SGLT2抑制剂达格列净对糖尿病肾病的保护机制研究

目的探讨SGLT2抑制剂达格列净(SGLT2i)对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)小鼠的作用,为临床治疗DN提供实验室依据.方法选用10周龄雄性db/db小鼠(n=21 DN模型)和10周龄雄性wt小鼠(n=20野生模型),随机分wt组(未治疗野生组)、wt+SGLT2i组(治疗野生组)、db/db组(未治疗DN组)、db/db+SGLT2i组(治疗DN组).连续饲养12周,确定制成DN模型后,给予SGLT2i达格列净灌胃,8周后取材,行生化检查、病理、免疫组化、蛋白印迹及TUNEL染色.结果和wt组比较,db/db小鼠DN组血糖、肾质量/体质量比、血肌酐、24 h尿蛋白及尿微量白蛋白与肌酐的比值(UACR)均明显升高,而体质量明显降低(均P<0.05).与db/db组比较,db/db+SGLT2i达格列净组UACR、24 h尿蛋白、血肌酐及血糖水平明显降低,体质量也有所减轻(均P<0.05),但肾质量/体质量比值无明显变化.组织病理学结果显示:与wt组比较,db/db组肾小球鲍曼间隙缩小,肾小球基底膜增厚,系膜基质扩张,系膜细胞增生.与db/db组比较,db/db+SGLT2i达格列净组上述病理改变均减轻.透射电镜观察肾脏的超微结构结果显示:与wt组比较,db/db组肾小球基底膜增厚,膜滤过层结构不清,足细胞足突紊乱,间隙增宽,系膜基质增多.与db/db组比较,db/db+SGLT2i组的上述症状明显减轻,表明SGLT2i达格列净可以减轻db/db小鼠的肾脏损伤.与wt组比较,db/db DN组小鼠肾小管上皮细胞凋亡明显升高,与db/db组比较,db/db+SGLT2i达格列净组细胞凋亡明显降低(P<0.05).结论SGLT2i达格列净可减轻db/db小鼠的肾损伤;SGLT2i达格列净可减少db/db DN小鼠模型的细胞凋亡及ERS途径相关蛋白Caspase12蛋白的表达;SGLT2i达格列净对DN小鼠有保护作用,其可能的机制与改善ERS细胞凋亡途径有关.

未折叠蛋白反应参与小鼠急性肾缺血/再灌注损伤

目的探讨未折叠蛋白反应(UPR)在小鼠急性肾缺血/再灌注损伤中的作用。方法将C57B6小鼠分为正常、假手术组和0、4、12、24 h手术组(分别于术后0、4、12和24 h处死小鼠),留取各组小鼠的左侧肾脏。苏木精-伊红(H-E)、过碘酸雪夫反应(PAS)和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)染色观察各组肾脏组织学变化,Western印迹法和实时聚合酶链反应(PCR)检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和caspase12在各组小鼠肾组织中的表达。结果H-E、PAS染色可见24 h手术组的肾小管上皮细胞坏死明显,病变最重的部位为外髓外带近端小管,肾小管坏死评分为(2.930 0±0.131 1)分,显著高于其他组(P值均<0.01)。TUNEL染色可见24 h手术组的肾小管上皮细胞凋亡指数为(36.17±7.53)%,显著高于其他各组(P值均<0.01)。Western印迹法结果显示,12 h手术组的GRP78和caspase12蛋白水平显著高于其他各组(P值均<0.01)。实时PCR结果显示,4 h手术组的GRP78和caspase12 mRNA水平显著高于其他各组(P值分别<0.01、0.05)。结论在夹闭左侧肾动脉致急性肾缺血/再灌注损伤模型中,小鼠左侧肾脏组织学损伤显示再灌注后24 h最严重。GRP78和caspase12在再灌注后其mRNA和蛋白表达水平明显升高或激活,其变化早于组织学改变。提示UPR可能在急性肾缺血/再灌注损伤中发挥重要作用。