补阳还五汤对Cav-1敲除小鼠脑缺血后mTOR通路的影响

目的探讨小窝蛋白(caveolin-1,Cav-1)对脑缺血后哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路的影响及补阳还五汤抗脑缺血的可能作用机制。方法将Cav-1基因敲除(knock out,KO)与野生型(wild type,WT)小鼠随机分为KO假手术组、KO模型组、KO补阳还五汤组(补阳组)、WT假手术组、WT模型组及WT补阳组。采用大脑中动脉栓塞法建立脑缺血模型,干预14 d后观察小鼠神经功能评分;免疫组化检测大脑mTOR、磷酸化核糖体S6蛋白激酶(phospho-ribosomal S6 kinase,p-S6K1)、磷酸化真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白-1(phospho-eukaryotic initiation factor 4E-binding protein 1,p-4EBP1)的蛋白表达;qRT-PCR检测大脑mTOR的mRNA水平。结果与同类假手术组比较,其他4组神经功能评分、mTOR、p-S6K1、p-4E-BP1蛋白表达及mTOR mRNA表达明显上升(P<0.01);与同类模型组比较,KO补阳组、WT补阳组神经功能评分明显下降(P<0.01),各蛋白表达与mRNA表达明显上升(P<0.01);与WT模型组比较,KO模型组神经功能评分上升(P<0.05),各蛋白与m RNA表达明显下降(P<0.01);与WT补阳组比较,KO补阳组神经功能评分明显上升(P<0.01),各蛋白及m RNA明显下降(P<0.01)。结论Cav-1基因的缺失会导致mTOR通路活性降低并加重脑缺血后神经功能损伤;补阳还五汤可能通过Cav-1调控mTOR信号通路的活性,发挥抗脑缺血损伤的作用。

补阳还五汤对Cav^-1-/-小鼠脑缺血模型PI3K、Akt、PTEN表达的影响

目的观察补阳还五汤对Cav-1^-/-小鼠脑缺血模型PI3K、Akt、PTEN表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法将野生型小鼠(WT)及Cav-1^-/-小鼠(KO)随机分为假手术组、模型组与补阳组。采用大脑中动脉栓塞法制备脑缺血模型,干预10 d后运用Ayelet Levy 14分评分法观察小鼠神经功能评分。免疫组化和qRT-PCR分别检测小鼠脑组织PI3K、Akt、PTEN蛋白和mRNA的表达。结果与假手术组比较,各模型组小鼠均出现明显神经功能障碍(P<0.01),且PI3K、Akt蛋白和mRNA表达明显升高(P<0.01),PTEN蛋白和mRNA表达明显降低(P<0.01),WT模型组小鼠脑组织PI3K、Akt、PTEN蛋白和mRNA表达更显著,且神经功能评分优于KO模型组(P<0.01,P<0.05);WT补阳组小鼠脑组织PI3K、Akt、PTEN蛋白和mRNA的调控程度及神经功能恢复程度均优于WT模型组和KO补阳组(P<0.01)。结论补阳还五汤可能通过Cav-1调控PI3K/Akt信号通路活性,发挥抗脑缺血损伤的作用。

Caveolae在剪切力诱导过氧化氢引起小鼠肠系膜动脉舒张中的作用

目的探讨Caveolae在剪切力诱导的过氧化氢引起小鼠肠系膜动脉舒张中的作用。方法随机选取野生型或Cav-1基因敲除(Cav-1^(-/-))小鼠分离肠系膜动脉进行血管实验分组:野生型组,野生型+Catalase组,野生型去内皮(WT-endo)组,WT-endo+Catalase组,Cav-1^(-/-)组,Cav-1^(-/-)去内皮(Cav-1^(-/-)-endo)组,Cav-1^(-/-)+Catalase组和Cav-1^(-/-)-endo+Catalase组(n=5),进行剪切力诱导的血管舒张(SSD)实验。细胞实验:(1)分别给予小鼠主动脉内皮细胞0、0.5、1h剪切力[15dyn/cm^(2)(1dyn=10-5N)],处理;(2)选取小鼠主动脉内皮细胞分为对照组,阴性对照组和Cav-1敲减组(n=11),在剪切力下,采用Westernbolt检测Cav-1和超氧化物歧化酶(SOD1)及Catalase蛋白表达。结果与野生型组比较,Cav-1^(-/-)组25dyn/cm^(2)剪切力的SSD百分比明显下降[(20.4±1.9)%vs(58.4±1.1)%,P=0.000],WT-endo组25dyn/cm^(2)剪切力的SSD百分比明显下降[(23.9±1.3)%vs(58.4±1.1)%,P=0.000]。Cav-1^(-/-)组与Cav-1^(-/-)-endo血管组中SSD百分比比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与野生型组比较,野生型+Catalase组剪切力25dyn/cm^(2)时SSD百分比明显降低,差异有统计学意义(P=0.000)。WT-endo组与WT-endo+Catalase组SSD百分比比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与细胞施剪切力0h比较,当小鼠主动脉内皮细胞施加剪切力1h后,细胞中SOD1和Catalase表达明显增加(P<0.05,P<0.01)。Cav-1^(-/-)组与Cav-1^(-/-)+Catalase组血管SSD百分比比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Cav-1^(-/-)-endo组与Cav-1^(-/-)-endo+Catalase组SSD百分比比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论Caveolae促进剪切力诱导内皮细胞释放H2O2引起SSD。