神农洁蜣螂两性成虫肠道微生物多样性分析

昆虫肠道微生物多样性对宿主的生长发育以及营养物质的消化和吸收等起着非常重要的作用。本研究利用16S rRNA基因序列构建神农洁蜣螂Catharsius molossus雌性成虫和雄性成虫肠道微生物的克隆文库,旨在探究其菌群的结构并加以对比和分析,采用Illumina NovaSeq高通量测序的方法揭示两种菌群组成方面的相似性和差异性。结果表明:神农洁蜣螂雌性成虫和雄性成虫肠道微生物在结构和组成方面存在着一定的差异。雌性成虫肠道菌群的物种丰富度和物种多样性都高于雄性成虫。雌性成虫、雄性成虫体内肠道菌群共有1 253个ASVs,归属于20个门、35个纲、54个目、134个科、253个属,其中雌性成虫肠道菌群的ASVs有1 024个,而雄性成虫肠道菌群的ASVs有410个,二者优势菌群虽然都为阴道球菌属Vagococcus,但二者所占的比例不同。本研究分析了神农洁蜣螂雌雄成虫肠道微生物多样性及群落在结构和组成方面的差异,为探究神农洁蜣螂雌雄成虫的肠道微生物的潜在功能,以及其肠道菌群的开发应用提供了理论支持。

蜣螂药渣中壳聚糖的回收与初步表征

目的:以蜣螂提取多肽后的药渣为原料提取壳聚糖,并对其进行表征,探索昆虫类中药药渣综合利用的可行性。方法:采用正交试验法优选甲壳素与壳聚糖的制备工艺,并采用红外光谱(IR)、X射线衍射(XRD)等检测手段对壳聚糖进行表征。结果:筛选得到壳聚糖的较佳制备工艺条件:脱矿物质用1.3 mol/L HCl,以固液比1∶30,预先在80℃下加热0.5 h,然后室温条件下浸泡12 h;脱蛋白质和脂质用4 mol/L NaOH,以固液比1∶30,在90℃条件下处理6 h;脱色用3%的高锰酸钾溶液,以固液比1∶10,在室温下处理0.5 h,再用2%草酸溶液,以固液比1∶20,在70℃水浴中处理15 min;脱乙酰基用14 mol/L NaOH,以固液比1∶30,在110℃条件下处理5 h。结论:该工艺稳定可行,且初步表明从蜣螂药渣中制备的壳聚糖优于市售虾壳聚糖,有较大的利用价值。

蜣螂抗实验性前列腺增生作用研究

目的:探讨蜣螂对实验性前列腺增生的作用。方法:用丙酸睾丸素造小鼠前列腺增生模型及用去甲肾上腺素诱发兔离体膀胱三角肌收缩,观察蜣螂的抗实验性前列腺增生作用。结果:蜣螂的乙醇提取物、氯仿提取物均可显著抑制去甲肾上腺素诱发兔离体膀胱三角肌的收缩;其85%乙醇的提取物还可显著抑制丙酸睾丸素所致小鼠前列腺增生。结论:蜣螂具有显著抑制实验性前列腺增生的作用,并且具有对抗α受体激动剂去甲肾上腺素诱发的膀胱三角肌收缩作用。

蜣螂药渣中甲壳素的脱色工艺研究

目的:为制备色泽白、黏度高的蜣螂壳聚糖,以蜣螂甲壳素为原料,探讨其脱色工艺条件。方法:首先考察脱色剂种类、H2O2浓度、pH值、固液比、反应温度等因素对壳聚糖色泽和特性黏度的影响,继而在单因素试验的基础上,采用L9(34)正交试验法优选H2O2脱色工艺的参数。结果:蜣螂甲壳素脱色的最佳工艺条件为:脱色剂H2O2浓度为15%、固液比1∶15、反应温度为45℃。结论:该工艺稳定可行,脱色效果好,可最大限度保持壳聚糖的高黏度,使其有望成为结肠定位给药的新型载体。

鳖甲煎丸中3种昆虫药刚毛及体壁碎片的显微鉴别研究

目的鉴别鳖甲煎丸中的鼠妇虫、土鳖虫和蜣螂虫。方法利用NIKON显微镜分别对3种昆虫类药材及含有该类药材的鳖甲煎丸粉末进行观察比较。结果可根据3种昆虫药的刚毛及体壁碎片特征进行鉴别。结论该方法可简便、有效地鉴别3种昆虫类动物药材,为鉴别鳖甲煎丸中含三种昆虫类动物药材提供资料和依据。

蜣螂内服临床应用研究

目的:蜣螂功能丰富,临床治症广泛。除了众所熟知的通二便之功,还可定惊痫,可清热解毒,可消肿散结,可拔毒生肌,可止血,可通经络而破癥瘕等。临床应用灵活,可单味取其功宏力专,亦可配伍他药以增强功效;即可外用亦可内服。然而宋元以来,多视蜣螂为峻厉之品,而不敢轻用于内科疾患,故多局限于疡科外治之中。现代《中药大词典》承袭某些本草著作的认识,认为蜣螂有毒,更使蜣螂的临床应用尤其是内服应用受到了巨大限制。因此,在这个谈毒色变的年代,蜣螂难以被临床医生正确认知和应用。据笔者多年对蜣螂的临床应用来看,无论外用内服均未发现所谓临床中毒症状,而且取得了良好治疗效果。为给蜣螂正名,故将笔者及临床各科相关文献报道案例进行整理,以证其疗效。

屎克螂适宜的繁殖条件初步研究

１９９１—１９９４年对屎克螂适宜的繁殖条件研究结果：１．土层４０ｃｍ和６０ｃｍ的平均温度分别为１５．９２±６．３４℃和１５．８９±６．０８℃；平均土壤含水量分别为２６．７０±３．７４％和２３．７２±１．８８％，使各虫态处于一个几乎恒温恒湿的条件，有利于生长发育与越冬，２．土壤含水量１７％、２０％、２２％、２６％和２９％，其产卵最多的深度分别在６５─７０ｃｍ，７５─８０ｃｍ，６５─８０ｃｍ，６５—８０ｃｍ和３５—５０ｃｍ，分别占产卵总数的３４．１６％、４２．４２％、６８．４２％、５５．４０％和９０．５６％。３．不同土壤的产卵深度，沙壤土以土下４５—５０ｃｍ处最多，占产卵总数的３４．７８％；沙土以６５—８５ｃｍ最多，占产卵总数的８６．６７％；粘土以４５—６０ｃｍ最多，占产卵总数的５１．１１％。

昆虫生态服务的价值研究与探讨

以蜣螂Catharsius molossus为例,采用Costanza和Chee的价值替代法对河南省蜣螂的生态服务如生粪便分解、牧草污染处理和氮循环的价值统计,得出其生态服务价值为5.10×109元,阐述昆虫提供的巨大生态服务价值。初步提出了昆虫生态系统服务价值的测算方法,以期推动昆虫服务价值评价的研究发展,同时对生态系统服务价值与政府决策的权衡进行探讨。

蜣螂壳聚糖对铀的吸附研究

制备了蜣螂脱色壳聚糖和蜣螂未脱色壳聚糖,研究了时间、pH及铀初始浓度对其吸附铀的影响,探讨了吸附等温线和吸附动力学规律,并与虾壳聚糖进行对比。结果表明:蜣螂未脱色壳聚糖对铀的吸附率高于蜣螂脱色壳聚糖和虾壳聚糖;最佳吸附条件为铀初始质量浓度50mg/L、时间3.0h、pH=4.0,其中铀初始浓度的影响最显著;蜣螂未脱色壳聚糖对铀吸附过程符合Langmuir、Freundlich吸附等温方程和准二级吸附动力学方程。

两种药用蜣螂虫的人工饲养及诱捕技术

两种蜣螂虫屎克螂与独角仙具有较高的药用价值 ,在当前中药资源日益缺乏的情况下 ,开展规模养殖与诱捕相结合具有意义。屎克螂以新鲜粪便为食料 ,以虫笼及砖墙内圈养等养殖法进行饲养。独角仙幼虫以烂木屑及烂草等 ,成虫以西瓜、南瓜等为食料 ,进行虫笼内圈养。同时两虫饲养过程中必须注意虫种的选择 ,加强食料及养殖场所水分的管理 ,防止敌害。以新鲜粪便诱集屎克螂成虫。可在有烂草堆的场所捕捉独角仙幼虫 ,或在皂角树上及桃园、瓜地等捕捉其成虫。

泡沫分离法用于蜣螂蛋白质分离的研究

目的优选蜣螂提取液中蛋白质类成分泡沫分离的最佳工艺条件。方法采用单因素试验法,以富集比、回收率、泡沫液中蛋白的质量分数为评价指标,对影响泡沫分离的几个关键因素进行考察。结果泡沫分离蜣螂提取液蛋白类成分的较佳工艺为:气流速度600 mL/min,进料液质量浓度为含药材0.050 g/mL,pH 4,进料体积1 000 mL,室温;在此条件下,富集比为1.56,回收率为85.6%,泡沫液质量分数为20.37%。结论采用泡沫分离法浓缩和分离蜣螂蛋白质类成分回收率较高,能提高产品中蛋白质的质量分数,浓缩和分离蜣螂提取液中蛋白类物质有一定的可行性。

基于有效组分检测与理化表征相结合的蜣螂有效部位制备工艺研究

目的:优选蜣螂有效部位的制备工艺,探索通过提取液理化表征来进行过程控制的可行性。方法:采用单因素试验法,主要以有效组分多肽与氨基酸的含量为指标,结合流变学、表面化学、电学等方面的表征,系统考察影响蜣螂有效部位制备相关的提取、浓缩、分离、纯化、干燥各环节的各因素。结果:确定了蜣螂有效部位的制备工艺条件,即:取蜣螂药材粉碎为粗粉,用3倍量的85%乙醇浸泡48h,加85%乙醇10倍量,以4mL·min-1·kg-1的速度渗漉,收集漉液,滤过,滤液在50～55℃浓缩至1∶1,冷藏除脂后,通过DA201-C大孔树脂柱,先后用1BV水与4BV70%乙醇为洗脱剂进行洗脱,分别收集洗脱液。水洗脱液浓缩,干燥,加85%乙醇洗涤2次,取洗液,与70%乙醇洗脱液合并,浓缩,干燥,即得。同时,本实验对有效部位制备各环节的液相体系进行表征,发现与有效物质多肽相关的表面张力基本未变,而与无效物质盐密切相关的电导率降低了约90%,最大限度地保留了药物治病的有效信息,去除了无效信息。结论:筛选的蜣螂有效部位制备工艺条件稳定可靠,通过提取液理化表征来进行过程控制切实可行。

蜣螂急性毒性研究

目的探讨蜣螂Catharsius molossus的毒性,明确蜣螂的毒性成分。方法采用小鼠急性毒性实验,研究蜣螂乙醇提取物及其水提取部位的毒性;采用有机溶剂沉淀与凝胶色谱法分离蜣螂水提取部位的毒性成分。结果小鼠ig给予剂量小于34.8 g/kg的蜣螂乙醇提取物,毒性很小,表明经口给药安全。蜣螂水提取部位有明显的急性毒性,主要症状为精神萎靡、呼吸异常、呆卧少动、对外界声刺激反应迟钝等,蜣螂水提取部位半数致死量(LD50)为19.01 g/kg。蜣螂水提取部位中蛋白质质量分数约13%,相对分子质量在1.5×103～3.0×104,其中相对分子质量在3.0×104左右的蛋白质可能是蜣螂水提取部位毒性成分之一。结论蜣螂毒性与本草学描述相符。

蜣螂有效部位的初步表征

目的:建立蜣螂有效部位的质量控制方法。方法:采用薄层色谱法对蜣螂有效部位含有的氨基酸进行定性鉴别,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法作分子量的检测,氨基酸自动分析仪对蜣螂有效部位中游离氨基酸与结合氨基酸进行种类和含量检测。结果:蜣螂有效部位的薄层色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;分子量检测表明蜣螂有效部位主要为多肽的混合物,相对分子质量分布在6×103～14×103;游离氨基酸与构成多肽的氨基酸检测表明有效部位中除色氨酸被破坏无法测出外,共检出17种氨基酸,其中游离型氨基酸占13.41%,结合型氨基酸即多肽占9.27%。结论:表征方法灵敏准确、重复性好、专属性强,可用于蜣螂有效部位的质量控制。

蜣螂有效部位毛细管电泳指纹图谱的建立及其总量统计矩分析

目的建立蜣螂有效部位的毛细管电泳(CE)指纹图谱,探讨利用总量统计矩法分析指纹图谱的可行性。方法采用毛细管区带电泳法(CZE),以弹性石英毛细管柱(60 cm×75μm)为分离通道,75 mmol/L硼砂溶液(pH 9.8)作缓冲液,运行电压+20 kV,检测波长200 nm,指纹图谱的评价采用药典委员会相似度分析软件与总量统计矩法。结果建立了蜣螂有效部位的CE指纹图谱,药典委员会的相似度软件与总量统计矩法计算的相似度基本一致,显示蜣螂有效部位批间差异小。结论建立的CE指纹图谱准确简便、重现性好,可作为蜣螂提取物的质量控制方法,而总量统计矩法可以作为指纹图谱的分析方法。

蜣螂中间体的大孔树脂纯化工艺优选及检测

目的:优选蜣螂提取物的DA201-C型大孔树脂纯化工艺。方法:采用单因素试验考察DA201-C型树脂的吸附性能和影响纯化工艺的pH、洗脱剂、上柱流速等因素;采用氨基酸自动分析仪检测纯化后的中间体。结果:最佳纯化工艺条件为上样液质量浓度17.60 g.L-1,吸附流速2 BV.h-1,pH 4.0,依次用1 BV水和4 BV 70%乙醇洗脱,脱盐率达98.81%,多肽回收率达87.39%,所得醇洗脱物含结合型氨基酸(多肽)32.26%。结论:该工艺分离效果较好,可用于蜣螂中间体的脱盐与纯化。

蜣螂壳聚糖游离膜的制备工艺优选

目的:优选蜣螂壳聚糖膜的制备工艺。方法:以力学性能、透湿性、溶胀性、耐酸性为指标,采用单因素试验考察溶剂(乙酸)、脱膜剂(氢氧化钠)、增塑剂(甘油)、壳聚糖质量分数及干燥条件等因素对壳聚糖成膜的影响。结果:优选的制备工艺为2%乙酸,2%壳聚糖,2%氢氧化钠,脱膜时间2 h,5%甘油,成膜干燥温度40℃;制成的壳聚糖膜外观透明,厚薄均匀,透湿性小,具备一定的耐酸性,机械性能及综合性能良好。结论:该工艺稳定可行,为壳聚糖的药用包衣及工业化成膜提供参考。

蜣螂疏水壳聚糖的制备及其止血活性研究

目的制备蜣螂疏水壳聚糖,研究其止血性能。方法以蜣螂壳聚糖为原料,通过与月桂酸酐酰基化反应,进行疏水改性与表征,同时采用离体凝集实验与小鼠肝创面实验研究其凝血性能。结果制备的蜣螂疏水壳聚糖疏水基取代度为(11.69±0.14)%,高于疏水市售壳聚糖;离体凝集实验表明其与血液混合后质量分数达6.0 mg/g时即可快速凝血(3.42±0.39)s,较蜣螂壳聚糖与市售疏水壳聚糖效果更优;小鼠肝创面实验显示蜣螂疏水壳聚糖的止血时间较蜣螂壳聚糖与疏水市售壳聚糖明显缩短。结论采用疏水改性可明显提高壳聚糖的凝血性能,且蜣螂疏水壳聚糖最为优良,有望成为一种有巨大潜力的新型止血材料。