“生精散”对大鼠睾丸扭转复位后生精功能的影响及其机制研究

目的:研究"生精散"对大鼠睾丸扭转复位后生精功能的影响及其机制。方法:40只雄性SD大鼠随机分为假手术组(A组),对照组(B组),生精散组小(C组)、中(D组)、大剂量组(E组),每组8只。建立左侧睾丸扭转模型,B组自扭转前1 h开始给予每日灌胃生理盐水1 ml/d,C组(0.01 g/kg.d)、D组(0.02 g/kg.d)、E组(0.03 g/kg.d)分别按体重给予灌服生精散,连续35 d后处死大鼠,对大鼠进行精液常规分析,用RT-PCR检测大鼠精子CatSper1的表达。结果:a+b级精子百分率、精子存活率、精子浓度,CatSper1基因表达,与A组[(51.30±6.60)%、(69.01±7.20)%、(40.53±7.01)×106/ml、2.04±0.77]相比,B组[(15.30±6.30)%、(44.42±6.36)%、(21.00±6.14)×106/ml、1.12±0.50),均显著降低(P<0.01);与B组相比,D组[(51.63±3.20)%、(72.09±2.20)%、(55.30±5.90)×106/ml、2.11±0.20]、E组[(55.93±3.17)%、(73.01±2.11)%、(58.33±4.90)×106/ml、2.31±0.17]均显著升高(P<0.01),而C组[(18.02±0.23)%、(48.04±7.01)%、(22.87±2.10)106/ml、1.19±0.51]升高不明显(P>0.05)。结论:生精散可以促进睾丸扭转复位后精子质量的恢复,其机制可能与调节生精功能,提高精子细胞CatSper1基因的表达有关。

“益精方”提高小鼠精子特异性钙通道蛋白1及胞内Ca^(2+)浓度的表达

目的研究以"益精方"为代表的中药对小鼠精子尾部特异性钙通道蛋白(cation channel l Of sperm,CatSper1)及其胞内Ca^(2+)浓度的影响。方法将60只成年雄性昆明小鼠用分层法随机分为大剂量中药治疗组(large dose,LD)、小剂量中药治疗组(small dose,SD)、模型组(model group,MG)和对照组(control group,CG),按60 mg/kg体质量给MG、SD、LD组小鼠腹腔注射环磷酰胺,给CG组小鼠腹腔注射生理盐水,1次/d,连续5 d,第6天开始按体质量分别给SD和LD组小鼠灌服"益精方",剂量分别为人类常规用量(以60 kg为标准)的1倍和5倍,MG组小鼠给予等体积的生理盐水灌胃,1次/d,连续34 d,CG组小鼠常规饲养,然后对小鼠进行精液常规分析,并用RT-PCR法检测小鼠精子CatSper1的表达,流式细胞术检测精子胞内Ca^(2+)浓度。结果经"益精方"治疗后,LD组精子密度、前向运动精子百分率、精子活动率明显增加,与MG组比较有统计学意义(P<0.05);MG组小鼠精子密度,前向运动精子百分率,精子活动率显著低于CG组(P<0.05);MG组小鼠精子CatSper1的表达量虽然下降,但与CG组比较没有明显区别,治疗后LD组显著高于MG组(P<0.05),而与CG组比较没有明显区别;MG组小鼠精子胞内Ca^(2+)浓度明显减少,与CG组小鼠比较有统计学意义(P<0.05),而治疗后LD组小鼠胞内Ca^(2+)浓度显著改善,与MG组小鼠比较有统计学意义(P<0.05)。结论环磷酰胺腹腔注射可降低小鼠前向运动精子百分率、精子总活动率和精子密度,降低CatSper1表达量,大剂量"益精方"通过增加精子尾部CatSper1的表达,提高精子胞内Ca^(2+)浓度,进而增加精子前向运动率和活动率,并可以增加小鼠精子密度,从而达到治疗少弱精子症的目的。

精索静脉曲张病人精子特异性钙通道CatSper1 mRNA表达

目的探讨精索静脉曲张病人精子中精子特异性钙通道CatSper1mRNA的表达,及其与精索静脉曲张的关系。方法采用计算机辅助精液分析(CASA)系统,对77例精索静脉曲张病人的精液进行分析,根据WHO标准分为精索静脉曲张精液正常组(B组)28例,精索静脉曲张精液异常组(C组)49例;健康体检精液正常20例为A组,采用90/40Percoll非连续梯度离心法分离各组精液,半定量逆转录-聚合酶链反应技术检测3组精子CatSper1mRNA的表达。结果 C组CatSper1mRNA的表达与A、B组比较,差异有显著性(F=7.20,q=5.18、4.75,P<0.01);B组CatSper1mRNA的表达与A组比较,差异无显著性(P>0.05)。结论 CatSper1mRNA表达异常可能是导致精索静脉曲张病人精液质量下降从而不育的原因之一,此为精索静脉曲张病人不育的病因及治疗提供了新的研究方向。

真核表达CatSper1用于筛选有效siRNA的体外实验研究

目的构建pEGFP-N1-CatSper1重组质粒,在真核细胞中表达CatSper1,利用化学合成siRNA抑制小鼠CatSper1基因的表达,并筛选抑制效果最佳的siRNA序列。方法利用重组PCR克隆小鼠CatSper1全长cDNA,构建到真核表达载体中。生物信息分析软件校正结果,获得三条针对雄性小鼠CatSper1的siRNA序列,合成后分别与重组质粒pEGFP-N1-CatSper1共转染到小鼠成神经瘤N2a细胞株中,通过观察EGFP荧光强度、实时定量聚合酶链反应和WesternBlot等方法,分析干扰效果,筛选能显著降低N2a细胞中外源性CatSper1表达量的siRNA序列。结果成功克隆小鼠CatSper1基因的全长cDNA片段(2,061 bp),并构建到pEGFP-N1表达载体中。三个siRNA干扰组的CatSper1 mRNA和蛋白表达与空白对照组相比均下降,其中以靠近3′端的siRNA干扰作用更为明显,阴性对照siRNA组未引起CatSper1 mRNA和CatSper1蛋白表达明显变化。结论在小鼠神经瘤N2a细胞株中成功表达外源性CatSper1蛋白,并筛选出有效的siRNA,为深入研究CatSper1功能及用于避孕提供参考。

生精散对大鼠精子特异性钙通道的影响

目的:研究生精散对雷公藤多甙所制备弱精子症模型大鼠精子特异性钙通道(CatSper1)的影响。方法:60只雄性大鼠随机分为正常对照组、雷公藤多甙组、0.9%氯化钠溶液组及生精散小、中、大剂量组,每组10只。正常对照组每日灌胃0.9%氯化钠溶液1mL/d,其余各组雷公藤多甙20mg.kg-1.d-1,21d后0.9%氯化钠溶液组每日灌胃0.9%氯化钠溶液1mL/d,生精散小(0.01g.kg-1.d-1)、中(0.02g.kg-1.d-1)、大剂量(0.03g.kg-1.d-1)组分别按体质量给予灌服生精散,连续14d,进行精液常规分析,用RT-PCR检测大鼠精子CatSper1的表达。结果:与0.9%氯化钠溶液组比较,生精散各组精子密度、a+b级精子百分率、精子存活率均显著提高(P<0.01),生精散小剂量组CatSper1无明显变化,中、大剂量组CatSper1显著提高(P<0.01)。结论:雷公藤多甙可成功制备弱精子症大鼠模型,中剂量、大剂量生精散可以通过提高CatSper1基因含量,提高精子密度、a+b级精子百分率及精子存活率,从而达到治疗弱精子症的目的。

"促育生精方"对环磷酰胺致大鼠不育模型CatSper1基因和CatSper2基因的影响（英文）

目的:研究"促育生精方"对精子特异性钙通道蛋白Cat Sper1、Cat Sper2表达的影响。方法:采用Real-time PCR法检测Cat Sper1 m RNA、Cat Sper2 m RNA在各组大鼠(模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组、空白对照组)精子中的表达;用Western blot检测各组Cat Sper1蛋白,Cat Sper2蛋白的表达。结果:成功建立大鼠不育模型。Cat Sper1 m RNA、Cat Sper2 m RNA表达量为:中、高剂量组显著高于模型组(P<0.05)。Cat Sper1、Cat Sper2蛋白表达量:中、高剂量组显著高于模型组(P<0.05)。结论:促育生精方能有效提高少弱精症模型大鼠精子特异性钙通道Cat Sper1、Cat Sper2基因及其蛋白的表达。