视网膜BaxmRNA、Caspase-3mRNA表达的影响

目的:观察益气明目丸对RCS大鼠视网膜BaxmRNA、Caspase-3mRNA表达的影响。方法:24只RCS大鼠随机分为3组,分别为:空白组、模型组、益气明目丸组。空白组:RCS(rdy+/+,p+/+)大鼠共8只,雌雄各4只,灌胃生理盐水;模型组:RCS(rdy-/,p-/-)大鼠共8只,雌雄各4只,灌胃生理盐水;益气明目丸组:RCS(rdy-/,p-/-)大鼠共8只,雌雄各4只,灌胃益气明目丸悬浊溶液。灌胃30天后,HE染色观察视网膜各层结构,RT-qPCR法及Western Blot法分别测定各组视网膜组织中BaxmRNA、Caspase-3mRNA的表达水平。结果:HE染色显示:益气明目丸组大鼠视网膜厚度明显较模型组大鼠视网膜增厚,视网膜色素上皮条带部分可见,部分外核层光感受器感觉纤毛层部分可见,光感受器细胞核数目较模型组多,外从状层、外核层、视杆视锥层较模型组结构清晰且增厚,RT-qPCR检测显示:益气明目丸组BaxmRNA、Caspase-3mRNA相对表达量明显低于模型组,差异有显著统计学意义(P <0.01),WB检测显示:益气明目丸组Bax蛋白、Caspase-3蛋白相对表达量明显低于模型组,差异有统计学意义(P <0.01)。结论:益气明目丸对RP视网膜的超微结构具有保护作用;益气明目丸可抑制视网膜上BaxmRNA、Caspase-3mRNA的表达,进而减轻视网膜感光细胞的凋亡,达到保护视细胞的目的。

2种锌源对体外培养胸腺细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3mRNA表达的影响

采用地噻咪松作为诱导剂,建立小鼠胸腺细胞体外培养的凋亡模型,培养基中分别补加1000μmol/L的硫酸锌或蛋氨酸锌,培养16h。测定细胞的凋亡率、DNA片段化以及Bcl22、Bax、Caspase23mRNA表达量。结果表明,地噻咪松显著提高体外培养腺细胞凋亡(P<0101),并上调Bcl22、Bax、Caspase233种基因的mRNA表达(P<0101)。硫酸锌和蛋氨酸锌对地噻咪松诱导的凋亡均有显著的抑制作用(P<0101),并对上述3种基因表达的上调有抑制作用(P<0101)。蛋氨酸锌处理的细胞凋亡率及Caspase23mRNA表达均高于硫酸锌处理,Caspase23mRNA表达量差异达到了显著水平(P<0105)。这表明,锌调控糖皮质激素诱导的细胞凋亡涉及到对基因转录水平的调节,2种锌源在一定程度上存在着差异。

针刺对乳腺增生大鼠乳腺组织Caspase-8mRNA和Caspase-3mRNA表达的影响

目的：探究针刺对乳腺增生大鼠乳腺组织中Caspase-8mRNA和Caspase-3mRNA表达的影响。方法：选取40只12周龄的健康雌性未孕SD大鼠（SPF级）,将其随机分为正常组、模型组、针刺组与三苯氧胺组,每组10只。造模后进行4周的干预治疗,HE染色后光镜下观察各组大鼠乳腺组织病理状态,PCR法检测各组大鼠乳腺组织Caspase-8mRNA和Caspase-3mRNA的表达情况。结果：HE染色显示模型组较正常组出现乳腺小叶增多、腺泡结构紊乱等组织增生现象,Caspase-8mRNA、Caspase-3mRNA表达水平明显降低（P〈0.01）;与模型组相比,治疗后的针刺组与三苯氧胺组组织增生的病理变化减轻,Caspase-8mRNA、Caspase-3mRNA表达水平明显增高（P〈0.01）。结论：针刺对乳腺增生大鼠乳腺组织中Caspase-8mRNA、Caspase-3mRNA表达有一定影响,可能通过干预凋亡通路对大鼠乳腺增生有调节和治疗作用。

PRELID3B基因mRNA在不同品种乌骨鸡肌肉组织中的表达规律研究

PRELID3B基因(PRELIP Domain Containing 3B)是调控乌骨鸡黑色素沉积的重要候选基因。为探讨PRELID3BmRNA在不同品种乌骨鸡肌肉发育中的表达情况,以丝羽乌骨鸡和余干乌骨鸡为材料,采用实时荧光定量PCR技术,检测出雏后不同发育时期胸肌和腿肌中PRELID3BmRNA的表达情况,并将基因表达量与肌肉色度L值进行相关性分析。结果发现,2个品种胸肌和腿肌的肌肉色度L值都随日龄的增长呈逐渐下降的趋势;2周龄后,2个品种的胸肌和腿肌L值出现差异(P<0.05)。丝羽乌骨鸡胸肌和腿肌PRELID3B mRNA表达变化趋势基本一致,都是前高后低;余干乌骨鸡胸肌和腿肌PRELID3BmRNA表达变化趋势不一致,其中胸肌在10周龄之后呈升高的趋势。14周龄之后,2个品种的胸肌和腿肌PRELID3BmRNA表达都出现差异(P<0.05)。品种间比较,14周龄之后胸肌PRELID3BmRNA表达在品种间出现差异(P<0.05);腿肌则是在2周龄、6周龄和14周龄时品种间出现差异(P<0.05)。肌肉色度L值与基因表达的相关性结果显示,2个品种的腿肌色度L值都与基因表达量呈负相关(P<0.05)。结果提示PRELID3B基因mRNA表达在不同品种乌骨鸡腿肌中的变化规律基本一致,基因表达量与腿肌色度变化具有相关性,PRELID3B基因可能在调控乌骨鸡腿肌黑色素沉积方面具有重要作用。

Survivin mRNA、Caspase-3mRNA在舌鳞癌中的表达及相关性

目的:检测舌鳞癌组织中凋亡抑制基因Survivin mRNA及Caspase-3 mRNA的表达,探讨其在舌鳞状细胞癌中的意义及相关性。方法:应用原位杂交方法检测10例正常舌黏膜、45例舌鳞状细胞癌标本中Survivin mRNA及Caspase-3 mRNA的表达情况。采用SPSS13.0软件包进行χ2检验及Fisher精确概率法检验,指标间关系采用Spearman等级相关分析。结果:舌鳞癌标本中Survivin mRNA阳性表达率为55.6%,正常对照组全部为阴性,两组差异显著(P<0.01);舌鳞癌标本中Caspase-3 mRNA阳性表达率为42.2%,明显低于正常对照组的80.0%(P<0.05);Survivin mRNA高表达及Caspase-3 mRNA低表达与舌鳞癌组织学分级、颈淋巴结转移相关(P<0.05);与TNM分期密切相关(P<0.01);经Spearman等级相关分析,两者之间呈显著负相关,r=-0.412,P=0.005。结论:在舌鳞癌中,Survivin mRNA参与了抑制Caspase-3m RNA的表达,且这种抑制作用与肿瘤的发生、发展相关。

芪黄煎剂对缺血-再灌注大鼠肠黏膜上皮细胞Bcl-2、Bax及Caspase-3、9 mRNA表达的影响

目的观察中药芪黄煎剂对缺血-再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)损伤大鼠肠黏膜上皮细胞凋亡基因Bcl-2、Bax mRNA表达和信号转导分子Caspase-3、9 mRNA表达的影响。方法 40只Wistar大鼠随机分为假手术组、I/R损伤组、谷氨酰胺(Gln)组和芪黄煎剂组,每组10只。假手术组管饲生理盐水3天后,仅腹壁切开而不行I/R手术;I/R损伤组与假手术组同样方法干预后,行I/R损伤手术;Gln组和QHD组分别管饲Gln和芪黄煎剂3天后,行I/R损伤手术。RT-PCR方法检测肠上皮细胞凋亡基因Bcl-2、Bax mRNA表达和凋亡信号转导分子Caspase-3、9 mRNA表达。结果与假手术组比较,I/R损伤组大鼠肠黏膜细胞内Bcl-2、Bax、Caspase-3、9 mRNA均明显增多,差异有统计学意义(P<0.05)。与I/R损伤组比较,Gln组、芪黄煎剂组Bcl-2 mRNA表达增多,Bax、Caspase-3、9 mRNA表达减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。与Gln组比较,芪黄煎剂组Bax mRNA表达更低(0.281±0.087vs0.350±0.053),Bcl-2/Bax值更高(1.648vs1.374),差异无统计学意义(P>0.05)。结论芪黄煎剂通过抑制细胞凋亡减轻I/R对大鼠肠黏膜上皮造成的损伤,其作用机制可能与增加Bcl-2 mRNA表达和降低Bax、Caspase-3、9 mRNA表达有关。

补肾增效液对辐射损伤小鼠脾组织p53 mRNA及Caspase-3蛋白表达的影响

目的:研究以补肾填精为主的补肾增效液对辐射损伤小鼠p53 mRNA及Caspase-3蛋白表达的影响。方法:设正常对照组、模型组、中药高、中、低剂量组和阳性药组,共灌胃8天。灌胃7天后,除正常对照组外,其余各组以^(60)Coγ射线照射小鼠造成辐射损伤。造模1天后取脾检测。p53 mRNA表达的检测采用原位杂交法;Caspase-3蛋白表达检测采用免疫组化法。结果:运用病理图像分析系统分析,各用药组均能上调辐射后小鼠脾组织p53 mRNA的表达,且与模型组比较,差异具有非常统计学意义(P<0.01);各用药组能下调Caspase-3蛋白表达,其中,阳性药组、高剂量组和中剂量组与模型组比较,差异具有非常统计学意义(P<0.01)。结论:补肾增效液通过调控与DNA损伤密切相关的p53基因及相关Caspase-3蛋白的表达而促进辐射损伤的修复。

破裂颅内动脉瘤组织中Caspase-3 mRNA的表达与血管平滑肌细胞的凋亡测定

目的:检测破裂颅内动脉瘤组织中Caspase-3mRNA的表达及血管平滑肌细胞(VSMC)的凋亡。方法:采用透射电镜观察15例破裂颅内动脉瘤和6例正常脑血管组织中VSMC的凋亡。采用实时荧光定量RT-PCR方法检测上述2种组织中Caspase-3mRNA的表达。结果:颅内动脉瘤组织中VSMC呈明显的细胞凋亡改变,出现染色质边聚、胞核固缩、胞浆浓缩以及凋亡小体。破裂颅内动脉瘤组织中Caspase-3mRNA的ΔCt值为2.67±1.22,正常脑血管组织中为5.83±1.69,P<0.01,即破裂颅内动脉瘤组织中Caspase-3mRNA的表达是正常组织的8.94倍。结论:VSMC过度凋亡可能是颅内动脉瘤形成和破裂的重要机制;VSMC凋亡可能与Caspase-3基因表达水平的上调有关。

补阳还五汤对大鼠脑缺血半暗区Caspase-3 mRNA表达的影响

目的:探讨脑缺血损伤后补阳还五汤对半暗区Caspase-3mRNA表达的影响。方法:成年雄性SD大鼠,单纯随机分为正常对照组、模型对照组和高、低剂量组。栓线法建立局灶性脑缺血模型,半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定缺血半暗区Caspase-3mRNA的表达。结果:Caspase-3/β-actin正常对照组为0.53±0.05,模型组为0.59±0.16,高、低剂量组分别为0.54±0.20和0.55±0.12。缺血后半暗区Caspase-3mRNA表达较正常对照组显著升高,经统计学处理,差异有显著性意义(F=12.282,P<0.05),补阳还五汤能降低Caspase-3mRNA的表达(F=12.588和12.02,P<0.05),但高剂量组与低剂量组的作用差异无统计学意义(F=13.176,P>0.05)。结论:补阳还五汤能抑制局灶性脑缺血后半暗区的Caspase-3mRNA表达,抑制细胞凋亡,对缺血后脑组织具有保护作用。

维生素E缺乏对雏鸡脾脏淋巴细胞Caspase-3活性及Caspase-3 mRNA表达的影响

用低维生素E(VE)和添加不饱和脂肪酸的日粮饲喂雏鸡建立VE缺乏雏鸡模型,采用比色法和半定量RT-PCR法分别检测脾脏淋巴细胞Caspase-3活性及Caspase-3 mRNA的表达水平。结果显示,VE缺乏组雏鸡脾脏淋巴细胞Caspase-3活性和Caspase-3 mRNA丰度高于对照组,组间差异均极显著(P<0.01)。结果表明,Caspase-3活性及Caspase-3 mRNA丰度的改变,是VE缺乏雏鸡脾脏淋巴细胞凋亡的调控机制之一。

Survivin Caspase-3 mRNA在肾母细胞瘤中的表达及意义

目的 在大多数肿瘤组织中都发现了Survivin异常高表达现象 ,它直接抑制Caspase 3,这说明Survivin在肿瘤发生中具有重要作用。本文的目的在于探讨Survivin、Caspase 3表达与肾母细胞瘤发生发展的关系。方法 应用RT PCR技术检测Survivin、Caspase 3mRNA在 4 8例肾母细胞瘤、2 4例癌旁组织标本中的表达。结果 4 8例肾母细胞瘤组织中Survivin阳性表达率为 72 .9% (35 /48) ,在 2 4例肾母细胞瘤癌旁组织中未检测到Survivin的表达 ,肾母细胞瘤组织与癌旁组织之间Survivin表达阳性率差异有非常显著性 (P <0 .0 1) ;4 8例肾母细胞瘤组织中Caspase 3阳性表达率为 8.3% (4 /48) ,在 2 4例肾母细胞瘤癌旁组织中Caspase 3阳性表达率为 4 5 .8%(11/2 4 ) ,肾母细胞瘤组织与癌旁组织之间Caspase 3表达阳性率差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 Survivin在肾母细胞瘤组织中高度表达和Caspase 3在肾母细胞瘤中低表达可能与肾母细胞瘤的发生发展有关 ,与预后的关系有待进一步的探讨。

柴黄胃溃宁对肝郁脾虚证胃溃疡模型大鼠脑组织HSP70 mRNA和Caspase-3 mRNA表达的影响

目的:探讨柴黄胃溃宁对肝郁脾虚证胃溃疡大鼠脑组织中HSP70 mRNA和Caspase-3 mRNA基因表达的影响和可能的疗效机制。方法:采用多因素复合模拟中医病因结合乙酸法建立肝郁脾虚证胃溃疡大鼠模型,用HE染色法观察大鼠胃窦部溃疡组织的病理学改变,采用RT-PCR技术检测脑组织中HSP70mRNA、Caspase-3mRNA表达水平。结果:模型组大鼠脑组织中HSP70mRNA、Caspase-3mRNA表达明显升高,柴黄胃溃宁中剂量组和法莫替丁组HSP70mRNA的表达水平升高,Caspase-3mRNA的表达水平降低,而柴黄胃溃宁高剂量组结果相反。结论:柴黄胃溃宁对肝郁脾虚证胃溃疡模型大鼠神经系统有显著的调节作用,以中剂量效果最佳。

百草枯增加小鼠黑质细胞caspase-3 mRNA的表达及其酶活性

目的 探讨百草枯对C5 7bl/ 6小鼠黑质细胞caspase 3mRNA的表达及其活性的影响。 方法 应用RT-PCR技术检测C5 7bl/ 6小鼠暴露于百草枯不同时间后黑质细胞中caspase 3mRNA表达的变化 ,并采用比色法测定相应时间点黑质细胞的caspase 3酶的活性。 结果 C5 7bl/ 6小鼠暴露于百草枯后黑质细胞中caspase 3mRNA的表达明显增加 ,caspase 3酶的活性也相应地增加 ,这种增加与黑质细胞的凋亡相一致。结论 百草枯可诱导C5 7bl/ 6小鼠黑质细胞表达caspase 3mRNA ,增加caspase 3酶的活性 。

针刺对脑缺血再灌注模型大鼠海马caspase-3 mRNA表达的影响

目的:探讨针刺对脑缺血再灌注大鼠脑组织保护作用的机制。方法:参考Bederson6级5分法进行神经功能评分和用原位杂交技术检测脑缺血再灌注24h后大鼠海马caspase-3 mRNA的表达。结果:穴位针刺组较非穴位针刺组和模型组更显著的改善大鼠缺损的神经功能(P<0.05)。穴位针刺可以下调脑缺血再灌注大鼠海马caspase-3 mRNA的表达,与模型组、非穴组相比,差异有显著性(P<0.01)。结论:针刺能够改善脑缺血再灌注后大鼠的神经功能损伤,其作用机制可能是通过下调caspase-3的表达,抑制凋亡实现的。

曲美他嗪对大鼠局灶性脑缺血再灌注Bcl-2 mRNA、Caspase-3 mRNA表达的影响

目的观察曲美他嗪(TMZ)对大鼠局灶性脑缺血后神经细胞Caspase-3 mRNA、Bcl-2 mRNA表达的影响。方法成年健康Wistar大鼠45只,随机分为假手术对照组(n=5)、脑缺血再灌注组(n=20)、TMZ预处理组(n=20)。应用线栓法建立大脑中动脉闭塞再灌注模型。采用原位杂交方法检测脑组织Caspase-3 mRNA、Bcl-2m RNA表达的变化。结果Bcl-2 mRNA在缺血再灌注3h表达增强(P<0.05),6h显著增强(P<0.01),24h减弱(P<0.05),48h消失(P>0.05)。TMZ组的Bcl-2 mRNA表达量多于缺血再灌注组,差异有统计学意义(P<0.05)。Caspase-3 mRNA在再灌注3h表达增强(P<0.05),6h显著增强(P<0.01),24h更加明显(P<0.01),48h减弱(P<0.05)。TMZ组的Caspase-3 mRNA表达量显著少于缺血再灌注组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TMZ可能通过诱导Bcl-2的表达和抑制Caspase-3的生成而发挥抗凋亡作用。

锰对大鼠生精细胞Caspase-3 mRNA调控及支持细胞波形蛋白表达的影响

目的探讨锰对大鼠生精细胞Caspase-3 mRNA调控及支持细胞波形蛋白(vimentin)表达的影响。方法将正常雄性SD大鼠48只,随机分为1个对照组和2个染锰组,给予各组大鼠腹腔注射生理盐水和15mg/kg、30mg/kg氯化锰。分别染锰4周和6周,随机处死各组大鼠8只。应用末端脱氧核糖核酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)、原位杂交法和免疫组织化学链酶亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(SABC)法进行检测研究。结果 1.与空白对照组比较,15mg/kg、30mg/kg染锰组生精细胞凋亡指数(AI)均升高(P<0.05,P<0.01),Caspase-3 mRNA阳性细胞率均显著升高(P<0.01),支持细胞波形蛋白(vimentin)阳性细胞率均显著降低(P<0.01)。2.染锰剂量相同,染锰6周组与染锰4周组比较,生精细胞AI与Caspase-3 mRNA阳性细胞率均显著升高(P<0.01),支持细胞vimentin阳性细胞率均显著降低(P<0.01)。3.染锰时间相同,30mg/kgMnCl2组与15mg/kg MnCl2组比较,生精细胞AI与Caspase-3 mRNA阳性细胞率均显著升高(P<0.01),支持细胞vimentin阳性细胞率均显著降低(P<0.01)。4.各组大鼠生精细胞AI和Caspase-3 mRNA阳性细胞率呈正相关(r=0.842,P<0.01),与支持细胞vimentin阳性细胞率呈负相关(r=-0.859,P<0.01),各组大鼠生精细胞Caspase-3 mRNA阳性细胞率和支持细胞vimentin阳性细胞率呈负相关(r=-0.975,P<0.01)。结论染锰大鼠生精细胞Caspase-3 mRNA表达增加导致生精细胞凋亡增加;支持细胞vimentin表达下降;这可能是锰生殖毒性的重要分子机制之一。

托吡酯对电点燃癫痫大鼠海马Caspase-3 mRNA表达的影响

目的观察托吡酯(TPM)对杏仁基底外侧核电点燃癫痫大鼠海马半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)mRNA表达的影响.方法将双极电极插入大鼠左侧杏仁基底外侧核,给予慢性电刺激使大鼠达到点燃状态,观察其发作过程并记录脑电图.采用半定量RT-PCR法检测托吡酯治疗组和对照组电点燃大鼠海马组织的Caspase-3 mRNA表达.结果大鼠平均(13.50±3.99)次刺激达到点燃,记录到后发放时程在21 450～119 720 ms之间.电点燃大鼠海马Caspase-3 mRNA表达明显升高,托吡酯治疗组的Caspase-3 mRNA表达下调.结论在大鼠电点燃癫痫模型中,Caspase-3可能参与了点燃过程,托吡酯可抑制癫痫过程中神经元的凋亡.

黄体酮对大鼠局灶性脑缺血再灌注后大脑皮质神经细胞凋亡和Caspase-3 mRNA及蛋白表达的影响

目的观察黄体酮对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡与Caspase-3mRNA及蛋白表达的影响。方法用线栓法制作脑缺血再灌注损伤模型。采用PCR和Western blot技术分别对缺血区皮质Caspase-3 mRNA及蛋白表达情况进行测定。TUNEL染色检测神经元的凋亡情况。结果与脑缺血再灌注组和溶剂对照组相比,黄体酮治疗组大鼠脑部Caspase-3 mRNA及蛋白的表达水平明显减少(P均<0.05),神经元的凋亡数量显著下降(P均<0.05)。结论黄体酮能显著减少Caspase-3 mRNA及蛋白表达,抑制神经细胞凋亡,对脑缺血再灌注损伤发挥保护作用。

汉黄芩素对胶质瘤U251细胞Surviv inmRNA及Caspase-3 mRNA表达的影响研究

目的探讨汉黄芩素对胶质瘤U251细胞SurvivinmRNA及Caspase-3 mRNA表达的影响。方法 192株人胶质瘤U251细胞株分别用汉黄芩素(96株)、替莫唑胺(TMZ)(48株)处理,留取48株作为空白对照组,半定量RT-PCR法检测Surviv inmRNA与Caspase-3 mRNA表达强度,并在3组之间进行对比分析。结果空白对照组Surviv inmRNA表达强度为(0.773±0.176)μM,显著高于汉黄芩素组的(0.382±0.087)μM及TMZ组的(0.408±0.092)μM(P<0.05);Caspase-3 mRNA表达强度为(0.097±0.043)μM,显著低于汉黄芩素组的(0.454±0.213)μM及TMZ组的(0.432±0.187)μM(P<0.05),汉黄芩组与TMZ组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论汉黄芩素可通过下调Surviv inmRNA的表达并上调Caspase-3 mRNA的表达起到有效诱导人胶质瘤U251细胞凋亡的作用。