脐血中Caspase7蛋白在羊水量异常产妇中的表达

目的探讨Caspase7蛋白在羊水量异常和正常的产妇血清中的表达差异。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测30例羊水过少、30例羊水过多和30例羊水量正常产妇脐带血中Caspase7蛋白表达水平的情况,并加以分析。结果Caspase7蛋白在3组产妇血清中均有阳性表达。羊水过少组血清中Caspase7蛋白平均浓度(160.2±25.8ng/mL)比对照组高(142.9±18.4ng/mL),差异有统计学意义(t=2.99,P<0.05)。羊水过多组血清中Caspase7蛋白平均浓度(119.2±21.5ng/mL)比对照组低(142.9±18.4ng/mL),差异也有统计学意义(t=4.59,P<0.05)。结论羊水过少或过多产妇血清中Caspase7蛋白表达异常,提示其可能与羊水量异常的发生有关。

羊水过少对妊娠结局及胎盘组织中Cx43、Caspase7蛋白表达的影响

目的探讨羊水过少对母婴妊娠结局的影响,并检测胎盘组织中缝隙连接蛋白43(Cx43)、半胱氨酸肽酶7(Caspase7)蛋白阳性表达情况,分析羊水过少与Cx43、Caspase7蛋白表达之间的关系。方法选择本院2016年1月至2018年12月羊水过少的孕产妇110例作为研究组,选取同期羊水正常的产妇110例作为对照组。记录两组孕产妇围产期结局,观察新生儿不良结局情况,检测胎盘组织中Cx43、Caspase7蛋白表达水平。结果研究组的阴道顺产率(17.27%)显著低于对照组(56.36%)(P<0.05);研究组产妇的剖宫产率、产程异常发生率、新生儿不良结局总发生率分别为74.55%、16.36%、15.45%,显著高于对照组的37.27%、3.64%、5.45%(P<0.05)。研究组产妇胎盘Cx43蛋白阳性率及阳性评分分别为21.45%、(2.42±0.71)分,显著低于对照组的67.64%、(7.69±0.83)分,蛋白表达的阳性程度亦显著低于对照组(P<0.05)。研究组产妇胎盘Caspase7蛋白阳性率及阳性评分分别为65.64%、(7.69±0.83)分,显著高于对照组的18.73%、(2.42±0.71)分,蛋白表达的阳性程度亦显著高于对照组(P<0.05)。结论羊水过少产妇剖宫产率增加,产妇产程异常、新生儿不良结局总发生率上升;产妇胎盘Cx43蛋白表达下调,而Caspase7蛋白表达呈现上升趋势,可能与羊水过少有关。

温针灸对兔膝骨关节炎软骨中ASC、Caspase-1和P2X7蛋白表达的影响

目的 观察温针灸对膝骨关节炎(KOA)模型兔关节软骨组织中凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、嘌呤能离子通道型受体7(P2X7)表达的影响,研究温针灸治疗KOA的作用机制。方法 取40只雄性新西兰兔随机分为空白组、模型组、抑制剂组和温针灸组,每组10只。除空白组外,其余各组采用经典右后肢膝关节伸直位,用石膏管型固定4周制备兔KOA模型。造模成功后,各组给予相应干预措施。应用Lequesne MG评分量表评估兔膝关节状态改变与行为学改变,HE染色观察膝关节软骨病理形态学改变,免疫组织化学法和Western blot法检测软骨组织中ASC、Caspase-1、P2X7蛋白的表达,免疫荧光检测Caspase-1蛋白的表达。结果 造模前,各组实验兔Lequesne MG评分差异无统计学意义(P>0.05);造模后,与空白组相比,其余组Lequesne MG评分均上升(P<0.05);干预治疗后,与模型组比较,温针灸组和抑制剂组评分降低(P<0.05)。HE染色显示,空白组软骨表面结构完整,软骨细胞排列均匀;模型组软骨表面粗糙不平,软骨受损明显,软骨细胞形态大小不一,排列紊乱;抑制剂组和温针灸组软骨表面相对光滑、完整,软骨细胞分布较为均匀,软骨层结构相对清晰。与空白组比较,模型组Mankin’s评分升高(P<0.05);与模型组比较,温针灸组和抑制剂组Mankin’s评分降低(P<0.05)。免疫组织化学法、免疫荧光及Western blot检测结果显示,与空白组比较,模型组ASC、Caspase-1、P2X7的表达均升高(P<0.05);与模型组比较,温针灸组和抑制剂组ASC、Caspase-1、P2X7的表达均降低(P<0.05);温针灸组和抑制剂组相比,ASC、Caspase-1、P2X7表达差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 温针灸可减轻兔KOA软骨损伤,其机制可能与ASC、Caspase-1、P2X7表达降低及细胞焦亡抑制有关。

细胞角蛋白7在宫颈癌及癌前病变中的表达及临床意义

目的 探究细胞角蛋白7 (cytokeratin7,CK7)在宫颈癌及癌前病变中的表达及临床意义。方法 选取2017年1月至2023年4月在甘肃省妇幼保健院就诊疑似宫颈病变患者的存档病理蜡块及其相关的病历资料,其中包括正常宫颈鳞状上皮100例(正常组)、宫颈鳞癌100例(宫颈鳞癌组)、宫颈低级别鳞状上皮内病变(low-grade squamous intraepithelial lesions,LSIL) 100例(LSIL组)、宫颈高级别鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesions,HSIL) 100例(HSIL组)、宫颈腺癌50例(宫颈腺癌组)。使用免疫组织化学方法检测各组p16、Ki-67和CK7的表达情况,分析其对宫颈癌与癌前病变的诊断价值和对LSIL与HSIL的鉴别价值,并比较宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)Ⅱ级及CINⅢ级、高危型人乳头瘤病毒(high-risk human papillomavirus,HR-HPV)感染及非感染患者的p16、Ki-67和CK7表达情况。结果 五组p16、Ki-67和CK7阳性表达率比较差异均有统计学意义(均P<0.05);宫颈鳞癌组、宫颈腺癌组、HSIL组、LSIL组的p16、Ki-67和CK7阳性表达率均显著高于正常组(均P<0.05),宫颈鳞癌组、宫颈腺癌组的p16、Ki-67和CK7阳性表达率均显著高于HSIL组、LSIL组(均P<0.05),HSIL组的p16、Ki-67和CK7阳性表达率均显著高于LSIL组(均P<0.05);p16、Ki-67和CK7表达联合检测诊断宫颈癌及癌前病变的曲线下面积(the area under curve,AUC)均显著大于各指标单独检测(均P<0.05)。p16、Ki-67和CK7表达联合检测鉴别LSIL与HSIL的AUC均显著大于各指标单独检测(均P<0.05);CINⅡ级和CINⅢ级患者的p16、Ki-67和CK7阳性表达率比较差异均无统计学意义(均P>0.05);HR-HPV感染组的p16、Ki-67和CK7阳性表达率均显著高于非感染组(均P<0.05)。结论 CK7在宫颈癌及癌前病变患者中多呈现阳性表达现象,其与p16、Ki-67联合检测对宫颈癌及癌前病变具有诊断价值,且HR-HPV感染可促进CK7阳性表达。

蓝舌病新疆分离株VP7蛋白编码基因序列分析及一步法RT-PCR方法的建立

【目的】分析蓝舌病新疆分离株编码VP7蛋白S7基因保守序列,建立蓝舌病新疆分离株一步法RT-PCR方法,为新疆BTV分子流行病学调查及防控提供技术支持。【方法】采用二代测序技术获得新疆分离株S7基因序列,登陆GenBank对序列进行同源性Blast比对,用软件MEGA 5.0分析序列差异,根据蓝舌病新疆分离株编码VP7蛋白S7基因保守序列,运用软件Oligo6.0设计引物,对蓝舌病新疆分离株S7基因进行RT-PCR扩增,并验证该方法的特异性及敏感性。【结果】蓝舌病中国新疆分离株编码VP7蛋白S7基因序列与哈尔滨报道BTV分离株S7基因片段相似度较高为89.64%,与中国云南报道BTV-29型分离株、蒙古国BTV分离株S7基因片段相似度分别为87.49%和87.39%;与德国BTV分离株S7基因片段相似度为80.70%,其余均无同源性序列。中国新疆分离株S7基因片段序列与4条同源序列间存在26处核苷酸差异,9处氨基酸差异。【结论】建立的蓝舌病中国新疆分离株S7基因片段一步法RT-PCR方法具有良好的特异性,仅BTV中国新疆分离株扩增获得目的条带,该方法的敏感性为4.0×10^(3)copies/mL。

原钙黏蛋白7的结构和功能及与肿瘤的关系

钙黏附蛋白是一类钙依赖性的黏附分子,是一种细胞跨膜糖蛋白,介导正常组织、肿瘤组织中细胞-细胞间的黏附作用,原钙黏蛋白(protocadherin,PCDH)是其最大的亚家族。PCDH广泛分布于中枢神经系统,根据基因结构分为非成簇原钙黏蛋白和成簇原钙黏蛋白。PCDH7属于非成簇PCDHs家族,在人类基因组中定位于4p15,主要在人类的脑和心脏中表达,具有与经典钙黏附蛋白相似的作用,介导细胞之间的识别和黏附。在多种肿瘤中均检测到不同程度PCDH7的异常表达,PCDH7可能与肿瘤的增殖、侵袭、转移和预后相关。本文对PCDH7的基因结构和功能与肿瘤的关系作一综述。

子宫内膜癌组织中dMMR蛋白和miRNA Let-7表达水平及临床价值的研究

目的探讨子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)中微小RNA Let-7(miRNA Let-7)表达水平与DNA错配修复(DNA mismatch repair,dMMR)蛋白表达缺失的关系及意义。方法选取2016年5月~2022年12月在江苏省连云港市妇幼保健院行根治性手术切除的子宫内膜癌患者74例,分别用免疫组织化学法检测dMMR蛋白(包括MLH1,PMS2,MSH2,MSH6)的表达、实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miRNA Let-7的相对表达量,按照dMMR蛋白表达情况,将EC患者分为表达完整组(n=43)和表达缺失组(n=31),采用Logistic多因素回归分析与dMMR蛋白缺失相关的危险因素、绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估相关因素的预测价值。结果74例EC病例中,miRNA Let-7的表达水平在肌层浸润<1/2组显著高于肌层浸润≥1/2组,差异具有统计学意义(t=1.79,P=0.04);dMMR蛋白表达的缺失率为41.89%,且年龄<55岁组和miRNA Let-7低表达组(<0.715)患者中的dMMR蛋白缺失率高于≥55岁组和miRNA Let-7高表达组(≥0.715),差异具有统计学意义(χ2=3.92,4.50,均P<0.05);Logistic多因素回归分析结果显示miRNA Let-7表达水平是发生dMMR表达缺失的独立危险因素(P=0.012);Spearman相关分析表明,miRNA Let-7的表达水平与dMMR蛋白缺失呈明显负相关(r=-0.247,P=0.034);ROC曲线分析结果显示,miRNA Let-7表达水平对于预测EC患者中发生dMMR蛋白的缺失具有一定的价值,其AUC为0.737,最佳临界值为0.77,敏感度和特异度分别为0.651,0.806。结论子宫内膜癌患者中miRNA Let-7的表达水平与dMMR蛋白缺失具有相关性,也是发生dMMR蛋白缺失的危险因素,有望为预测dMMR的表达缺失提供帮助。

解耦联蛋白2对脓毒症腹腔感染大鼠心肌细胞凋亡、氧化应激及PKR/Caspase-11蛋白的影响

目的探究解耦连蛋白(UCP)2对脓毒症腹腔感染大鼠心肌细胞凋亡、氧化应激及链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)/含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-11蛋白的影响。方法按照数字随机法将80只大鼠分为假手术(Sham)组、盲肠结扎穿孔术(CLP)致脓毒症模型(CLP)组、单纯腺相关病毒(AAV)组、UCP2过表达手术(UCP2)组各20只。比较各组UCP2、PKR、Caspase-11蛋白表达、心肌组织病理学形态变化、心肌细胞凋亡指数、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果与Sham组相比,CLP组、AAV组和UCP2组心肌组织中UCP2、Caspase-11、MDA表达明显升高,心肌组织中PKR蛋白表达、SOD活性明显减少(P<0.05);与CLP和AAV组相比,UCP2组心肌组织中PKR蛋白表达、SOD活性得到明显升高,Caspase-11蛋白MDA含量显著降低(P<0.05)。Sham组心肌仅有少数视野偶见个别凋亡细胞,CLP组和AAV组细胞的凋亡指数明显增加(P<0.05);与CLP组相比,UCP2组心肌细胞凋亡指数明显降低(P<0.05)。结论过表达UCP2可抑制脓毒症腹腔感染大鼠心肌细胞凋亡,调控体内氧化应激平衡,同时对PKR/Caspase-11蛋白有一定的调控作用,增加PKR表达,抑制Caspase-11的表达。

结直肠癌组织中miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白的表达变化及其意义

目的观察结直肠癌(CRC)组织中miR-138-5p、miR-876-5p、DNA损伤结合蛋白1和CUL4相关因子7(DCAF7)蛋白的表达变化,并探讨其临床意义。方法CRC患者98例,均接受手术治疗,术中留取CRC组织和癌旁组织,采用Real-time PCR法检测CRC组织和癌旁组织中miR-138-5p、miR-876-5p,采用蛋白印迹法检测CRC组织和癌旁组织中DCAF7蛋白,分析miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量与CRC患者临床病理参数的关系。以CRC组织中miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量的中位数为临界值,将CRC患者分为miR-138-5p高表达组和miR-138-5p低表达组、miR-876-5p高表达组和miR-876-5p低表达组、DCAF7蛋白高表达组和DCAF7蛋白低表达组,并分析miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量与CRC患者预后的关系。结果CRC组织中miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量分别为1.36±0.29、1.41±0.36、0.59±0.19,癌旁组织中miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量分别为2.15±0.48、2.08±0.44、0.20±0.08,两者相比,P均<0.05。miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量与CRC患者是否合并淋巴结转移、TNM分期、浸润深度有关(P均<0.05)。miR-138-5p低表达组3年总体生存率为67.3%,miR-138-5p高表达组3年总体生存率为86.6%,两组相比,P<0.05。miR-876-5p低表达组3年总体生存率为66.7%,miR-876-5p高表达组3年总体生存率为85.1%,两组相比,P<0.05。DCAF7蛋白高表达组3年总体生存率为67.2%,DCAF7蛋白低表达组3年总体生存率为87.5%,两组相比,P<0.05。结论CRC组织中miR-138-5p低表达、miR-876-5p低表达、DCAF7蛋白高表达,miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量与CRC患者是否合并淋巴结转移、TNM分期、浸润深度有关。与miR-138-5p高表达、miR-876-5p高表达、DCAF7蛋白低表达的CRC患者相比,miR-138-5p低表达、miR-876-5p低表达、DCAF7蛋白高表达的CRC患者术后3年总体生存率低。

原发性肝癌组织CCR7、MCM10蛋白与临床病理特征及预后的相关性

目的 探讨原发性肝癌(PHC)组织趋化因子受体7(CCR7)、微染色体维持蛋白10(MCM10)与临床病理特征及预后的相关性。方法 选取2017年1月至2020年12月周口市中心医院90例PHC患者为研究对象,均行肝癌切除术,术中取肿瘤组织及癌旁正常组织。比较PHC不同组织CCR7、MCM10蛋白表达,χ^(2)检验分析CCR7、MCM10表达与临床病理特征的关系,Kaplan-Meier分析CCR7、MCM10蛋白表达与PHC患者预后的关系,Cox回归分析PHC患者预后影响因素,Kaplan-Meier分析CCR7、MCM10蛋白表达亚组与PHC患者预后的关系。结果 PHC患者肿瘤组织中CCR7、MCM10蛋白阳性表达分别为66.67%、75.56%,高于正常组织的23.33%、27.78%,差异有统计学意义(P<0.05);有淋巴结转移、血管侵犯患者癌组织中CCR7、MCM10蛋白阳性表达率(79.25%、94.34%,81.58%、89.47%)高于无淋巴结转移、血管侵犯患者(48.65%、48.65%,55.77%、65.38%),差异有统计学意义(P<0.05);Kaplan-Meier生存分析显示,CCR7、MCM10蛋白阳性表达患者的3 a生存率分别为39.66%(23/58)、41.54%(27/65),低于阴性表达患者的68.97%(20/29)、72.73%(16/22),差异有统计学意义(P<0.05);Cox回归分析显示,淋巴结转移(95%CI:1.129~3.025)、血管侵犯(95%CI:1.463~3.147)、CCR7蛋白(95%CI:1.407~3.524)、MCM10蛋白(95%CI:1.384~3.441)均为PHC患者预后的独立危险因素(P<0.05);Kaplan-Meier分析显示,CCR7蛋白阳性+MCM10蛋白阳性亚组预后最差,CCR7蛋白阴性+MCM10蛋白阴性亚组预后最好,各亚组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 PHC组织CCR7、MCM10蛋白表达与临床病理特征及预后相关,二者均阳性表达是预后不良的危险因素,可作为临床评估病情、预测预后的辅助指标,并对临床防治具有一定指导意义。

MMP9、AEG-1及EphA7蛋白在中耳鳞癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、星形细胞提升基因-1(AEG-1)、络氨酸蛋白激酶受体A7(EphA7)蛋白在中耳鳞癌组织中的表达及其意义。方法选取65例中耳鳞癌患者作为研究对象,均行手术治疗,术中采集癌组织及癌旁正常组织送检,检测MMP-9、AEG-1、EphA7蛋白表达情况,比较癌组织与癌旁正常组织内上述表达差异;并分析MMP-9、AEG-1、EphA7蛋白表达与年龄、性别、肿瘤分期、淋巴结转移、分化程度等病理特征的关系。结果癌组织内MMP-9、AEG-1、EphA7蛋白阳性表达率高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05);MMP-9、AEG-1、EphA7蛋白阳性表达患者Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移占比高于阴性表达患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论MMP-9、AEG-1、EphA7蛋白在中耳鳞癌组织内呈高表达状况,且其表达与肿瘤分期、淋巴结转移关系密切,或可作为临床治疗的新靶点。

土槿皮乙酸通过P53和caspase蛋白抑制人乳腺癌细胞MCF-7生长机制研究

MCF-7细胞是caspase 3功能缺失的乳腺癌细胞,本研究结果发现土槿皮乙酸(PAB)可激活caspase 3的上游蛋白caspase 8和caspase 9来诱导细胞凋亡,同时PAB通过P53蛋白诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡。本试验结果为进一步阐明PAB抗乳腺癌奠定了基础。

骨唾液酸蛋白对Caspase介导的RAW264.7细胞凋亡的抑制作用

目的:探讨骨唾液酸蛋白(BSP)对半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)介导破骨细胞前体RAW264.7凋亡中所起的作用。方法:培养破骨细胞前体RAW264.7,加信号通路相应抑制剂和(或)BSP处理后,用Caspase3/7/8/9检测试剂盒检测细胞Caspase3/7/8/9的活性,用Co-IP检测Caspase-8与整和素ανβ3是否存在相互作用。结果:BSP处理后RAW264.7细胞的Caspase-3/8/9活性下降,显著抑制了RAW264.7细胞的凋亡;而Caspase-8活性与Caspase-3活性存在正相关关系;且Caspase-8与整合素αvβ3存在相互作用。结论:BSP对RAW264.7细胞的抗凋亡作用主要通过调节外源性细胞凋亡途径来实现,并且由Caspase-8引起的细胞凋亡可因BSP与αvβ3的相互结合而抑制。

基质金属蛋白酶7在肝癌细胞迁移及免疫细胞浸润中的作用与预后价值

目的评估基质金属蛋白酶7(MMP7)在肝癌细胞迁移及免疫细胞浸润中的作用及预后价值。方法分别构建下调或上调靶基因MMP7的MMP7_siRNA、pMMP7转染肝癌细胞株(MHCC97H)。采用RT-qPCR、Western Blot分别检测细胞中靶基因mRNA及蛋白的表达水平。扫描电镜和Transwell小室实验分别观察细胞伪足和迁移能力的变化,并采用生物信息学的方法,在TCGA、TIMER数据库分析MMP7与免疫细胞及肝癌患者免疫浸润评分之间的相关性,并进一步研究MMP7与肝癌患者预后的相关性。相关性分析采用Spearman方法。Sanger Box在线工具评估MMP7在肝癌总体生存期、疾病特异性生存期方面的意义。Kaplan-Meier法绘制生存曲线,Log-rank检验评估不同组样本之间的预后差异。结果构建的MMP7_siRNA、pMMP7转染MHCC97H细胞后均能有效下调或上调靶基因MMP7的表达,在MHCC97H细胞中MMP7被干扰后细胞伪足明显减少,并且变短,但是过表达MMP7之后细胞表面丝状伪足数量明显增多,并且伪足长度变长,放射状排列。Transwell小室结果发现,MMP7_siRNA2能够显著降低细胞迁移能力(P<0.05),而转染pMMP7后,细胞迁移能力显著增加(P<0.05)。MMP7的表达与B淋巴细胞(r=0.37)、CD4+T淋巴细胞(r=0.40)、中性粒细胞(r=0.49)、巨噬细胞(r=0.49)、树突状细胞(r=0.47)显著相关(P值均<0.05)。在TCGA数据库中,基于总体生存期最佳截断值将肝癌患者分成MMP7高表达组(n=267)和MMP7低表达组(n=146),结果发现,MMP7高表达组的总体生存期明显低于MMP7低表达组(P<0.05);基于疾病特异性生存期最佳截断值将肝癌患者分成MMP7高表达组(n=257)和MMP7低表达组(n=145),结果发现,MMP7高表达组的疾病特异性生存期也低于MMP7低表达组(P<0.05)。结论MMP7促进了肝癌细胞的迁移,并在免疫细胞浸润中发挥主要作用,MMP7的表达也与肝癌的预后具有明显相关性。

骨形态发生蛋白-7对大鼠脑缺血再灌注后Caspase-3表达的影响

目的观察骨形态发生蛋白-7(BMP-7)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤神经细胞凋亡的影响及其机制。方法将40只SD雄性大鼠随机分为实验组、对照组和假手术组,采用改良线栓法制作大脑中动脉栓塞缺血再灌注(MCAO/R)模型,实验组在缺血2h再灌注后尾静脉注射BMP-7(0.1mg/kg)250μl,对照组和假手术组尾静脉注射等量生理盐水,运用Bederson评分法进行神经功能缺失评分。再灌注24h后将大鼠处死,采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法观察梗死灶范围,并计算梗死灶体积占半球体积的百分比;HE染色观察脑组织病理变化,原位缺口末端标记法(TUNEL)计数神经元凋亡数量,免疫组织化学染色观察缺血脑组织内Caspase-3表达。结果 BMP-7组大鼠Bederson评分(1.7±0.5)比对照组(2.7±0.5)明显降低(t=4.66,P<0.01),脑梗死体积百分比(7.6±1.4)比对照组(22.3±4.5)明显降低(t=6.98,P<0.01)。与对照组相比,HE染色显示BMP-7组大鼠缺血侧大脑皮质脑组织损伤明显减轻。BMP-7组缺血侧大脑皮质、纹状体及海马TUNEL阳性细胞数(分别为3.6±0.6、7.4±1.1、5.0±0.7)明显低于对照组同一区域(分别为13.4±1.1、17.8±1.5、15.4±1.1,P<0.01)。BMP-7组缺血侧大脑皮质、纹状体及海马Caspase-3阳性细胞数(分别为7.6±0.9、5.8±0.8、10.6±1.1)明显低于对照组同一区域(分别为15.4±0.6、14.0±1.2、17.2±0.8,P<0.01)。结论 BMP-7可通过下调Caspase-3表达而抑制大鼠脑缺血再灌注损伤引起的细胞凋亡,起到神经保护作用。

骨形态发生蛋白7通过下调Ajuba减轻糖尿病肾病大鼠肾纤维化

目的:探讨在糖尿病肾病(DKD)大鼠模型中,骨形态发生蛋白7(BMP7)是否通过下调Ajuba水平,降低Yes相关蛋白1(YAP1)的表达,进而减轻细胞外基质(ECM)沉积从而减轻DKD大鼠肾组织纤维化程度。方法:18只SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病组(DM组)和DM+过表达BMP7腺相关病毒组(DM+rAAVBMP7组),每组6只。采用尾静脉注射55 mg/kg链脲佐菌素(STZ)建立DM大鼠模型。NRK-52E细胞分为正常糖组、高糖(HG)组和HG+rhBMP7组。HE和天狼星红染色观察大鼠肾皮质病理形态学变化;免疫组织化学染色检测肾皮质Ajuba、YAP1的表达部位;Western blot法检测大鼠肾皮质及NRK-52E细胞中BMP7、Ajuba和YAP1、Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)和纤维连接蛋白(FN)的蛋白表达水平;RT-qPCR检测大鼠肾皮质Ajuba和YAP1 mRNA的表达水平。结果:生化指标检测显示DM组大鼠血糖、血肌酐、甘油三酯、总胆固醇及24 h尿蛋白水平较NC组显著升高(P<0.05),尿肌酐较NC组显著降低(P<0.05);与DM组相比,DM+rAAV-BMP7组大鼠血肌酐、24 h尿蛋白定量水平、甘油三酯和总胆固醇显著降低(P<0.05),尿肌酐显著升高(P<0.05);病理染色显示DM组肾间质出现炎症细胞浸润及胶原纤维沉积,肾小管萎缩且排列紊乱,DM+rAAV-BMP7组的病理变化较DM组显著改善;免疫组化结果显示在肾皮质中Ajuba和YAP1主要表达于细胞质和细胞核,且在DM组高表达,但DM+rAAV-BMP7组其表达则显著降低;Western blot结果显示DM组或HG组中FN、Col-Ⅲ、Ajuba和YAP1的蛋白水平上调(P<0.05),但在DM+rAAV-BMP7组中上述蛋白表达水平又显著降低(P<0.05);RT-qPCR结果显示DM组Ajuba、YAP1的mRNA水平较NC组显著上升(P<0.05),DM+rAAV-BMP7组Ajuba、YAP1的mRNA水平较DM组又显著降低(P<0.05)。结论:过表达BMP7可减轻DKD大鼠的肾纤维化,其机制可能与下调Ajuba,减少YAP1的表达,从而抑制了ECM的沉积有关。

白花蛇舌草对Renca肾癌细胞模型小鼠凋亡相关蛋白Fas、caspase3及caspase7表达影响

目的探讨中药白花蛇舌草对Renca肾癌细胞模型小鼠凋亡相关蛋白Fas、caspase3及caspase7表达的影响。方法选取BALB/C小鼠120只,随机分为正常对照组、模型对照组、白细胞介素组、白花蛇舌草组,各30只,雌雄各半。除正常对照组外,各组均建立肾癌模型,并给予相应的药物治疗。观察所有小鼠的肿瘤体积及重量、抑瘤率,对Fas、Fas L、caspase3及caspase7蛋白表达水平进行检测。结果与模型对照组比较,白花蛇舌草组、白细胞介素组小鼠的肿瘤体积、瘤体重量较低,抑瘤率较高,Fas阳性表达率及Fas蛋白表达较高,Fas L阳性表达率及Fas L蛋白表达较低,caspase3、caspase7阳性表达率及蛋白表达水平较高,差异均有统计学意义(P<0.05)。其中白花蛇舌草组以上指标均优于白细胞介素组(P<0.05)。结论白花蛇舌草能够明显促进肾癌模型小鼠凋亡相关蛋白Fas、caspase3及caspase7表达,抑制Fas L蛋白表达,提高抑瘤率。

甲胎蛋白与Caspases3在Huh7肝癌细胞中共表达的意义

目的:确定Caspases3与甲胎蛋白(AFP)共表达于Huh7细胞中,为肝癌的治疗提供新思路。方法:取对数期Huh7肝癌细胞,提取总RNA,经反转录成cDNA,经PCR扩增,并行琼脂糖电泳检查、照相。结果:Caspases3与AFP共表达于Huh 7肝癌细胞中。结论:其于此理论提出了治疗肝癌的新思路。

猪细小病毒7型VP2蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

为了表达猪细小病毒7型(PPV7)VP2蛋白(由Cap基因编码)并制备其多克隆抗体,试验从GenBank数据库中下载PPV7 Cap基因序列,选择不同毒株的高频序列作为目的基因序列,使用T4 DNA连接酶将目的基因与pET-32a表达载体连接,将连接产物转化至DH5α感受态细胞中,并使用IPTG对重组菌进行诱导,对表达的重组蛋白进行可溶性分析与纯化并通过Western-blot检测重组蛋白的反应原性,用纯化后的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体并分别通过间接ELISA方法、Western-blot检测多克隆抗体的效价及其与重组蛋白的反应性。结果表明:诱导后的重组菌在56 ku处出现明显条带,重组蛋白主要以包涵体的形式表达;纯化后的重组蛋白为单一条带,质量浓度为0.46 mg/mL,能与His标签抗体特异性结合;制备的多克隆抗体的效价为1∶51200,能与重组蛋白特异性结合。说明PPV7 VP2蛋白获得了成功表达,该蛋白具有良好的反应原性和免疫原性,所制备的多克隆抗体效价较高。

甲胎蛋白对人肝癌Bel 7402细胞caspase信号传递及耐受TRAIL的影响

目的研究甲胎蛋白(AFP)对人肝癌Bel 7402细胞内caspase信息通路信号传递的影响,以及对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导肝癌细胞凋亡的对抗作用。方法激光共聚焦显微镜观察AFP与caspase-3、caspase-8在Bel 7402细胞内的共定位;免疫共沉淀(Co-IP)技术研究AFP与caspase-3、caspase-8的相互作用;RNA干扰(RNAi)技术封阻AFP表达,并用Western blotting检测RNAi干扰肝癌Bel 7402细胞内AFP表达的效果;用蛋白酶活性比色法检测AFP对肝癌细胞caspase-3、caspase-8活性的影响;MTT法分析干扰AFP表达30 h后再给予TRAIL(2 nmol/L)处理24 h,Bel 7402细胞的生长情况,并用荧光显微镜观察经TRAIL处理后肝癌细胞的凋亡状况。结果共聚焦显微镜观察发现AFP、caspase-3、caspase-8主要表达于Bel 7402细胞的细胞质,发现AFP能与caspase-3共定位于细胞质,但与caspase-8在细胞质的共定位可能性很小;Co-IP技术研究发现AFP能与caspase-3结合,但不能与caspase-8结合;2 nmol/L剂量的TRAIL单独处理Bel 7402细胞并不能显著改变caspase-3活性,但能提升caspase-8活性,而用全反式维甲酸(ATRA)40μmol/L加TRAIL(2 nmol/L)处理时,则能提高Bel 7402细胞caspase-3活性;干扰AFP表达后,单独用TRAIL(2 nmol/L)也能激活caspase-3,而干扰AFP表达前后对caspase-8活性没有显著性改变;MTT分析发现,2 nmol/L剂量的TRAIL对Bel 7402细胞的生长并没有显著性抑制作用,但是干扰AFP表达后TRAIL(2 nmol/L)能明显抑制Bel 7402细胞生长(抑制率为48.4%);荧光显微镜观察表明,干扰AFP表达后TRAIL(2 nmol/L)能诱导Bel 7402细胞凋亡。结论AFP选择性抑制caspase-3活性是阻断人肝癌Bel7402细胞内凋亡信息传递的重要机制,也是AFP抵抗TRAIL诱导肝癌细胞凋亡的关键环节。