生地黄免疫抑制活性部位HPLC指纹图谱研究

目的:研究河南省道地药材生地黄免疫抑制活性部位HPLC指纹图谱。方法:采用高效液相色谱法,迪马Platisil-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱,检测波长为210 nm,流速为1.0 mL/min,柱温为30℃。结果:对10批生地黄免疫抑制活性部位的指纹图谱进行了相似度比较,标定共有峰18个,其中5个色谱峰成分已指认,相似度在0.9以上。结论:建立了生地黄免疫抑制活性部位HPLC指纹图谱,为地黄进一步的药效学研究奠定了基础。

地黄不同提取部位HPLC指纹图谱实验研究

目的 :测试干地黄不同提取部位对大鼠尿样HPLC指纹图谱。方法 :将 3种地黄即水溶性部位、脂溶性部位、醇溶性部位的药材提取物 ,分别给 3组SD大鼠灌胃 ,连续 3d ,取尿液 ,离心 ,浓缩 ,滤过 ,得A、B、C组尿液供试样品液 ,与空白对照组进行对照 ,分别测试HPLC指纹图谱。结果 :水溶性大分子部位是干地黄的主要有效部位 ,有助于阐明该药的药理活性、作用机制。

HPLC测定地黄叶与生地、熟地中梓醇含量

中药地黄中主要的化学成分是环烯醚萜类,其中梓醇含量较高,是地黄中主要活性成分,具有抗癌、利尿、缓泻、降血糖等作用。传统用药部位是其新鲜或干燥块根。本实验选取制药时废弃不用的地黄叶子为原材料,经实验确定以95%乙醇为提取溶剂,超声20 min提取梓醇。并同时从新鲜地黄叶、干地黄叶、生地、熟地中提取梓醇,采用HPLC分别测得提取物中梓醇的含量。结果表明,鲜地黄叶,干地黄叶,生地和熟地中的梓醇含量分别为1.07,9.93,14.24,12.54 mg/g。从地黄叶片中提取梓醇具有一定的可行性。

地黄炮制品的HPLC共有指纹峰的探讨

目的标定、分析、比较地黄3种炮制品的HPLC共有指纹峰。方法采用HPLC、ODS C18,分别以梓醇、益母草苷、地黄苷D为对照品,对地黄3种炮制品的HPLC共有指纹峰进行比较。结果不同炮制品的共有指纹峰的差异明显。结论 3种地黄的HPLC共有指纹峰可视为其炮制品质量评价的依据。

RP-HPLC法测定顽痹通丸中的梓醇含量

目的建立反相高效液相色谱法测定顽痹通丸中的梓醇的含量。方法采用Agilent Zorbax SB—Aq C18（150mm×4．6mm，5μm）柱，以水为流动相；检测波长为210nm，流速为1mL·min^-1。结果梓醇在0．216-4．32μg范围内线性关系良好，r=0．9997，平均回收率为94．74％（n=6）。结论该方法准确可靠，可为控制顽痹通丸质量提供标准。

HPLC法测定鲜地黄中梓醇和桃叶珊瑚苷

目的建立HPLC法测定鲜地黄中梓醇及桃叶珊瑚苷的方法,对鲜地黄进行质量控制。方法采用HPLC法对鲜地黄中梓醇及桃叶珊瑚苷进行定量测定。结果线性回归方程分别为梓醇Y=43 800 X+2 849.2,r=0.999 9;桃叶珊瑚苷Y=76 163X+1 676.1,r=0.999 9;梓醇和桃叶珊瑚苷线性范围分别为0.19～2.375μg、0.152～1.90μg,回收率分别为99.00%和99.38%。结论该方法准确、重现性好,可以作为鲜地黄的质量控制方法。

地黄HPLC指纹图谱及梓醇含量测定的研究

目的采用HPLC色谱法建立地黄指纹图谱,优化梓醇含量的测定方法,为地黄药材质量标准的提升提供依据。方法选用Atlantis T3-特色硅胶C18色谱柱,流动相为0.1%磷酸水-乙腈,检测波长为203 nm,体积流量1.0 mL/mL,柱温为35℃,梓醇为对照峰,建立20批地黄指纹图谱。采用指纹图谱相似度评价软件进行数据评价,同法测定20批地黄中梓醇的含量。结果所建立的标准对照指纹图谱,20批地黄的相似度均在0.917以上,20批地黄中梓醇质量分数均在0.2%以上。结论建立的地黄HPLC指纹图谱测定方法,重复性、精密度和稳定性良好,梓醇含量测定符合要求,可有效避免《中国药典》2015年版收载方法检测时糖类物质的干扰,为提升地黄药材质量评价水平提供科学参考。

Synergistic interactions of catalpol and stachyose in STZ-HFD induced diabetic mice: Synergism in regulation of blood glucose, lipids, and hepatic and renal function

Objective: Rehmanniae Radix has been traditionally used to treat diabetes. Catalpol(CAT) and stachyose(STA) are two of the main bioactive compounds in Rehmannia Radix and found to have similar therapeutic effects on diabetes and its complications. In this paper, we aimed to investigate whether there were synergistic therapeutic effects of CAT and STA on diabetes.Methods: Streptozotocin(STZ) with the feeding of high-sugar-high-fat diet(HFD) was applied to induce diabetic C57BL/6 mice. STZ-HFD induced diabetic mice were then divided into model and six medicaltreated groups: metformin(MET), STA, CAT, and three combinations of CAT:STA(1:1, 1:2, 2:1). Blood, liver,and kidney samples were isolated after six-week oral administration for biochemical assays of serum lipids, the indicators of kidney and liver functions and HE staining for liver tissues.Results: It turned out that CAT, STA and their three combinations(1:1, 1:2, 2:1) could effectively control body weight, blood glucose, kidney weight and liver weight index, and well regulate levels of TC, HDL-c,TG, ALT, and TBA. In addition, CAT and its combination with STA at the ratio of 2:1 could significantly improve albumin content, compared to that in model group. STA and CAT and their combinations showed the improvements on kidney function in terms of urinary creatinine(Ucr). However, there were no such consistent observations on serum creatinine(Scr) and creatinine clearance rate(Ccr). The combination of CAT and STA at the ratio of 1:1 exhibited the better adjusting effects on kidney weight and liver weight indexes and the levels of ALT, Ucr, Scr, and Ccr. Our results demonstrated that the combinations of CAT and STA especially 1:1 showed similar or better improvements on diabetes-associated complications,compared to the sole CAT or STA treatment.Conclusion: Thus, we concluded that there were synergistic therapeutic effects between CAT and STA on STZ/HFD-induced type 2 diabetes. This project provided insights and technical supports for the innovation of discovering bioactive constituents in Rehmannia Radix and studying its integrative mechanism in curing diabetes.

地黄不同炮制品指纹图谱模式识别及多成分含量测定

建立地黄(Rehmannia glutinosa Libosch.)不同炮制品(鲜地黄、地黄片、生地黄、熟地黄)HPLC指纹图谱及11个指标成分含量测定方法,指认11个共有峰,结合主成分分析(PCA)法和聚类分析(HCA)法分析炮制过程中化学成分变化趋势,为地黄不同炮制品质量评价及药理药效研究奠定基础。结果表明,HPLC指纹图谱结合多指标成分含量测定的方法适用于地黄不同炮制品的HPLC指纹图谱分析,PCA和HCA结果显示,熟地黄明显区别于鲜地黄、地黄片、生地黄,鲜地黄和地黄片在PCA中分为2类,HCA中鲜地黄和地黄片聚为一类;11种指标成分线性关系良好,R^(2)≥0.9995,11种指标成分含量变化趋势各不相同。HPLC指纹图谱结合多指标成分含量测定的方法反映了地黄炮制过程中的化学成分变化,适用于不同炮制阶段地黄的质量评价,为药理药效研究及质量标记物的发现奠定研究基础。

地黄对“阴虚热盛”家兔血清药效指纹图谱的影响

目的:探索地黄对阴虚热盛模型家兔血清药效指纹图谱的影响。方法:采用速尿和大肠杆菌内毒素复制家兔阴虚热盛证动物模型,通过HPLC梯度洗脱对造模、给药前后家兔血清药效指纹图谱进行研究。结果:地黄主要是影响动物自身机体代谢物的代谢水平,发挥滋阴清热作用。结论:获得的地黄"养阴清热"HPLC血清指纹图谱将有助于阐明生地黄养阴清热的药理活性及作用机理。

地黄活性成分梓醇在大鼠体内的代谢变化研究

目的观察大鼠口服地黄水提液后其主要成分梓醇在体内的代谢变化,初步探讨梓醇在体内的可能代谢途径和变化规律。方法 SD大鼠灌胃给予地黄水提液,分别给药后在不同时间点取血浆,采用HPLC-MS检测血浆中梓醇及其代谢物的变化。结果大鼠口服地黄煎液后,梓醇在大鼠体内主要有1个异构体和5个代谢转化产物:异构体、甲基化物、羟基化物、糖基化物、脱氧羟基化物和脱氧羟基化甲基化物。且梓醇及其代谢物均在给药后45 min达到最高值,随后呈下降趋势。结论地黄梓醇在体内可能代谢途径分析研究,可为地黄及含有梓醇的药物的体内外代谢分析和进一步与药效结合、作用机理研究提供参考。

怀地81与主栽品种单株鲜质量和指标成分含量比较

为了选育怀地黄优良新品种,利用高效液相色谱法测定怀地81与5个怀地黄主栽品种的指标成分——梓醇和毛蕊花糖苷含量,并采用SPSS分析其单株鲜质量和指标成分的差异。结果表明,怀地黄单株鲜质量依次为怀地81>85-5>金九>怀丰>沁怀>北京3号,怀地81与其他主栽品种差异极显著;梓醇含量依次为北京3号(1.601%)>沁怀(1.588%)>怀地81(1.314%)>金九(1.277%)>85-5(1.073%)>怀丰(0.924%),怀地81梓醇含量与金九差异不显著,与其他主栽品种差异极显著;毛蕊花糖苷含量依次为怀地81(0.096%)>沁怀(0.069%)>85-5(0.047%)>北京3号(0.035%)>怀丰(0.023%)>金九(0.022%),怀地81毛蕊花糖苷含量与5个主栽品种差异极显著。说明怀地81单株鲜质量和指标成分综合性状较主栽品种有显著优势。

不同储藏年限地黄化学成分分析

目的分析不同储藏年限地黄的化学成分。方法对地黄中氨基酸含有量进行分析,硫酸-苯酚法测定地黄总多糖含有量,HPLC法测定毛蕊花糖苷、环烯醚萜苷类、单糖、寡糖含有量。结果随着储存时间增加,总氨基酸含有量下降,其中碱性氨基酸赖氨酸和精氨酸幅度较大;棉籽糖、水苏糖、总多糖含有量逐年降低,果糖、葡萄糖、蔗糖、甘露三糖含有量呈现先增后减的趋势,蜜二糖含有量基本平稳;单糖中半乳糖、甘露糖、阿拉伯糖随着储存时间的增加含有量逐年增加,环烯醚萜苷类成分梓醇、地黄苷D、地黄苷A、益母草苷随着储藏年限的延长,成分逐渐降低;毛蕊花糖苷含有量也是下降的。结论随着地黄储藏年限的增加,断面越来越黑,大多数成分含有量在储藏3年后趋于平稳。

不同产地的地黄中梓醇含量比较

目的 采用薄层扫描法测定了不同产地的地黄中梓醇的含量。方法 以氯仿 -甲醇 -水 ( 7∶ 4∶ 0 .5 )为展开剂 ,10 %硫酸 -乙醇为显示剂 ,4 13 nm为扫描波长 ,反射法扫描。结果 河南温县产地黄中梓醇含量较高 ,山东嘉祥产地黄中梓醇含量较低。

怀地黄营养器官中梓醇的积累动态

目的 揭示梓醇在怀地黄不同营养器官中的积累规律。方法 高效液相色谱法。结果 在怀地黄根、茎和叶 3种营养器官中都含有梓醇 ,但不同器官中梓醇含量有显著差异。其中 ,茎、叶中梓醇含量较高 ,块根中梓醇含量较低。在同一营养器官中梓醇积累呈现规律性变化。幼叶梓醇含量低 ,随着叶发育成熟 ,其梓醇含量逐渐增高。在块根中梓醇含量随着块根的发育增粗逐渐增高。结论 怀地黄块根有效成分的含量高峰与其产量高峰一致 ,都在11月初地上部分枯萎时 ,因此 ,此时应为怀地黄的适宜采收期 ,与传统的怀地黄采收期相吻合。叶和茎中也含有梓醇 ,且含量高于块根 ,因此 ,建议对怀地黄地上部分进行综合开发利用。

UPLC法测定地黄叶及块根中的梓醇和毛蕊花糖苷

目的比较地黄叶及块根中梓醇和毛蕊花糖苷的含有量。方法地黄叶及块根甲醇提取液的分析采用ACQUITY UPLC BEH Shield RP18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm);柱温35℃;流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱;体积流量0.2 m L/min;检测波长210 nm。结果梓醇含有量由高到低,依次为地黄嫩叶(149.22 mg/g)>老叶(49.29 mg/g)>块根(33.33 mg/g)>干叶(15.53 mg/g);毛蕊花糖苷含有量依次为地黄老叶(10.27 mg/g)>干叶(10.03 mg/g)>嫩叶(9.56 mg/g)>块根(0.28 mg/g)。结论地黄嫩叶中梓醇的含有量约为老叶的3倍,但毛蕊花糖苷的含有量略低于老叶。地黄叶存放一年后,毛蕊花糖苷的减少量比梓醇小,表明前者稳定性高于后者。而且,这两种成分在叶中的含有量均比在块根中更高。

地黄性状的比较与相关分析

目的对地黄不同品种的外观性状进行描述,对经济、产量和质量性状进行比较和相关分析。方法各性状比较采用田间随机区组试验并结合方差分析,梓醇含量的测定用高压液相色谱法。结果方差分析结果表明,地黄不同品种之间株幅的F=15.4(F0.01=5.54),叶片长度F=12.2,叶片宽度F=13.35,单株产量F=55.7,梓醇含量F=8.03。单株产量与叶片长度的相关系数r=0.9639,与叶片宽度的相关系数r=0.9073,与块根数的相关系数r=0.7060,与地上部鲜重的相关系数r=0.9950。梓醇含量与株幅的相关系数r=0.9169,与叶片长度的相关系数r=0.7046,与叶片宽度的相关系数r=0.7159。结论地黄不同品种间株幅、叶片长度、叶片宽度、单株产量和梓醇含量都有显著差异。单株产量与地上部鲜重、叶片长度、叶片宽度和块根数呈显著正相关,梓醇含量与株幅、叶片长度、叶片宽度呈显著正相关。

怀地黄叶中梓醇的积累分布动态

目的探索梓醇在怀地黄叶生长过程中的积累分布规律,为开发梓醇资源提供新思路。方法采用高效液相色谱法测定新鲜药材中的梓醇含量,流动相:乙腈-水(0.6∶99.4),检测波长:210nm,回归方程Y=377.26X-1.0543。测定不同发育阶段的怀地黄叶的水分含量,换算成干燥品中梓醇的含量。结果怀地黄叶与块根中均含有梓醇。地黄叶中的梓醇含量先迅速上升,在8、9月份的生长旺盛期达到最大值,然后逐渐降低直到地黄叶枯萎、凋谢。地黄块根中的梓醇随块根的增大而不断增多,一直持续到采收期收获。结论怀地黄中的梓醇积累变化是植物生理调节的结果。怀地黄叶中含有大量梓醇,应根据其积累规律进行深入研究,以利于地黄的综合利用。

地黄块根膨大过程中土壤化感物质含量及微生物数量变化研究

以怀地黄为实验材料,对地黄块根膨大速率动态变化及地黄根际土壤中的潜在化感物质阿魏酸、香草酸、香草醛、对羟基苯甲酸含量的动态变化进行了研究分析.结果表明:①块根膨大速率动态变化呈一双峰曲线,第1个高峰出现在栽秧后70～130 d,第2个高峰出现在栽秧后150～190 d.②根际土壤中的阿魏酸、香草酸、香草醛含量变化与块根膨大速率变化动态相似,对羟基苯甲酸表现为先上升后下降;阿魏酸与地黄块根的膨大正相关;地黄块根膨大过程中根际土壤放线菌、真菌数量均明显增加,根际微生物可能将地黄根系分泌物进行生物转化生成了导致地黄连作障碍的酚酸类化感物质.

血热出血模型大鼠血清中鲜地黄高效液相色谱分析

目的:对阴虚血热出血大鼠含鲜地黄血清进行分析,探索鲜地黄清热凉血药效的物质基础。方法:给予血热出血症模型大鼠鲜地黄,采集血清,用高效液相色谱法分析大鼠含药血清、正常血清以及鲜地黄药材的色谱,研究鲜地黄在血中移行成分以及鲜地黄对大鼠血清中固有成分的影响。结果:在血热出血症模型大鼠含药血清中检测到了鲜地黄的有效成分——梓醇的色谱峰;且发现血清中和药材中有3种相同的共有成分;鲜地黄对模型大鼠血清中1种固有成分的升高有抑制作用。结论:鲜地黄中梓醇及3种未明成分可能是其清热凉血物质基础;鲜地黄对动物血清中固有成分代谢的影响可能是鲜地黄清热凉血药效的机制。