猫过敏原白蛋白的克隆表达、纯化和免疫学特性鉴定

目的克隆、表达猫过敏原白蛋白(Fel d 2),并分析其过敏原活性。方法提取猫肝脏总RNA,逆转录合成cDNA,采用适宜引物进行PCR扩增目的基因,随后将其克隆到原核表达载体PET24a(+),在大肠杆菌中进行表达,镍亲和柱层析法提纯重组蛋白,Western blot检测其过敏原活性。结果序列分析表明所克隆白蛋白的序列由1 752 bp组成,编码584个氨基酸,与Genebank上的基因序列(NM 001009961)同源性为99.9%。SDS-PAGE显示表达的重组白蛋白Mr65 000。免疫印迹表明重组白蛋白具有与猫过敏原过敏病人血清IgE结合活性。结论表达的重组白蛋白具有与猫过敏患者血清IgE结合活性。