丹参预处理对肝脏缺血再灌注损伤后磷酸化真核生物翻译起始因子2α和caspasel2的影响

目的观察丹参预处理对肝脏缺血再灌注损伤后磷酸化真核生物翻译起始因子2d（p-elF-2a）和caspasel2表达的影响。方法将80只Wistar大鼠按随机数字表法分成正常对照组5只，假手术组、缺血再灌注组和丹参预处理组各25只，后3组大鼠再根据缺血再灌注时限（0、3、12、24和72h）分为5个亚组，每组5只。采用动脉夹钳夹肝蒂45min后，使血液复流的方法制备大鼠缺血再灌注损伤模型。正常对照组大鼠不做处理；假手术组仅解剖肝门不钳夹肝蒂；丹参预处理组大鼠在肝血流阻断前30min经尾静脉注入丹参注射液6ml／kg；假手术组和缺血再灌注组大鼠则在肝血流阻断前30min经尾静脉注入等量生理盐水。采用Westernblot检测各组大鼠肝组织中p-eIF-20α和caspasel2蛋白的表达，HE染色观察各组大鼠同期肝组织的病理形态学变化。多组间比较采用单因素方差分析，组间比较方差齐采用LSD法，方差不齐采用Games-Howell法。结果正常对照组大鼠肝组织中p-eIF-20α蛋白的相对表达量为0．296±0．038，假手术组在缺血再灌注0、3、12、24和72h分别为0．304±0．048、0．298±0．038、0．272±0．042、0．266±0．076和0．296±0．043，两组比较，差异无统计学意（P〉0．05）。缺血再灌注组大鼠肝组织中p-eIF-2α蛋白的相对表达量在缺血再灌注0h为0．310±0．034，与正常对照组和假手术组同时相点比较，差异无统计学意义（F=0．15，P〉0．05）；在缺血再灌注3、12、24h，p-eIF-2α蛋白的相对表达量分别为0．386±0．021、0．710±0．034和0．474-4-0．017，与正常对照组和假手术组同时相点比较，差异有统计学意义（F=11．90，211．52，25．15，P〈0．05）；至缺血再灌注72h，p-eIF-2α蛋白的相对表达量为0．336±0．043，基本回落至正常对照组和假手术组同时相点水平（F=1．57，P〉0．05）。丹参预处理组大鼠肝组织中p-eIF-2α蛋白的相对表达量在缺血再灌注0、12、24和72h分别为0．278±0．044、0．800±0．079、1．056±0．125、0．736±0．087和0．442±0．047，丹参预处理组在缺血再灌注3、12、24、72h明显高于缺血再灌注组同时相点水平（P〈0．05）。正常对照组大鼠肝组织中easpasel2蛋白的相对表达量为0．983±0．003，假手术组在缺血再灌注0、3、12、24和72h分别为0．974±0．004、0．9834-0．005、0．985±0．003、0．981±0．004和0．978±0．004，两组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。缺血再灌注组大鼠肝组织中caspasel2蛋白的相对表达量在缺血再灌注0h开始上升为1．018±0．076，但与正常对照组和假手术组同时相点比较，差异无统计学意义（F=1．43，P〉0．05）；在缺血再灌注3h明显升高为2．056±0．067，12h达到峰值为2．804±0．050，24h仍处于相对高水平为1．882±0．037，72h有所下降为1．282±0．066，与正常对照组和假手术组同时相点比较，差异均有统计学意义（F=1290．69，6490．84，2898．71，103．61，P〈0．05）。丹参预处理组肝组织中caspasel2蛋白的相对表达量在缺血再灌注0、3、12、24、72h分别为0．998±0．056、1．442±0．066、1．990±0．068、1．364±0．056和0．962±0．054，缺血再灌注3、12、24、72h均明显低于缺血再灌注组同时相点（P〈0．05）。病理形态学检测结果显示：正常对照组和假手术组大鼠肝组织肝小叶结构基本完整，肝细胞连续成索，胞核大而圆；肝缺血再灌注组大鼠肝组织可见肝小叶变形，细胞体积变小，细胞核浓缩，部分出现片状坏死；丹参预处理组大鼠肝细胞肿胀，出现轻微的点状坏死。结论丹参可能通过上调p-eIF-2α的水平稳定内质网内环境，减轻经内质网细胞凋亡途径中caspasel2的表达，在肝脏缺血再灌注损伤期发挥肝脏保护作用。

反式白藜芦醇对Aβ_(25-35)致痴呆大鼠海马caspase12的影响

目的观察反式白藜芦醇(TR)对β淀粉样蛋白(Aβ25-35)致痴呆大鼠海马caspase12 mRNA和蛋白表达的影响,补充说明TR抗痴呆的作用机制。方法大鼠随机分为五组:假手术组、阳性对照组、模型组、低剂量组、高剂量组,每组9只。在大鼠海马给予Aβ25-35造模结束后连续灌胃15 d每日1次,阳性对照组给予多奈哌齐1mg/kg,低剂量给予TR10mg/kg,高剂量TR40mg/kg,假手术组和模型组给予同体积的生理盐水。第15天时处死大鼠,免疫组化及Western blot检测海马caspase12蛋白表达,实时定量PCR检测海马caspase12 mRNA的表达。结果大鼠注射Aβ25-35后,模型组海马caspase12蛋白和mRNA表达明显高于假手术组(P<0.01)。TR剂量依赖性地降低了大鼠caspase12蛋白表达和mRNA表达(P<0.05)。结论 TR抗Aβ25-35致痴呆大鼠的作用机制与抑制海马caspase12基因表达有关。

电针对脑缺血-再灌注损伤大鼠运动功能的改善作用及机制研究

目的探讨电针对缺血性脑损伤后GRP78和caspase12的影响及对大鼠肢体运动功能修复的影响及机制。方法本实验使用改良线栓法制备大鼠脑缺血-再灌注模型(MCAO),对"百会"和"水沟"穴电针刺激,电针干预时间30min。SD大鼠随机分为对照组(sham组)、脑缺血-再灌注(3h、6h、12h、24h、72h、120h)组(I/R组)和再灌注时间点+电针组(I/R+EA组),每组5只,转棒式疲劳仪实验检测大鼠肢体运动功能的修复状况,RT-PCR检测caspase-12 mRNA的表达,免疫荧光实验检测GRP78蛋白的表达。结果 I/R+EA组(7d和14d)大鼠在转棒上停留时间与对应I/R组相比显著延长,差异有统计学意义(P<0.05),显示电针干预能促进大鼠运动功能的修复;I/R+EA组(3h、6h、12h、24h、72h和120h)缺血侧脑组织caspase12 mRNA的表达与对应I/R组相比显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),I/R+EA组(3h、6h、12h和24h)GRP78阳性细胞数与对应I/R组相比显著减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论电针干预能促进缺血性脑损伤大鼠肢体运动功能修复可能与阻断内质网介导的凋亡通路有关。

芪卫颗粒含药血清通过Caspase12途径减轻高糖环境下肾足细胞损伤的机制研究

目的:观察芪卫颗粒(QWG)含药血清对高糖环境下肾足细胞Caspase12凋亡途径的影响,探讨其保护足细胞损伤的作用机制。方法:将体外培养的条件永生系小鼠足细胞分为正常组,甘露醇组,模型组,QWG高、中、低浓度组。干预24h后,罗丹明-鬼笔环肽染色观察足细胞骨架结构;CCK8法、Annexin V-FITC/PI双染色法检测高糖环境下足细胞活力及凋亡情况;免疫细胞化学检测Caspase12及GRP78蛋白表达变化,Western blot检测足细胞标志蛋白Nephrin水平。结果:QWG含药血清能够增加高糖环境下足细胞活力(P<0.05,P<0.01),减少细胞凋亡,改善足细胞骨架结构,增加Nephrin表达(P<0.05),同时降低高糖环境下足细胞内质网应激GRP78及Caspase12蛋白水平(P<0.05,P<0.01)。结论:芪卫颗粒含药血清能够保护高糖环境下足细胞损伤,与内质网应激介导的Caspase12凋亡途径相关。

钙对母鼠氟暴露致仔鼠海马神经细胞凋亡的影响及分子机制

目的探讨不同饲料钙水平对母鼠氟暴露致仔鼠海马神经细胞凋亡的影响及分子机制。方法选用SD大鼠100只,75只雌鼠随机分为对照组(Con)、高氟组(F)、低钙组(LCa)、高氟低钙组(F+LCa)和高氟高钙组(F+HCa),饲养3月后,雌雄鼠合笼交配产仔鼠,取14、28日龄仔鼠2批,以海马CA3区神经细胞凋亡及凋亡信号通路相关蛋白Bcl-2、Caspase12和JNK表达水平为观测指标。结果母鼠氟暴露后,28日龄雌雄海马细胞凋亡指数显著(P<0.05)升高;14、28日龄雌雄仔鼠海马凋亡信号通路中Bcl-2蛋白表达均呈现极显著(P<0.01)下调,而14日龄雄仔鼠和28日龄雌仔鼠的Caspase12、14和28日龄雌雄仔鼠JNK蛋白表达水平均呈极显著(P<0.01)上调,14日龄雌仔鼠和28日龄雄仔鼠的Caspase12仅呈显著(P<0.05)上调;饲料低钙加剧母鼠氟暴露后仔鼠海马神经细胞凋亡,Bcl-2蛋白表达水平进一步下降,Caspase12和JNK蛋白表达水平进一步上升;而饲料高钙能够缓解母鼠氟暴露致仔鼠海马神经细胞的凋亡,逆转上述3者的蛋白表达水平;所检测的上述3个凋亡相关蛋白中,只有Caspase12表达水平呈性别和日龄差异,饲料钙对母鼠氟暴露致14日龄雄仔鼠和28日龄雌仔鼠Caspase12表达水平变化分别较同一日龄另一性别仔鼠的影响更大。结论海马凋亡信号通路中Bcl-2、Caspase12和JNK蛋白表达水平的变化可能是钙对母鼠氟暴露致子代大鼠大脑神经细胞凋亡影响的分子机制之一。饲料钙对母鼠氟暴露致14、28日龄仔鼠海马凋亡信号通路Caspase12表达水平变化的影响呈一定的性别差异,其机制有待于进一步阐明。