补阳还五汤对Cav1/Notch1/Hes1通路在小鼠脑缺血后海马NSCs增殖中的作用

目的探讨Cav1/Notch1/Hes1通路在小鼠脑缺血后海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖中的作用及补阳还五汤促神经再生的机制。方法采用大脑中动脉阻塞法(middle cerebral artery occlusion,MCAO)复制小鼠脑缺血模型,将野生型(wild type,WT)和小凹蛋白-1基因敲除小鼠(caveolin1 gene knockout,Cav1 KO)分别随机分为假手术组、模型组、补阳组,每组12只,腹腔注射Brd U标记增殖细胞,干预7 d后,采用免疫荧光Brd U/Nestin双标法检测小鼠缺血侧海马NSCs增殖情况,Western blot法检测Notch1、NICD、Hes1蛋白表达,Real time PCR法检测Notch1、Hes1m RNA表达。结果 MCAO法成功复制了小鼠脑缺血模型;WT模型组、补阳组和KO模型组、补阳组缺血侧海马Brd U/Nestin双标阳性细胞,Notch1、NICD、Hes1蛋白表达及Notch1、Hes1m RNA表达均增加,与相应假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05),同时,WT模型组要高于KO模型组(P<0.05),WT补阳组要高于WT模型组和KO补阳组(P<0.01,P<0.05)。结论Cav1/Notch1/Hes1通路在小鼠脑缺血后海马NSCs增殖中发挥重要调控作用;通过上调Cav1/Notch1/Hes1通路活性是补阳还五汤促进缺血海马神经再生作用机理之一。

牛蒡子苷元调控Notch/Hes-1信号通路对口腔鳞状细胞癌HSC-3细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的:探究牛蒡子苷元(ARC)通过调控Notch/Hes-1信号通路对口腔鳞状细胞癌(OSCC)HSC-3细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及其机制。方法:使用不同质量浓度的ARC处理人HSC-3细胞,CCK-8法检测ARC对细胞增殖活力的影响,以选择适宜的药物浓度。将HSC-3细胞分为对照组、ARC-L组(10 mg/L ARC)、ARC-M组(20 mg/L ARC)、ARC-H组(40 mg/L ARC)和ARC-H+Jagged1/FC组(40 mg/L ARC+1.2μg/mL Jagged1/FC)。采用EdU法检测细胞增殖能力,划痕愈合实验、Transwell实验和流式细胞术分别检测细胞的迁移、侵袭能力及细胞周期和细胞凋亡率,WB法检测增殖(c-Myc、cyclin D1)、凋亡(BAX、Bcl-2、survivin)、EMT(E-cadherin、vimentin、Snail)及Notch/Hes-1通路(Notch 1、Hes-1、NICD)相关蛋白的表达水平。结果:与0 mg/L相比,10~80 mg/L的ARC均能显著降低HSC-3细胞增殖活力(均P<0.05)。与对照组相比,ARC-L组、ARC-M组和ARC-H组HSC-3细胞EdU阳性率、划痕愈合率、侵袭细胞数、S期和G2/M期细胞占比及c-Myc、cyclin D1、Bcl-2、survivin、vimentin、Snail、Notch 1、Hes-1和NICD蛋白表达均显著降低(均P<0.05),细胞凋亡率、G0/G1期细胞占比及BAX、E-cadherin的蛋白表达均显著升高(均P<0.05),且呈浓度梯度依赖性。同时使用Notch激动剂Jagged1/FC,则可部分逆转ARC对HSC-3细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡及相关蛋白表达的作用(均P<0.05)。结论:ARC可能通过抑制Notch/Hes-1信号通路抑制OSCC细胞HSC-3增殖和侵袭并促进细胞凋亡。

基于Notch1/Jagged1/RBP-Jκ/Hes1信号通路调控巨噬细胞极化探讨复方雷公藤制剂改善关节炎症的机制

目的基于Notch1/Jagged1/RBP-Jκ/Hes1信号通路调控巨噬细胞极化探讨复方雷公藤制剂对佐剂关节炎大鼠关节炎症的影响。方法将30只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、复方雷公藤组、甲氨蝶呤组、Notch1抑制剂组,每组6只,除正常组外,其余组大鼠构建佐剂关节炎模型。致炎后第19天开始,复方雷公藤组给予340 mg/L复方雷公藤制剂混悬液灌胃,每天1次;甲氨蝶呤组给予0.95 mg/L甲氨蝶呤混悬液灌胃,每周1次;Notch1抑制剂组给予0.56 mg/L Notch1抑制剂混悬液尾静脉注射,隔天1次;正常组及模型组给予生理盐水灌胃,每天1次。各组均连续干预30 d。检测各组大鼠足趾肿胀度、关节炎指数;末次灌胃结束后,HE染色观察关节滑膜组织病理学形态,ELISA法检测血清IL-1β、IL-4、IL-10、IL-13、TNF-α水平,流式细胞术检测外周血炎症极化标志物CD86、CD206表达情况,免疫组化及免疫印迹法检测关节滑膜组织中Notch1、Jagged1、RBP-Jκ、Hes1蛋白表达情况。结果与正常组比较,模型组大鼠足趾肿胀度、关节炎指数、外周血CD86表达占比及血清IL-1β、TNF-α水平和关节滑膜组织中Notch1、Jagged1、RBP-Jκ、Hes1蛋白相对表达占比均明显升高(P均<0.05),外周血CD206表达占比及血清IL-4、IL-10、IL-13水平均明显降低(P均<0.05);与模型组比较,复方雷公藤组、甲氨蝶呤组、Notch1抑制剂组大鼠足趾肿胀度、关节炎指数(除Notch1抑制剂组)、外周血CD86表达占比及血清IL-1β、TNF-α水平和关节滑膜组织中Notch1、Jagged1、RBP-Jκ、Hes1蛋白相对表达占比均明显降低(P均<0.05),外周血CD206表达占比及血清IL-4、IL-10、IL-13水平均明显升高(P均<0.05)。结论复方雷公藤制剂可有效减轻佐剂关节炎大鼠关节炎症反应,其机制可能与抑制Notch1/Jagged1/RBP-Jκ/Hes1信号通路轴调控巨噬细胞极化,抑制促炎细胞因子的分泌有关。

蓝莓花青素调控Notch1/Hes-1通路对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞氧化损伤的影响及机制研究

目的探讨蓝莓花青素(BA)对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞(RGC)氧化损伤的影响及可能的作用机制。方法将50只雄性SD大鼠随机分为正常组(NC组,n=10)和造模组,造模组一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)50 mg/kg,构建糖尿病模型,造模成功后再随机分为糖尿病模型组(DM组)、蓝莓花青素组(BA组)、DAPT组(Notch1通路抑制剂)和蓝莓花青素+DAPT组(BA+DAPT组),每组10只。BA组每天给予20 mg/kg的BA灌胃,DAPT组给予10μmol/L的DAPT干预,BA+DAPT组给予20 mg/kg的BA灌胃+10μmol/L的DAPT干预,NC组和DM组用等量0.9%氯化钠溶液(生理盐水)灌胃,连续8周。于末次给药24 h后,摘取大鼠眼球,用酶联免疫吸附分析(ELISA)试剂盒检测各组大鼠视网膜组织中活性氧(ROS)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量;苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠视网膜组织病理变化,并进行RGC计数;用荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)测量HO-1和iNOS mRNA表达;Western blot法检测Notch1和Hes-1蛋白的表达。结果建模后,DM组、BA组、DAPT组和BA+DAPT组空腹血糖(FBG)值均大于16.7 mmol/L;经BA干预治疗后,BA组和BA+DAPT组FBG含量明显降低,BA组低于BA+DAPT组(P<0.05)。ELISA结果表明,与NC组比较,DM组视网膜组织中ROS和MDA含量升高,CAT和SOD含量降低(P<0.05);与DM组比较,BA组和BA+DAPT组视网膜组织中ROS和MDA水平下降,CAT和SOD水平显著上升(P<0.05)。光学显微镜观察显示,NC组视网膜结构清晰,细胞形态正常,排列整齐;DM组大鼠RGC层排列紊乱,内、外核层伴随有水肿,出现了空泡现象,视网膜厚度变薄;BA组大鼠视网膜层结构排列较整齐,水肿程度和视网膜厚度较DM组有一定的改善;BA+DAPT组大鼠视网膜组织较DM组有所改善,但视网膜厚度相比BA组还是较薄。RGC计数结果显示,DM组、BA组、DAPT组和BA+DAPT组RGC数量分别为7.35±1.28、12.05±1.52、5.61±1.72、8.72±1.19,明显低于NC组的16.63±1.54,组间差异有统计学意义(F=88.905,P<0.05)。qRT-PCR结果表明,NC组、DM组、BA组、DAPT组和BA+DAPT组大鼠视网膜组织中HO-1水平分别为1.28±0.32、0.68±0.15、1.03±0.19、0.50±0.13和0.73±0.11,iNOS水平分别为0.48±0.08、1.17±0.21、0.89±0.17、1.35±0.15和1.10±0.23,差异均有统计学意义(F=25.192、35.843,P<0.05)。Western blot结果显示,与NC组相比,DM组视网膜组织中Notch1和Hes-1蛋白表达均下调;与DM组比较,BA组Notch1和Hes-1蛋白表达水平均上调,DAPT组Notch1和Hes-1蛋白表达水平均下调,BA+DAPT组两蛋白表达低于BA组,组间差异有统计学意义(F=47.626、54.709,P<0.05)。结论BA可以降低糖尿病大鼠FBG,增强其抗氧化应激能力,改善视网膜组织病理学损伤,从而对神经节细胞起到保护作用,其作用机制可能与激活Notch1/Hes-1信号通路有关。

高良姜素调节Notch-1/Hes信号通路对胰腺癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨高良姜素(Gal)调节Notch-1/Hes信号通路对胰腺癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:将人胰腺癌PCNA-1细胞分为空白组、Gal低剂量组、Gal中剂量组、Gal高剂量组、Jagged1组、Gal高剂量+Jagged1组,EdU染色和CCK-8、划痕实验、Transwell实验分别检测PCNA-1细胞增殖、迁移、侵袭;qRT-PCR检测PCNA-1细胞中细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-2 mRNA表达;裸鼠体内移植瘤实验检测裸鼠体内肿瘤质量与体积;Western blot检测PCNA-1细胞及肿瘤组织中Notch-1、Hes1蛋白表达。结果:与空白组相比,Gal低剂量组、Gal中剂量组、Gal高剂量组PCNA-1细胞EdU阳性细胞率、OD 450值、划痕愈合率、细胞侵袭数目、Cyclin D1、MMP-9、MMP-2 mRNA表达、PCNA-1细胞中Notch-1、Hes1蛋白表达降低,且呈剂量依赖性,Jagged1组对应指标变化趋势与上述相反(P<0.05);与Gal高剂量组相比,Gal高剂量+Jagged1组PCNA-1细胞EdU阳性细胞率、OD 450值、划痕愈合率、细胞侵袭数目、Cyclin D1、MMP-9、MMP-2 mRNA表达、PCNA-1细胞中Notch-1、Hes1蛋白表达升高(P<0.05)。与裸鼠-空白组相比,裸鼠-Gal低剂量组、裸鼠-Gal中剂量组、裸鼠-Gal高剂量组裸鼠肿瘤质量与体积、Notch-1、Hes1蛋白表达降低,且呈剂量依赖性(P<0.05),裸鼠-Jagged1组对应指标变化趋势与上述相反(P<0.05);与裸鼠-Gal高剂量组相比,裸鼠-Gal高剂量+Jagged1组裸鼠肿瘤质量与体积、Notch-1、Hes1蛋白表达升高(P<0.05)。结论:Gal抑制PCNA-1细胞增殖、迁移、侵袭及裸鼠体内肿瘤的生长,可能与抑制Notch-1/Hes通路有关。

ORY-1001靶向赖氨酸特异性去甲基化酶1下调胶质母细胞瘤Notch/HES1通路的表达并发挥抗肿瘤作用

目的 探究赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)抑制剂ORY-1001对胶质母细胞瘤(GBM)的抑瘤作用和机制。方法 从公开数据库(TCGA和HPA)下载相关数据,分析LSD1在GBM和正常脑中的表达情况。将24只雌性BALB/c小鼠,随机分为对照组与ORY-1001组,12只/组。肿瘤细胞种植后,每7 d用400μg/kg ORY-1001进行灌胃,检测肿瘤生长和动物生存时间,评估ORY-1001对GBM的抗肿瘤效应。检测A490 nm值测定ORY-1001对GBM细胞活力的影响。Western blotting检测ORY-1001对LSD1表达的影响。利用慢病毒试剂,构建稳定敲降LSD1的GBM细胞(sh-LSD1),并通过动物成瘤实验评估沉默LSD1在活体动物内的作用以检测LSD1药物抑制获得的表型特异性。运用生物信息学方法分析与LSD1相关的基因及通路。Western blotting检测沉默LSD1及不同剂量ORY-1001治疗后Notch/HES1通路的表达。通过慢病毒转染,构建稳定过表达Notch1(oeNotch1)的U87细胞。测定过表达Notch1后,ORY-1001对GBM动物模型肿瘤生长及生存时间的影响。通过ChIP揭示ORY-1001对Notch/HES1通路的具体调控机制。结果 LSD1在GBM中高表达,并与患者的预后呈负相关(P<0.001)。ORY-1001治疗以及LSD1基因沉默都使荷瘤动物肿瘤负荷减轻(P<0.05)和生存时间延长(P<0.001),对多种GBM细胞的活力均表现出抑制作用(P<0.05)。ORY-1001呈剂量依赖性地抑制LSD1的表达。Notch通路富集了与LSD1抑制相关的差异基因,LSD1沉默及ORY-1001治疗后Notch/HES1通路表达显著下调(P<0.05),逆转了ORY-1001对GBM的抗肿瘤作用(P<0.05)。结论 ORY-1001通过抑制GBM中LSD1的表达而下调Notch/HES1通路,并发挥抗肿瘤效应。

基于Notch1/Hes1通路分析替莫唑胺对肺癌干细胞增殖、分化的影响

目的基于Notch1/Hes1通路探讨和分析替莫唑胺抑制肺癌干细胞增殖、分化的影响作用及机制。方法选取2020年1月至2022年12月江西省新余市人民医院呼吸与危重症医学科收治的60例肺癌患者开展此次临床实践研究,对患者行肺癌干细胞A549(A549-SCs)分离培养,采用流式细胞术鉴定A549-CSCs,检测筛选肺癌干细胞。采用随机数字表法将筛选出的肺癌干细胞分为对照组和观察组,每组30例。对照组不作任何处理,观察组采用替莫唑胺进行处理,对比两组对肺癌干细胞活力抑制情况、对肺癌干细胞迁移能力的影响以及A549-CSCs的细胞分化能力相关因子Sox2和Oct4的mRNA水平。结果观察组肺癌干细胞mRNA及蛋白表达量、Notch1、Hes1蛋白表达量低于对照组,观察组A549-CSCs的细胞分化能力相关因子Sox2和Oct4的mRNA水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论基于Notch1/Hes1通路角度来看,替莫唑胺对于肺癌干细胞增殖、分化具有抑制作用,替莫唑胺主要是通过对肺癌干细胞Sox2、Oct4、mRNA蛋白表达产生抑制来实现上述功效。

miR-139-5p调控Notch/RBP-J/Hes1轴促进支气管哮喘骨髓间充质干细胞“归巢”

目的通过将哮喘支气管上皮细胞与骨髓间充质干细胞共培养方式,观察miR-139-5p调控Notch1信号通路对哮喘骨髓间充质干细胞归巢的影响。方法将大鼠骨髓间充质干细胞和支气管上皮细胞共培养,并予miR-139-5p mimics进行干预。实验分为阴性对照组(NC组:正常大鼠骨髓间充质干细胞+支气管上皮细胞共培养)、模型对照组(MC组:正常大鼠骨髓间充质干细胞+哮喘大鼠支气管上皮细胞共培养)、miR-139-5p mimics组(miR-139-5p mimics+MC)、miR-139-5p mimics-NC组(miR-139-5p mimics-NC+MC)。检测细胞活力和细胞周期变化;免疫荧光染色检测CXCR4、SDF-1表达;经细胞转染后观察miR-139-5p表达量和BMSCs归巢水平;免疫印迹观察Notch1/RBP-J/Hes1蛋白表达量;ELISA检测Th1、Th2相关因子表达情况。结果与NC组比较,MC组miR-139-5p、IL-2、IL-12表达量降低(P<0.05),BMSCs归巢水平增加,CXCR4、SDF-1、IL-5、IL-9表达升高(P<0.05),Notch1、RBP-J、Hes1 mRNA、蛋白表达升高(P<0.05)。与MC组、miR-139-5p mimics-NC组比较,miR-139-5p mimics组miR-139-5p、BMSCs归巢水平升高,CXCR4、SDF-1、IL-2表达升高(P<0.05),Notch1、RBP-J、Hes1mRNA、蛋白表达降低,IL-5、IL-9表达降低(P<0.05)。相关性分析显示,BMSCs归巢水平与miR-139-5p、IL-12呈正相关,SDF-1与miR-139-5p呈正相关(P<0.05);与IL-5表达呈负相关,CXCR4与Activated Notch1表达呈负相关,SDF-1与Notch1表达呈负相关(P<0.05)。结论miR-139-5p可能通过靶向Notch1信号通路促进哮喘骨髓间充质干细胞归巢,作用于Th1、Th2细胞因子表达,改善哮喘气道炎症。

Hes1调控AKT-MDM2-p53-PTEN通路的一种物理机制

基于Hill动力学与Michaelis-Menten方程,建立理论模型研究发状分裂相关增强子1(Hairy and enhancer of split 1,Hes1)调控蛋白激酶B(Protein Kinase B,AKT)-鼠双微体2(Murine Double Minute2,MDM2)-抗癌基因p53(p53)-第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)通路的一种物理机制.研究发现,Hes1通过与PTEN结合抑制PTEN表达,并调控AKT信号.表明了Hes1蛋白的合成,以及Hes1与PTEN相互作用调控AKT-MDM2-p53-PTEN通路信号,将会有效地控制细胞结果.Hes1作为AKT-MDM2-p53-PTEN信号通路中上游调节的重要因素,还可以在一定程度上通过影响p53蛋白功能,改变p53对肿瘤的抑制性.理论结果可用于预测Notch通路信号异常诱导的致癌性,并进一步揭示了Notch信号通路影响细胞AKT-MDM2-p53-PTEN通路的激活机制.

益气养阴活血中药对糖尿病肾病大鼠Notch/Hes1通路与血管内皮CD34、CD144的影响

目的观察益气养阴活血中药对糖尿病肾病大鼠Notch/Hes1通路与血管内皮CD34、CD144作用机制。方法采取左肾切除术+高脂高糖饲料喂养联合腹腔注射STZ复制早期糖尿病肾病大鼠模型,将建模成功的大鼠随机分为模型组、西药贝拉普利组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组,设正常对照组,药物干预8周。观察24 h尿白蛋白、HE染色肾组织病理、免疫组化肾组织Hes1、Western blot法检测CD34、CD144的表达。结果与正常组比较,模型组24 h尿白蛋白、Hes1、CD34、CD144的含量比较均有明显差异(P<0.05);与模型组比较,中药高剂量组、中剂量组能降低24 h尿蛋白(P<0.05),中药各剂量组均能明显降低肾组织Hes1、CD34含量(P<0.05),中药高剂量组均能明显降低肾组织CD144含量(P<0.05);与西药组比较,中药各剂量组均能降低CD34(P<0.05),中药低剂量组降低CD144(P<0.05)。病理观察模型组大鼠出现肾小球硬化、萎缩,系膜基质增多、系膜出现增厚增宽并可见结节样增生等改变;中药高、中剂量组对上述病理改变有积极改善。结论益气养阴活血中药可以降低模型大鼠肾组织Hes1和CD34、CD144,发挥对肾功能的保护作用,延缓DN的发展。

发酵虫草菌粉和泼尼松对急性马兜铃酸肾病大鼠肾小管Notch2／hes-1信号通路活化的影响

目的探讨发酵虫草菌粉及泼尼松对急性马兜铃酸肾病(acute aristolochic acid nephropathy,AAAN)大鼠肾小管上皮细胞Notch2/hes-1信号通路的影响。方法将50只SD大鼠随机分为正常组、模型组、发酵虫草菌粉组(CS组)、泼尼松组及CS加泼尼松组,每组10只。以马兜铃酸A纯品100mg/(kg·d)连续灌胃3天建立AAAN模型。CS组予发酵虫草菌粉5.0g/(kg·d)灌胃,泼尼松组予泼尼松0.5mg/(kg·d)灌胃,CS加泼尼松组予两药联合灌胃,连续3周。检测各组大鼠肾功能[尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)],HE染色观察肾脏病理改变,TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡,免疫组织化学法及Westernblot法检测大鼠肾组织Notch2、Hes-1蛋白表达。结果 HE染色结果显示,正常组大鼠肾组织结构正常;模型组大鼠出现肾小管坏死改变;泼尼松组、CS组及CS加泼尼松组肾小管病理明显改善。与正常组比较,模型组大鼠BUN和SCr水平、肾小管间质半定量评分、凋亡细胞比例以及Notch2、Hes-1蛋白表达均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,CS组、泼尼松组及CS加泼尼松组上述指标均显著降低(P<0.01)。以CS加泼尼松组降低更明显(P<0.05,P<0.01)。结论 Notch2/hes-1信号通路活化可能参与AAAN肾小管上皮细胞凋亡的发生。CS及泼尼松对AAAN有肾保护作用,但联合干预疗效更佳,其机制可能与抑制肾组织Notch2/hes-1信号通路活化有关。

Notch2/Hes-1信号通路活化参与调控肾缺血-再灌注诱导炎症因子的表达研究

目的观察肾缺血-再灌注(IR)大鼠肾小管Notch2/Hes-1信号通路的活化,及信号通路关键酶γ-泌肽酶抑制剂DAPT对血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、肾小管上皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响。方法 45只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血-再灌注组(I/R组)和γ-泌肽酶抑制剂组(DAPT组),每组15只,按先摘除右肾然后夹闭左肾蒂60 min的方法建立肾I/R模型。Sham组和I/R组手术前后灌服生理盐水2 ml/d,DAPT组手术前后灌服DAPT 500μg/(kg·d)。结果HE染色结果显示,Sham组大鼠肾小管间质未见明显病变;I/R组肾小管出现小管扩张、管腔内管型、刷状缘丢失、间质炎症细胞浸润等病变,小管损伤以I/R后24 h最重。I/R组大鼠24、48和72 h的尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr)、肾小管间质半定量计分、血清TNF-α和IL-6水平、肾小管Notch2、Hes-1、MCP-1蛋白表达比相同时间Sham组增高(P<0.01);而经DAPT处理后,小管结构较I/R组完整清晰,病理改变明显减轻。DAPT组BUN、Scr、肾小管间质半定量评分、血清TNF-α和IL-6水平、肾小管Notch2、Hes-1、MCP-1蛋白表达比相同时间I/R组大鼠降低(P<0.01)。结论肾I/R可诱导肾小管Notch2/Hes-1信号通路活化,并参与调控炎症因子IL-6、TNF-α、MCP-1表达,γ-泌肽酶抑制剂DAPT可能具有一定的肾保护作用。

阳和平喘颗粒通过上调miR-139-5p和下调Notch1/Hes1通路促进哮喘大鼠BMSCs归巢

目的观察阳和平喘颗粒对哮喘miR-139-5p、Notch1/Hes1信号通路及骨髓源性间充质干细胞(BMSCs)归巢的影响。方法50只SD大鼠随机均分为5组:正常对照(NC)组、模型对照(MC)组、BMSCs移植(BMSCs)组、BMSCs+地塞米松(BMSCs+DXM)组[地塞米松0.0625 mg/(kg·d)]、BMSCs+阳和平喘组[阳和平喘颗粒3.5 g/(kg·d)]。采用卵清蛋白致敏激发建立大鼠哮喘模型,BMSCs组、BMSCs+DXM组、BMSCs+阳和平喘组大鼠在激发最后1 d经尾静脉移植入1×106/mL BMSCs悬液。NC组、MC组以生理盐水灌胃,药物干预组分别予相应药物灌胃,灌胃量为1 mL/100 g,均持续1周。HE染色观察肺组织病理形态学,流式细胞术检测肺组织中CXCR4蛋白表达,酶联免疫吸附法检测肺组织γ干扰素(IFN-γ)、白介素-4(IL-4)表达。免疫荧光观察支气管上皮细胞CXCR4、Notch1、Hes1表达。RT-PCR法检测肺组织miR-139-5p、Notch1、Jagged1、RBP-J、Hes1基因表达,免疫印迹法检测肺组织Notch1、Jagged1、Hes1蛋白表达。结果(1)与NC组比较,MC组肺组织CXCR4、IL-4、Notch1mRNA、Jagged1mRNA、RBP-JmRNA、Hes1mRNA及Notch1、Jagged1、Hes1蛋白表达升高,INF-γ、miR-139-5p mRNA表达降低(P<0.05);(2)与MC组比较,BMSCs组、BMSCs+DXM组、BMSCs+阳和平喘组CXCR4、IFN-γ、miR-139-5pmRNA升高,IL-4、Notch1mRNA、Jagged1mRNA、RBP-JmRNA、Hes1mRNA及Notch1、Jagged1、Hes1蛋白表达降低(P<0.05);(3)与BMSCs组比较,BMSCs+阳和平喘组CXCR4、IFN-γ、miR-139-5pmRNA表达升高,IL-4、Notch1mRNA表达量降低(P<0.05)。结论阳和平喘颗粒通过上调miR-139-5p,下调Notch1/Hes1通路,强化BMSCs归巢对Th2炎症反应的抑制作用。

γ分泌酶抑制剂DAPT对庆大霉素致大鼠耳损伤及修复过程中听力及Notch2/hes1信号通路表达的影响

目的观察γ分泌酶抑制剂DAPT对庆大霉素致大鼠耳损伤及修复过程中听力变化及Notch2/hes1信号通路表达的影响。方法 72只成熟大鼠随机分成三组,每组24只;对照组给予生理盐水3ml.kg-1.d-1腹腔注射,连继10天,庆大霉素组给予Gen 120mg.kg-1.d-1腹腔注射,连继10天,DAPT组给予DAPT 5mg.kg-1.d-1腹腔注射,连用5天后停用2天,再用3天,同时腹腔注射Gen 120mg.kg-1.d-1,连继10天。各组注射前及注射后1、14、28天进行ABR检测后处死动物,应用免疫印迹蛋白、实时定量PCR观察大鼠Notch2/hes1信号通路的表达。结果对照组注射前后ABR反应阈无明显变化,与注射前相比,DAPT组和庆大霉素组注射后1、14、28天ABR阈值均明显升高,但随时间的延长阈值有所下降(P<0.05),其中,第28天DAPT组ABR反应阈较庆大霉素组下降明显(P<0.05);与对照组相比,DAPT组和庆大霉素组Notch2/hes1的表达均明显增高(P<0.05);与庆大霉素组相比,DAPT组的Notch2/hes1表达明显降低(P<0.05)。结论在庆大霉素致耳损伤及修复过程中,DAPT可能通过抑制Notch2/hes1信号通路减轻耳蜗毛细胞损伤并促进耳蜗毛细胞修复,进而促进听功能恢复。

金匮肾气丸对庆大霉素诱导肾损伤大鼠肾组织Notch2/hes1信号通路的影响

目的:动态观察肾气丸对Notch2/hes1通路在庆大霉素诱导肾损伤及修复过程中表达的影响。方法:72只大鼠随机分成空白组(生理盐水灌胃,6ml/kg;生理盐水腹腔注射,3ml/kg,1次/d,持继10d)、金匮肾气丸组(金匮肾气丸灌胃:0.6g·kg-1·d-1);Gen,120mg/kg(3ml/kg,1次/d,腹腔注射,持继10d)和模型组(生理盐水灌胃,6ml/kg;Gen,120mg/kg,1次/d,腹腔注射,持继10d)。应用光镜观察肾小管损伤情况;应用免疫印迹蛋白、实时定量PCR观察大鼠Notch2/hes1信号通路在造模后1、14、28d肾脏的动态表达情况。结果:肾脏病理切片显示:在第1、14天,与空白组相比,模型组、肾气丸组造成的肾脏损伤程度有所不同;在第28天,各组肾小管基本恢复正常。免疫印迹蛋白、RT-PCR显示:在第1、14天,与空白组相比,模型组和金匮肾气丸组Notch2/hes1的表达明显增高(P<0.05);在第28天,各组表达差异无统计学意义(P>0.05);在第1、14天,与模型组相比,金匮肾气丸组Notch2/hes1的表达明显减少(P<0.05);在第28天,两组表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Notch2/hes1信号通路可能是庆大霉素诱导肾损伤及修复过程中的重要角色之一,肾气丸可能通过抑制Notch2/hes1信号通路减轻肾脏损伤并促进肾小管上皮细胞修复。

三七总皂苷通过Notch3/Hes-1/p27Kip1信号通路抑制低氧性肺动脉高压大鼠肺血管重构

目的:探讨Notch3/Hes-1/p27;信号通路与低氧性肺动脉高压大鼠肺血管重构的关系及三七总皂苷(PNS)的干预作用。方法:将SPF级雄性SD大鼠采用随机编号分为3组:正常组(C组),低氧组(H组)和PNS组(P组),检测肺动脉压,称量右心室重量,HE染色和Masson染色观察肺血管重构情况,RT-qPCR检测大鼠肺组织中Notch3、Hes-1和p27;的mRNA表达水平,Western blot检测大鼠肺组织中Notch3、Hes-1、p27^(Kipl),增殖细胞核抗原(PCNA)和caspase-3的蛋白水平。结果:与C组相比,H组大鼠的肺动脉压和右心室肥厚指数明显增加;肺血管重构现象明显;Notch3、Hes-1和PCNA的蛋白水平增加,p27;和caspase-3的蛋白水平降低;Notch3和Hes-1的mRNA表达增加,p27;的mRNA表达降低(P<0.05)。经PNS干预后,与H组相比,P组大鼠的肺动脉压和右心室肥厚指数降低;肺血管重构现象改善;Notch3、Hes-1和PCNA的蛋白水平降低,p27;和caspase-3的蛋白水平增加;Notch3和Hes-1的mRNA表达降低,p27;的mRNA表达增加(P<0.05)。结论:PNS可通过抑制Notch3/Hes-1/p27;信号通路,减少低氧诱导的肺动脉高压大鼠肺血管重构。

姜黄素后处理对缺血再灌注肾损伤大鼠Notch2/Hes-1通路的影响

目的探讨姜黄素后处理大鼠肢体缺血再灌注肾损伤对Notch2/Hes-1通路的影响。方法选取成年雄性SD大鼠80只,体重280~320 g,6~8月龄,采用随机数字表法,将其分成4组(各20例):假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、姜黄素后处理组(I/R+Cur组)及抑制剂组(I/R+DAPT组)。采用夹闭双下肢股动脉4 h再灌注4 h复制肢体缺血再灌注肾损伤模型。在大鼠肢体缺血后4 h,I/R+Cur组经腹腔注射姜黄素200 mg/kg;I/R+DAPT组经腹腔注射DAPT 0.5μmol。于再灌注4 h时经颈动脉取血,待检血浆肌酐、尿素氮、丙二醛等指标。随后处死大鼠,采用HE染色检测肾组织病理变化,并对肾小管间质进行半定量评分;应用Western blotting和RT-PCR分别测定Notch2受体蛋白和靶分子Hes-1 mRNA的表达;通过ELISA测定肾组织TNF-α及IL-1β的表达。结果与Sham组比较,I/R组可见肾小管出现小管明显扩张,管腔内可见管型,刷状缘消失、肾间质炎症细胞浸润等病变,肾小管间质半定量评分升高(P <0.05);组织中Notch2、Hes-1 mRNA、TNF-α和IL-1β的表达升高(P <0.05);与I/R组比较,I/R+Cur组肾间质炎症细胞浸润减少,视野内未见肾小管扩张,偶可见少量管型等病理改变,肾小管间质半定量评分下降(P <0.05);组织中Notch2、Hes-1 mRNA、TNF-α和IL-1β的表达升高(P <0.05);I/R+DAPT组各指标与I/R+Cur组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论姜黄素后处理可减轻大鼠肢体缺血再灌注时肾损伤,其作用机制可能与下调Notch2/Hes-1信号通路有关。

D-β-羟基丁酸通过激活Notch1/Hes1通路和抑制内质网应激改善大鼠急性心肌梗死

目的探究D-β-羟基丁酸(DβHB)对大鼠急性心肌梗死(AMI)的作用及其可能的作用机制。方法40只SPF级SD大鼠随机分为对照组、心梗组、DβHB组和阳性对照组,每组10只。除对照组外,其余组通过结扎冠状动脉左前降支近端建立AMI大鼠模型。DβHB组大鼠腹腔注射DβHB 100 mg·kg^(-1)·d^(-1),阳性对照组大鼠腹腔注射倍他乐克12 mg·kg^(-1)·d^(-1),对照组和心梗组大鼠注射等量生理盐水,持续给药3周。超声心动图检测心功能;HE染色检测心脏病理学变化;TTC染色检测心肌梗死面积;ELISA试剂盒检测LDH和CK-MB活性;TUNEL染色检测心肌细胞凋亡;Western blot检测凋亡、Notch1/Hes1通路和内质网应激相关蛋白水平。结果与对照组相比,心梗组大鼠心肌结构紊乱,存在明显炎性细胞浸润和间质水肿,心功能明显降低,心肌梗死面积、LDH活性、CK-MB活性、心肌细胞凋亡率、Bax、p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α、ATF4和CHOP蛋白表达明显升高(均P<0.05),Bcl-2蛋白水平明显降低(P<0.05),Notch1、NICD和Hes1蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05);与心梗组相比,DβHB组和阳性对照组大鼠心肌病理学变化有明显改善,心功能明显提升,心肌梗死面积、LDH活性、CK-MB活性、心肌细胞凋亡率、Bax、p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α、ATF4和CHOP蛋白水平明显降低(P<0.05),Bcl-2、Notch1、NICD和Hes1蛋白水平明显升高(P<0.05)。结论DβHB可能通过激活Notch1/Hes1通路和抑制内质网应激改善大鼠急性心肌梗死。

褪黑素抗心肌缺血/再灌注损伤的作用及其对Notch1/Hes1信号通路影响

目的探讨褪黑素(melatonin,Mel)对减轻大鼠心肌缺血/再灌注(MI/R)损伤的作用及其对心肌Notch1/Hes1信号的影响。方法 90只雄性SD大鼠(200~250)g,随机分为3组(每组n=30):假手术(Sham)组、溶剂对照(MI/R+V)组和Mel处理(MI/R+Mel)组〔10 mg/(kg·d),灌胃4周〕。行结扎大鼠冠状动脉左前降支手术造成MI/R模型,心肌缺血30 min,再灌注4 h后检测心肌Notch1受体胞内区(Notch1 intracellular domain,NICD)及Hes1、PTEN、p-Akt/Akt比值和凋亡相关蛋白表达,再灌注6 h后检测梗死面积和心肌细胞凋亡率,再灌注72 h后检测心功能。结果 MI/R损伤显著下调左心射血分数(LVEF)与左心室短轴缩短率(LVFS),增加心肌凋亡率及梗死面积。Mel口服预防性治疗4周可显著改善心功能并减轻心肌凋亡及梗死(P<0.01)。另外口服Mel治疗可显著激活心肌Notch1/Hes1信号通路并调控PTEN/Akt信号,从而下调心肌凋亡信号(P<0.05)。结论口服Mel预防性治疗可显著减轻MI/R损伤后心肌梗死及凋亡水平,改善心功能。而且,Mel口服可显著上调缺血打击后心肌Notch1/Hes1信号并对PTEN/Akt信号发挥调控作用,下调心肌凋亡信号,从而保护心肌。

基于Notch/Hes1和PI3K/AKT/mTOR信号通路研究蜈蚣败毒饮对银屑病小鼠的治疗作用及机制

目的:基于Notch/Hes1和PI3K/AKT/mTOR信号通路探讨蜈蚣败毒饮治疗银屑病模型小鼠的作用机制。方法:采用脱毛区域涂抹咪喹莫特诱导建立银屑病小鼠模型,将成模小鼠按随机数字表分为模型组、甲氨蝶呤(2.2 mg/kg)阳性对照组及蜈蚣败毒饮低(30 g/kg)、中(60 g/kg)、高(120 g/kg)剂量组,以脱毛区域涂抹凡士林的10只小鼠作为正常对照组。灌胃给药,正常对照组和模型组小鼠灌胃相应体积纯水。除甲氨蝶呤组小鼠前4 d每天灌胃甲氨蝶呤,后4 d每天灌胃相应体积纯水外,其余各组均连续灌胃8 d。采用皮损严重程度指数(PASI)评估各组小鼠银屑病严重程度,采用酶联免疫法测定治疗后各组小鼠血清IL-1β、IL-6、IL-12、IL-17a、IL-23a水平,采用qRT-PCR法和Western Blot法检测各组小鼠皮损部位Notch/Hes1及PI3K/AKT/mTOR信号通路相关基因和蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,模型组小鼠PASI评分、血清炎症因子(IL-1β、IL-6、IL-12、IL-17a、IL-23a)水平显著升高,损伤皮肤组织Notch-1、Notch-2、Jagged-1、Hes1、AKT、PI3K、mTOR mRNA及蛋白和p-AKT、p-mTOR蛋白表达显著升高(P<0.05)。与模型组比较,各给药组小鼠PASI评分、血清炎症因子(IL-1β、IL-6、IL-12、IL-17a、IL-23a)水平显著降低,损伤皮肤组织Notch-1、Notch-2、Jagged-1、Hes1、AKT、PI3K、mTOR mRNA及蛋白和p-AKT、p-mTOR蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论:蜈蚣败毒饮对银屑病具有较好的治疗作用,可显著降低银屑病小鼠血清炎症因子水平,并能抑制Notch/Hes1和PI3K/AKT/mTOR信号通路。