EMS诱变的长春花细胞系突变研究

目的 通过化学诱变的手段筛选生长快且吲哚碱含量高的长春花突变细胞系。方法 用不同浓度的甲基磺酸乙酯 (EMS)处理长春花愈伤组织 ,挑选成活愈伤组织块继代扩大培养 ,比较其与对照愈伤组织生长速率、吲哚总碱积累等方面的差异。结果 用 EMS处理的长春花愈伤组织与对照相比 ,不仅生长快 ,并且吲哚总碱含量高。结论 EMS处理的愈伤组织发生了变异 ,变异种是所期望的比较理想的细胞系。

长春花愈伤组织的诱导和增殖

以长春花(Catharanthusroseus(L.)G.Don)幼嫩叶片作为外植体,接种于附加不同浓度的NAA,2,4-D、6-BA、KT及其组合的MS固体培养基上,结果发现除单独使用KT不能产生愈伤组织外,其它3种单独使用时,在一定的浓度范围均有愈伤组织产生;最佳的组合培养基为MS+NAA0.5mg/L+2,4-D0.5mg/L+6-BA2.0mg/L.进一步研究发现,在黑暗和光照培养条件下,愈伤组织增殖呈"S"型,且生长周期均为27d.

长春花叶片愈伤组织诱导及培养过程中生物碱合成类型的变化和调节及有关酶的分析

在４种不同培养基上诱导长春花叶片愈伤组织发生的过程中，叶片中含量较高的文多灵（ｖｉｎｄｏｌｉｎｅ）和长春质碱（ｃａｔｈａｒａｎｔｈｉｎｅ）迅速降解至极低水平，而在叶片中含量较低的阿玛碱（ａｊ－ｍａｌｉｃｉｎｅ）和蛇根碱（ｓｅｒｐｅｎｔｉｎｅ）的合成却逐渐增加，同时酸性和碱性过氧化物酶（ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）活性呈上升趋势，尤其碱性过氧化物酶与蛇根碱和阿玛碱的相关性较密切。光照和黑暗中的变化趋势基本一致，但光照可提高过氧化物酶的活性，对培养物的长春质碱、文多灵和蛇根碱的合成有利。不同的培养基对生物碱的合成影响较大，２，４－Ｄ显著抑制生物碱的合成，持续光照使愈伤组织的生长受到抑制，使阿玛碱向其蛇根碱转化。

长春花愈伤组织的诱导及限速酶活性的研究

长春花生物碱是目前应用最有效的天然植物抗肿瘤药物,目前利用生物工程生产长春花生物碱成果甚微。通过对长春花愈伤组织的诱导条件进行研究,同时对植株各部位的色氨酸脱羧酶(TDC)、过氧化物酶(POD)进行精确测定。认为长春花愈伤组织的诱导以MS培养基、激素2,4-D 2 mg/L和6-BA 0.5 mg/L最好,生物碱的合成是植物体多器官共同参与的结果。