新牛蛙凝集素Catesbeianalectin的免疫原性分析及其特异性糖基配体的筛选

目的分析新发现的牛蛙凝集素Catesbeianalectin的免疫原性,并筛选其体外特异性结合的糖基配体。方法多肽合成牛蛙凝集素Catesbeianalectin,利用圆二色谱(circular dichroism,CD)检测其二级结构。分别用牛蛙凝集素、麦胚凝集素(wheat germ lectin,WGA)、卵清蛋白(ovalbumin,OVA)免疫BALB/c小鼠,检测血常规与血清效价,分析牛蛙凝集素的免疫原性。表面等离子共振成像(surface plasmon resonance imaging,SPRi)技术筛选30多种与牛蛙凝集素特异性结合的糖基配体。结果牛蛙凝集素Catesbeianalectin为聚脯氨酸2型(PPⅡ)螺旋结构。OVA包被浓度为0.25μg/ml时,小鼠平均血清效价为1∶200;WGA包被浓度为0.008μg/ml时,小鼠平均血清效价为1∶1 600,牛蛙凝集素Catesbeianalectin包被浓度为80μg/ml时,小鼠血清平均效价为1∶25。当30种单糖以浓度5 mmol/L固定于芯片,牛蛙凝集素Catesbeianalectin以浓度0.4 mg/ml通过固定于芯片的糖表面时,主要与半乳糖基和含有半乳糖基的多糖作用。结论牛蛙凝集素Catesbeianalectin免疫原性较低,为S-型凝集素,体外可与带有半乳糖基的多糖结合,为进一步研究牛蛙凝集素Catesbeianalectin的药物靶向载体作用奠定了基础。

牛蛙凝集素生物学活性及其小鼠体内组织靶向性分布

通过筛选牛蛙皮肤cDNA文库得到牛蛙凝集素Catesbeianalectin,相对分子质量仅为1 465.8,是目前已知的相对分子质量最小的凝集素,且具有很强的凝集红细胞及病原细菌作用。利用CD检测牛蛙凝集素的二级结构为典型的PPⅡ螺旋。为了探究牛蛙凝集素Catesbeianalectin的体内组织靶向性分布规律,对其进行了放射性同位素125I标记,通过尾静脉注射、腹腔注射及灌胃3种方式给药,并于随后进行既定时间点动态显像、采血及各组织中放射性强度的测量。同位素标记Catesbeianalectin的标记率为97.3%,放化纯度为99.3%,在体外和体内模拟试验中具有良好的稳定性和理想的体内分布特征。采用尾静脉注射125I-Catesbeianalectin时,肝脏、脾脏和肺脏中放射性凝集量最高,且主要通过肝脏代谢;采用灌胃及腹腔注射125I-Catesbeianalectin时,胃及脾脏中放射性凝集量最高且,主要通过胃代谢;3种途径给予125I-Catesbeianalectin后,均不能通过血脑屏障,静脉注射是该药物较好的给药途径,为进一步研究牛蛙凝集素Catesbeianalectin的靶向载体作用提供基础。