我国木薯花叶病毒病的发生危害及其病原鉴定

为明确国内木薯花叶病毒病(cassava mosaic virus disease)的危害情况、田间症状及其病原类型,本研究于2018—2019年调查了该病在国内的分布情况、症状特征及种质来源等数据,采集了8省(区)19地的384份样品,利用特异性引物检测2种木薯花叶病毒侵染引起的症状类型,并通过序列比对明确其病原特点。结果表明:木薯花叶病毒病已经在我国发生,种茎调运是该病远距离传播的主要原因;国内木薯花叶病毒病病原有斯里兰卡木薯花叶病毒株系(Sri Lankan cassava mosaic virus,SLCMV)和木薯普通花叶病毒(Cassava common mosaic virus,CsCMV)2种病毒,可分为单独感染、复合感染,其中SLCMV的检出率为21.1%,CsCMV的检出率为36.5%,SLCMV-CsCMV复合侵染率为15.1%;检测到的SLVMV与东南亚SLCMV序列同源性为99.4%~99.7%,检测到的CsCMV与拉丁美洲的CsCMV序列相似性为91%~96%。推测国内木薯花叶病毒病主要由2种病毒侵染引起,且普通花叶病毒有产生序列变异的可能性。

木薯普通花叶病毒侵染性克隆及GFP表达载体的构建与分析

木薯普通花叶病毒(Cassava common mosaic virus,CsCMV)(Potexvirus属,Alphaflexiviridae科)是新发现的一种潜在威胁木薯产业的病毒。本研究以前期在中国首次报道发现的CsCMV海南儋州Hainan-DZ分离物(CsCMV-HN)为基础,利用In-Fusion无缝克隆将CsCMV-HN全长cDNA片段克隆到植物表达载体pGreenII-35S上,构建其全长cDNA侵染性克隆pCsCMV-HN。通过农杆菌介导法将侵染性克隆pCsCMV-HN注射接种本生烟,接种10 d后开始出现褪绿及叶皱缩等症状,经RT-PCR检测和病症观察统计,侵染效率达100%。在此基础上,采用90 bp重复的CP亚基因组启动子(subgenomic RNA promoter,SGP)策略构建其携带gfp报告基因的病毒表达载体pCsCMV-GFP,农杆菌注射接种本生烟7~10 d后,在紫外灯下可观察到非接种叶有较强的绿色荧光,RT-PCR检测和Western blot分析表明pCsCMV-GFP可在本生烟上系统性表达GFP。本研究成功构建的CsCMV侵染性克隆及GFP表达载体将为进一步研究该病毒基因功能及致病机制提供借鉴。