类叶牡丹提取物对TNF-α诱导的人类风湿性关节炎成纤维滑膜细胞因子的影响

目的利用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人类风湿性关节炎成纤维滑膜细胞(MH7A)对细胞因子分泌的影响来探讨类叶牡丹提取物(Caulophyllum robustum Maxim Extract,CRME)抗类风湿性关节炎(RA)的分子机制。方法采用噻唑蓝(MTT)法检测CRME对MH7A细胞活力的影响,选取半数抑制浓度(IC_(50))以下的药物浓度作为干预剂量;ELISA法检测CRME(50,100,500μg·mL^(-1))剂量对TNF-α(20 ng·mL^(-1))诱导MH7A细胞释放白介素-6(IL-6)、白介素-4(IL-4)、血管内皮生长因子(VEGF)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、促凋亡因子Bax、Fas L和抗凋亡因子Bcl-2的影响。结果 CRME在质量浓度为50μg·mL^(-1)~500μg·mL^(-1)对细胞活力均无影响,IC_(50)值为645.32μg·mL^(-1)。与空白组比较,模型组细胞上清中IL-4、IL-6、VEGF、RANKL、Bax、Bcl-2和Fas L含量均显著提高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,CRME各剂量组均能降低IL-6水平及升高IL-4水平(P<0.01);CRME 100,500μg·mL^(-1)剂量组能明显降低VEGF的表达(P<0.05),且具有浓度依赖性;CRME 500μg·mL^(-1)剂量组能明显降低RANKL含量(P<0.01);CRME 100μg·mL^(-1)剂量组可促进Fas L的表达(P<0.01);CRME 50μg·mL^(-1)剂量组可降低Bcl-2的表达(P<0.05);CRME各剂量组均可促进Bax的表达(P<0.01)。结论减轻炎症、降低血管翳形成、增加骨保护,促进异常增生的滑膜细胞的凋亡可能是CRME抗类风湿性疾病的机理之一。

类叶牡丹提取物经NF-κB信号通路对类风湿关节炎滑膜细胞凋亡与炎症因子的作用机制

目的:研究类叶牡丹提取物(CRME)经NF-κB信号通路对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞凋亡与炎症因子的作用机制。方法:纳入2019年1-12月于本院接受关节清理术治疗的RA患者25例进行研究。采集所有患者的滑膜组织4份,分成模型组、低剂量组、中剂量组及高剂量组,各25份。另取同期于本院接受诊治的25例非RA患者滑膜组织作为对照组。其中模型组及对照组均不予以任何处理,低、中、高剂量组分别予以50、100、500 μg/ml的CRME进行处理。采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测各组滑膜细胞凋亡情况,以酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组IL-6、IL-4、VEGF及Bax、FasL、Bcl-2表达水平,采用Western boltting法检测p50、p65、IκBα水平。结果:模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组细胞抑制率均呈逐渐升高趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组细胞IL-4、IL-6、VEGF水平均显著高于对照组,低剂量组、中剂量组、高剂量组IL-4水平均显著高于模型组,IL-6、VEGF水平均显著低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组细胞Bax、FasL、Bcl-2水平均显著高于对照组,低剂量组、中剂量组、高剂量组Bax、FasL水平均显著低于模型组(P<0.05),Bcl-2水平高于模型组(P<0.05)。模型组细胞p50、p65、IκBα表达水平显著高于对照组,且低剂量组、中剂量组、高剂量组p50、p65、IκBα表达水平显著低于模型组(P<0.05)。结论:CRME主要是通过调节NF-κB信号通路,从而抑制炎症因子、抗凋亡因子的表达,同时促进促凋亡因子的表达,进一步发挥治疗RA的作用。

类叶牡丹提取物通过NF-κB信号通路影响类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的增殖及凋亡

目的:研究类叶牡丹提取物(Caulophyllum robustum Maxim extract,CRME)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)的增殖和凋亡的影响及相关分子机制。方法:取RA患者和非RA患者的滑膜组织,分离培养FLS,采用MTT法检测50、100、500μg/ml CRME和NF-κB信号通路抑制剂(PDTC)对FLS细胞活力的影响;采用ELISA法检测各剂量CRME对各组细胞白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-4(IL-4)、血管内皮生长因子(VEGF)、Bax、Bcl-2和p65表达水平的影响;采用Annexin V-FITC流式双染检测CRME、PDTC对FLS细胞凋亡的影响。结果:RA-FLS组细胞增殖活性较正常组升高(P<0.05),RA-FLS+PDTC组和RA-FLS+各剂量CRME组RA-FLS细胞增殖活性较RA-FLS组降低(P<0.05)。和正常组比较,RA-FLS组细胞的IL-6、IL-4、VEGF、Bcl-2和p65表达水平升高(P<0.05);和RA-FLS组比较,RA-FLS+PDTC组和RA-FLS+50、100、500μg/ml CRME组RA-FLS细胞的IL-6表达水平降低,Bax表达水平升高(P<0.05),RA-FLS+PDTC组和RA-FLS+100、500μg/ml CRME组RAFLS细胞的IL-4表达水平升高(P<0.05),RA-FLS+500μg/ml CRME组RA-FLS细胞的VEGF表达水平降低(P<0.05),RA-FLS+PDTC组和RA-FLS+500μg/ml RA-FLS细胞的p65表达水平降低(P<0.05)。和RA-FLS组比较,RA-FLS+PDTC组和RA-FLS+100、500μg/ml CRME组RA-FLS细胞凋亡率均升高(P<0.05)。结论:CRME可降低VEGF水平,进而抑制血管翳形成,通过抑制NF-κB信号通路,减轻炎症反应,促进FLS凋亡,进而发挥抗RA的药理作用。