鸡血藤在大鼠体内的排泄动力学研究

目的:研究大鼠灌胃鸡血藤水提取物的排泄动力学,为其临床应用提供科学依据。方法:给雄性SD大鼠灌胃鸡血藤水提取物(30 g·kg^(–1),以生药量计),分别在给药后的2、4、6、8、12、24、48 h收集每组的粪便和尿液。采用超快速液相色谱-质谱法检测大鼠排泄物样品,通过与对照品比对后鉴定和定量鸡血藤水提取物中化合物。结果:在大鼠48 h排泄的尿液和粪便中可检测到20个原型化合物,即烟酸(1)、对羟基苯甲酸(2)、水杨酸(3)、6,9-二羟基大柱香波龙-4,7-二烯-3-酮(4)、大豆苷(5)、8,9-二羟基大柱香波龙-4,6-二烯-3-酮(6)、异落叶松脂素(7)、芒柄花素(8)、4′,8-二甲氧基-7-O-β-D-吡喃葡萄糖基异黄酮(9)、(+)-松脂酚(10)、(+)-表松脂酚(11)、8-甲雷杜辛(12)、芒柄花素钠(13)、3′-甲氧基大豆素(14)、鸡血藤黄醇A (15)、毛蕊异黄酮(16)、艳紫铆素A (17)、奥刀拉亭(18)、鹰嘴豆芽素A (19)和(6a R,11a R)-高丽槐素(20)。结论:鸡血藤中的一些原型化合物可通过大鼠尿液和粪便排出体外。

鸡血藤的质量控制现状及质量标志物预测分析

鸡血藤中含有黄酮类、酚酸类、苯丙素类、蒽醌类、甾醇类及萜类、生物碱类、香豆素类等多种活性成分。现代药理研究表明,鸡血藤具有抗血小板聚集、保护心肌缺血、调节血脂、抗氧化、抗炎、抗病毒、镇静催眠、保肝的药理作用,具有良好的发展前景。概括鸡血藤的质量控制现状,从植物亲缘学、传统药性、传统药效、不同配伍、新的药效用途、化学成分可测性、网络药理学等7个方面对鸡血藤的质量标志物进行预测分析,儿茶素、表儿茶素、甘草素、大豆苷、芒柄花苷、大豆苷元、槲皮素、木犀草素、柚皮素、芦荟大黄素等成分可作为鸡血藤质量标志物的筛选对象,为提升鸡血藤质量标准提供了参考。

芪龙活络颗粒质量标准研究

目的建立芪龙活络颗粒的质量标准。方法采用薄层色谱法对制剂中黄芪、川牛膝、鸡血藤药材进行定性鉴别;采用高效液相色谱法测定丹酚酸B的含量,色谱柱为Eclipse XDB-C_(18)柱(150 mm×4.6 mm,5µm),流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(23∶77,V/V),流速为1.0 mL/min,检测波长为286 nm,柱温为30℃,进样量为10µL。结果薄层色谱斑点清晰,且阴性对照无干扰。丹酚酸B的进样量在0.0624~1.248µg范围内与峰面积线性关系良好(r=1.000,n=5);精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于2.00%(n=6);平均回收率为107.61%,RSD为4.28%(n=6)。5批样品中丹酚酸B的含量为1.09~1.32 mg/g。结论该方法专属性好、结果准确,可用于芪龙活络颗粒的质量控制。暂订芪龙活络颗粒中丹酚酸B的含量应不低于1.0 mg/g。

鸡血藤ISSR体系优化及引物筛选

以鸡血藤的入药部位藤茎为试验材料,采用改良CTAB法进行DNA提取,利用正交试验和单因素试验对ISSR-PCR反应体系进行优化和构建。结果表明,鸡血藤最佳ISSR-PCR反应体系为DNA模板60 ng,Taq酶2.00 U,Mg2+浓度1.75 mmol/L,dNTP浓度0.25 mmol/L,引物浓度0.20 μmol/L,最佳退火温度44.6℃。从100条ISSR引物筛选出20条适合鸡血藤的ISSR引物。

鸡血藤醇提物的提取及抗鼠肝癌S180活性研究

目的制备鸡血藤乙醇提取物水溶性部位,研究其体内抗肿瘤活性。方法采用乙醇索氏回流提取、水沉淀的方法制备鸡血藤乙醇提取物水溶性部位,并应用高效液相色谱法对其中的芒柄花素进行含量测定。采用S180荷瘤小鼠模型研究鸡血藤乙醇提取物水溶性部位的体内抗肿瘤活性,记录移植实体瘤抑制率,HE染色观察实体瘤组织和脾脏的病理改变,免疫组织化学法观察实体瘤组织Caspase-3蛋白表达情况。结果本提取工艺获得鸡血藤水溶性乙醇提取物生药含量:3.75 g生药/g浓缩稠膏,每克生药含56.25μg芒柄花素。鸡血藤醇提物高剂量能有效抑制荷瘤小鼠脾脏肥大及抑制实体瘤的生长,抑瘤率为44.70%(与模型对照组比较P<0.01)。病理HE结果表明模型组脾脏组织有肿瘤细胞浸润,实体瘤组织肿瘤细胞规整;鸡血藤醇提物高、中剂量组脾脏组织肿瘤细胞浸润减轻,实体瘤组织肿瘤细胞核固缩,肿瘤细胞凋亡、坏死,实体瘤组织Caspase-3蛋白表达增加。结论鸡血藤醇提物能显著抑制S180荷瘤小鼠实体瘤生长及减少肿瘤细胞转移,其机制可能与促进肿瘤细胞凋亡相关。

基于网络药理学研究“当归-鸡血藤”药对治疗肾性贫血的作用机制

目的基于网络药理学研究“当归-鸡血藤”药对治疗肾性贫血的活性成分、潜在靶点及可能作用机制。方法利用TCMSP数据库和Uniprot数据库检索并筛选得到“当归-鸡血藤”药对主要活性成分及其作用靶标。通过Drugbank、Genecards及OMIM数据库收集肾性贫血相关靶标,对肾性贫血药物靶标和相关基因取交集,运用STRING数据库构建蛋白质互作(PPI)网络图,利用Cytoscape 3.6.0软件构建“药物-活性成分-靶点”网络模型。使用DAVID数据库对交集靶点进行基因本体(GO)分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析并可视化,并用Autodock_vina和Pymol软件对蛋白和活性成分进行分子对接。结果获得“当归-鸡血藤”药对中24个活性成分,相关潜在靶点140个,肾性贫血相关靶点992个,交集靶点44个;其主要作用于MAPK1、TP53、TNF、CASP3等多个靶标,涉及包括HIF-1、PI3K/Akt、TNF在内的99条信号通路发挥治疗肾性贫血作用。分子对接结果显示木犀草素与TP53、STAT3等关键靶点有较好的结合能力。结论从网络药理学的角度对“当归-鸡血藤”药对治疗肾性贫血可能的靶标和信号通路进行探讨,为其改善肾性贫血提供一定理论依据。

鸡血藤治疗糖尿病周围神经病变的网络药理学研究及机制探讨

目的采用网络药理学及分子对接技术探究鸡血藤治疗糖尿病周围神经病变(diabetic peripheral neuropathy,DPN)的活性成分及机制。方法基于TCMSP、GeneCards、String、Uniprot等数据库获取鸡血藤活性成分及DPN靶点,利用GO、KEGG数据库进行功能富集分析,对预测的关键活性化合物和靶点进行分子对接实验。使用UPLC-MS/MS测定鸡血藤水提物化学成分,结合网络药理学推测鸡血藤对DPN可能发挥作用的成分,并通过细胞实验验证鸡血藤活性成分芒柄花黄素对高糖环境下雪旺细胞的保护作用。结果鸡血藤治疗DPN的可能机制是通过作用于白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)、信号传导转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)等靶点影响DPN的AGE-RAGE信号通路,黄酮类化合物是其发挥疗效的物质基础。鉴定出鸡血藤水提物中9种化学成分,包括芒柄花黄素、芒柄花苷等。细胞实验证实芒柄花黄素通过抑制STAT3-NFκB信号通路减轻高糖引起的雪旺细胞(schwann cell,SCs)炎症反应,减少SCs凋亡,具有抗DPN的潜力。结论鸡血藤中以芒柄花黄素为代表的黄酮类成分可能通过抑制AGE-RAGE通路中的炎症反应治疗DPN。

“鸡血藤-海风藤”抗风湿作用机理的网络药理学研究

目的:通过数据挖掘“鸡血藤-海风藤”抗风湿的物质基础及作用机理。方法:通过TCMSP数据库获取“鸡血藤-海风藤”药对的成分,并以OB≥30%、DL≥0.18进行筛选,获取筛选后有效成分的基因靶点,在OMIM、TTD、CTD、Gene Cards等数据库中以“rheumatoid”为关键词进行疾病靶点检索,两者取交集,利用Cytoscape-v 3.8.2软件绘制网络图,利用R语言进行GO和KEGG富集分析,并分析相关数据。结果:共获得45个有效成分和24个共有关键靶点。通过药物-成分-疾病-靶点网络结果分析,其有效成分可能为木犀草素、芒柄花黄素、β-谷甾醇;关键靶点可能是PTGS2、PTGS1、MAPK14,主要富集于TH17细胞分化、PI3K-Art和TNF等信号通路。结论:“鸡血藤-海风藤”药对中的木犀草素、芒柄花黄素、β-谷甾醇等成分很可能通过PTGS2、PTGS1、MAPK14等靶点作用于TH17细胞分化、PI3K-Art和TNF等多条信号通路发挥抗风湿作用。

基于GEO数据库和网络药理学探讨鸡血藤-络石藤治疗强直性脊柱炎的作用机制

目的联合GEO数据库和网络药理学探讨鸡血藤-络石藤治疗强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)的作用机制。方法采用TCMSP筛选出鸡血藤-络石藤的中药有效成分。检索DrugBank、GeneCards及DisGeNET数据库中关于AS的疾病靶点。从Gene Expression Omnibus(GEO)数据库筛选得到GSE25101的芯片数据集,并借助R软件4.2.2进行差异基因分析后,汇总至AS疾病基因靶点。利用Cytoscape 3.9.1软件构建“中药-有效成分-靶点”网络图,并通过String平台构建蛋白质相互作用网络,筛选得到核心靶点。利用DAVID数据库对交集基因进行富集分析。运用AutoDock Vina软件进行分子对接。结果本研究共筛选得到鸡血藤-络石藤治疗AS的靶点50个,有效成分31个,涉及IL17、TNF、炎症性肠病等多条信号通路。分子对接结果显示,木犀草素、刺芒柄花素等主要成分与CAT、MMP9、TNF、IL6等核心靶点有较好的结合潜力。结论鸡血藤-络石藤可能通过调控炎症反应等基因进而发挥治疗AS的作用。

基于网络药理学和分子对接探讨鸡血藤治疗糖尿病肾病的作用机制研究

目的运用网络药理学和分子对接探讨鸡血藤治疗糖尿病肾病(DKD)的潜在作用机制。方法通过检索多个数据库筛选出鸡血藤活性成分和核心靶点,借助Drugbank、TTD、OMIM、Genecard、PharmGkb数据库收集DKD作用靶点,运用Venny 2.1.0获取鸡血藤与DKD的交集靶点基因。使用STRING数据库构建蛋白相互作用(PPI)网络,并使用Cytoscape软件和CytoNCA插件进行分析筛选出核心靶点。然后进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析。最后,使用AutoDock Tools软件通过分子对接技术验证活性化合物与核心靶点的结合能力。结果挖掘出24种鸡血藤的关键活性成分,DKD靶点12818个,有48个二者的交集靶点基因。筛选出鸡血藤活性成分3种(芦荟大黄素、木犀草素、甘草查尔酮a),核心靶点基因4种[热休克蛋白90 Alpha家族A级成员1(HSP90AA1)、MYC原癌基因(MYC)、肿瘤蛋白p53(TP53)、信号传感器和转录激活剂3(STAT3)]。GO功能共富集498个条目,KEGG通路共富集61个条目。分子对接技术验证了3种活性化合物与其作用的关键靶点具有可靠的亲和力。结论推测鸡血藤治疗DKD具有多成分-多靶点-多途径的特点,为进一步研究鸡血藤治疗DKD的分子机制提供了新的思路。

黄芪桂枝五物汤加味治疗气虚血瘀型椎动脉型颈椎病临床研究

目的观察葛根、鸡血藤合黄芪桂枝五物汤治疗气虚血瘀型椎动脉型颈椎病临床疗效。方法将80例椎动脉型颈椎病气虚血瘀型患者随机数字表分为2组,观察组40例予中药颗粒葛根、鸡血藤合黄芪桂枝五物口服治疗,对照组予成药颈复康颗粒口服治疗。2组治疗一疗程统计疗效,比较2组治疗前后临床症状和体征评价、经颅多普勒(TCD)检测、脑干听觉诱发电位(BAEP)、血生化的血一氧化氮(NO)、神经元特异性烯醇酶(NSE)、超氧化物歧化酶(SOD)参数变化情况。结果规范疗程治疗后,观察组临床症状和体征评价优于对照组(P<0.05);2组在经颅多普勒检测中左右基底动脉(BA)、椎动脉(VA)、血管搏动指数(PI)参数均有提高,与观察组比较对照组实验参数改变更显著(P<0.05);2组血生化血一氧化氮(NO)、神经元特异性烯醇酶(NSE)、超氧化物歧化酶(SOD)治疗后均有改善,观察组在改变血管方面更优于对照组(P<0.05)。结论黄芪桂枝五物汤加味治疗气虚血瘀型椎动脉型颈椎病患者能消炎、镇痛,改善颈椎椎动脉血流变化,促进神经修复,缓解临床症状。

鸡血藤有效成分研究

目的 :研究鸡血藤原植物密花豆Spatholobussuberectus的有效成分。方法 :利用各种色谱技术进行分离纯化 ,根据理化性质和各种波谱技术进行结构鉴定。结果 :分离鉴定了 8个化合物 ,分别为芒柄花苷 (ononin ,1) ,樱黄素 (prunetin ,2 ) ,没食子儿茶素 (gallocatechin ,3) ,儿茶素 (catechin ,4 ) ,表儿茶素 (epicatechin ,5 ) ,丁香酸 (syringicacid ,6 ) ,香草酸 (vanillicacid ,7) ,胡萝卜苷 (daucosterol,8)。结论 :化合物 3,4 ,6 ,7为首次从密花豆属中分离得到。其中化合物

快速液相法同时测定鸡血藤原儿茶酸、儿茶素和表儿茶素的含量

【目的】建立快速液相色谱法同时测定鸡血藤药材中原儿茶酸、儿茶素、表儿茶素含量。【方法】采用Phenomenex Kinetex XB-C18（4.6 mm×100 mm,2.6μm）色谱柱,以乙腈—磷酸—水为流动相,等度洗脱（体积比为10∶90）,流速1.3mL/min,柱温25℃,检测波长260 nm,进样体积2μL。【结果】原儿茶酸、儿茶素、表儿茶素的线性范围分别0.091 6～0.549 6μg（r=0.999 7）、0.772～3.86μg（r=0.999 4）、0.670 5～4.023μg（r=0.999 7）;平均加样回收率分别为102.96%（sR=1.62%）、99.44%（sR=2.68%）、97.34%（sR=1.88%）。【结论】该方法简便、快捷,可用于鸡血藤中原儿茶酸、儿茶素、表儿茶素的含量测定,可为鸡血藤的质量控制研究提供参考。

应用网络药理学对鸡血藤治疗动脉粥样硬化的机制探讨

目的:预测鸡血藤在治疗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的主要活性成分的作用靶点,来探究其多成分-多靶点-多通路的作用机制。方法:借助中药系统药理学分析平台(TCMSP)检索鸡血藤的化学成分及作用靶点。在借助OMIM、Drugbank、TDD等数据库检索AS相关基因,并根据UniProt数据库分析靶点所对应的基因。应用Cytoscape 3.6.1构建化合物靶点关系网络,应用STRING数据库构建蛋白质相互作用关系网络,最后在DAVID数据库进行基因本体(GO)功能富集分析和基于京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果:化合物靶点关系网络包括23个化合物和对应的110个靶点,其中涉及关键靶点包括BCL2,BAX,CASP9,JUN,CASP3,CASP8,PRKCA,PON1,NOS2,ESR1,AR等。GO功能富集分析得到GO条目535个,其中涵盖生物过程(BP)条目415个,涵盖分子功能(CC)43个,涵盖细胞组成(MF)77个。在KEGG通路富集筛选得到117条信号通路,其中已证实与AS相关的28条信号通路,包括HIF-1信号通路、TNF信号通路、PI3K-Akt信号通路、FoxO信号通路等通路。结论:鸡血藤中活性成分主要通过PRKCA、IL6、AKT1等靶点调节炎症相关通路来治疗AS。

鸡血藤商品药材质量评析

目的对鸡血藤商品药材质量现状进行分析与评价。方法观察与描述鸡血藤药材断面的性状特征；依照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录XA方法测定醇溶性浸出物含量；采用高效液相色谱法同时测定鸡血藤中原儿茶酸、儿茶素、表儿茶素的含量。结果鸡血藤商品药材饮片的直径大小及其断面含树脂的环纹数均具有较明显的差异；醇溶性浸出物在5．80～10．47％之间；原儿茶酸、儿茶素、表儿茶素含量分别为0．005％～0．024％，0．021％～0．133％，0．029％～0．266％。结论鸡血藤商品药材质量差异较大，部分商品药材尚未达到入药要求。

鸡血藤高效液相色谱指纹图谱研究

目的 建立鸡血藤的高效液相色谱指纹图谱 ,以评价鸡血藤的质量。方法 用 HPL C法获得鸡血藤药材的色谱图 ,再用聚类分析方法进行考察。结果 鸡血藤共有 11个峰 ,其中非共有峰 6个 ,共有峰 5个 ,共有峰的相对保留时间分别为 :0 .0 4 6 ,0 .6 6 4 ,1.0 0 0 ,1.198,1.383;相对峰面积分别为 :0 .819,0 .2 2 1,1.0 0 0 ,0 .331,0 .4 5 8。鸡血藤及其混淆品种的色谱指纹图谱存在明显差异 ,所提取的 11个色谱峰可作为指纹特征。结论 HPL C色谱指纹图谱分析技术可用于鸡血藤药材的鉴别。

光谱匹配算法应用于鸡血藤与大血藤的太赫兹光谱区分

鸡血藤和大血藤是药效、产地不同而外形极相似的两种不同的藤茎类药材,使用时极易混淆。利用太赫兹时域光谱技术获得测试样品太赫兹频谱,并结合光谱匹配算法分辨五种不同产地、不同批次的鸡血藤和大血藤。因中药化学成分的复杂性导致其不同成分的特征频谱发生相互的混叠,使得鸡血藤和大血藤的太赫兹时域数谱均没有出现明显的特征峰。重复实验测试同一样品同一位置10次,通过计算得到不同频率下光谱数据的标准差。数据在0.2~1.3THz范围内有较好的稳定性。对光谱数据进行二阶微分处理,使光谱间的微小差异得以显现。选取0.2~1.3THz以及0.2~2范围内的光谱数据进行对比研究,分别使用相关系数法、分段编码法、光谱角法和信息散度法四种光谱匹配算法对实验数据所属类别进行判定。数据分析结果:在0.2~1.3THz范围内,光谱角算法对鸡血藤与大血藤的太赫兹光谱数据有最好的分类效果,对两类中药样品总计100组数据的分类正确率达到95%。为易混中药的鉴定区分提供了一种新的技术与方法。

鸡血藤药材中原儿茶酸的含量测定

建立测定鸡血藤药材中原儿茶酸含量的方法，并对制备供试品溶液的提取溶剂、提取方法、提取次数、药材粒度等进行了考察优化。采用高效液相色谱法，色谱柱：Diamonsil C18色谱柱（250×4．6mm，5um）；流动相为乙腈-φ：0．5％醋酸水（体积比为10：90）；流速为1．0mL·min-1；检测波长为260nm。优化所得供试品溶液的制备方法，药材加水回流提取3次，每次1．5h，合并提取液并浓缩至小体积，用乙酸乙酯萃取4次，合并乙酸乙酯萃取液，浓缩后的残渣用甲醇-水（体积比为1：1）溶解并定容，即得。经系统的方法学考察，所建立的方法在原儿茶酸浓度为8．56—214ug·mL-1范围内线性良好（R2=0．9997），平均加样回收率为99．2％，RSD为2．8％，市售7个批次鸡血藤药材中原儿茶酸的含量为65．81—122．35ug·g-1。该方法准确，重复性好，可用于鸡血藤药材的质量控制。

基于26S rDNA D1-D3区序列分析的鸡血藤及其混淆品的分子鉴别

【目的】利用26S rDNA D1-D3区序列差异鉴别鸡血藤及其混淆品。【方法】使用改良十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法提取鸡血藤及其混淆品的总DNA,选择浓度较高的样品作为模板DNA,对26S rDNA D1-D3区进行PCR扩增、测序和序列比对分析。【结果】获得26S rDNA D1-D3区长约700 bp的序列。比对结果显示,不同产地之间鸡血藤的序列一致率为96%和100%,混淆品与正品比较的序列一致率为80%～96%。在26S rDNA D1-D3区384～472 bp的位置有足够的碱基差异位点用以区分鸡血藤及其混淆品。【结论】26S rDNA D1-D3区序列可以应用于鉴别鸡血藤及其混淆品。

鸡血藤化学和药理研究进展

本文对鸡血藤的化学及药理研究进展进行了综述