瘦素对人L-02脂肪变肝细胞胆固醇流出的影响

目的 观察瘦素对人L-02脂肪变肝细胞胆固醇流出及小凹蛋白（cavdin-1）、三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ASCAI）mRNA表达的影响，探讨瘦素在非酒精性脂肪性肝病发生、发展中的作用。方法 用20％的医用脂肪乳配制成10％的浓度，与10％的胎牛血清培养基共同培养细胞，造模时间24h，造模后分别用瘦素处理，浓度分别为10^-5、10^-6、10^-7mol／L，处理24h。每纽均行油红“O”染色。用RT—PCR测定cavelin—1、ABCA1mRNA表达。结果 油红“O”染色显示，10％的脂肪乳处理24h能成功制造肝细胞脂肪变性模型。RT—PCR显示肝细胞脂肪变性后cavelin-1及ABCA1mRNA表达增加。模型组加入瘦素处理后cavelin-1、ABCA1mRNA表达明显增加，且与瘦素浓度呈正相关。结论 10％的脂肪乳能导致肝细胞脂肪变性，肝细胞脂肪变性时，10^-7-10^-5mol／L浓度的瘦素能上调cavdin—1、ABCA1mRNA表达，促进细胞内胆固醇的逆转运。提示瘦素对治疗非酒精性脂肪肝病有一定作用。

小凹蛋白-1和钙受体在人的脐静脉内皮细胞的表达

为探讨人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中小凹蛋白-1与细胞外钙受体表达及定位,为进一步功能研究提供理论依据,采用Western-blot和Rt-PCR及免疫荧光技术检测HUVEC中小凹蛋白-1与细胞外钙受体mRNA和蛋白表达及定位。结果显示:(1)形态学观察和免疫细胞化学法测Ⅷ因子抗原,95%以上的细胞呈阳性着色,证实细胞为HUVEC。(2)RT-PCR检测到HUVEC中459bp和260bpmRNA表达,Western-blot测到HUVEC中22KD和150-160KD蛋白表达。(3)免疫荧光检测到小凹蛋白-1与细胞外钙受体定位于人脐静脉内皮细胞膜。由此可知,人的HUVEC中有小凹蛋白-1与细胞外钙受体表达,两者是否共定位及其功能有待进一步研究。

基于P38 MAPK/JNK信号通路研究二甲双胍对脓毒性心肌病的保护作用机制

基于丝裂原活化蛋白激酶P38(P38 MAPK)/c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路探讨二甲双胍对脓毒性心肌病的保护机制。本文为动物实验研究设计,于2023年1—12月在中南大学湘雅医院完成。采用随机数字表法将48只8周龄雌性C57BL/6小鼠分为4组:A组(对照组)、B组(模型组)、C组(模型+盐酸曲美他嗪)、D组(模型+二甲双胍组),每组12只。B、C、D组均以LPS(15 mg/kg)腹腔注射构建脓毒性心肌病小鼠模型,建模24 h后,A组、B组予以腹腔注射等量生理盐水,C组予以20 mg/kg盐酸曲美他嗪灌胃,D组予以腹腔注射二甲双胍200 mg/kg,均连续干预14 d。采用超声成像系统检测心功能,采用TUNEL法检测心肌组织细胞凋亡率;采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测小鼠心肌组织中P38 MAPK/JNK信号通路JNK、P38 MAPK mRNA水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定各组小鼠血浆肌酸激酶同工酶(CK-MB)、脑利钠肽(BNP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)含量;采用蛋白质印迹(Western blot)检测心肌组织中蛋白激酶C Eplison亚型(PKCε)、小窝蛋白-3(Cav-3)的蛋白表达。结果显示,与A组左心室射血分数(LVEF)(79.51±6.62)%、左室短轴缩短率(FS)(45.66±4.13)、细胞凋亡率(4.34±0.36)%、JNK(0.96±0.06)、P38 MAPK(1.01±0.03)、CK-MB(2.37±0.13)μg/L、BNP(21.36±3.47)ng/L、TNF-α(176.22±19.24)ng/L、IL-6(35.43±3.84)ng/L、PKCε表达(1.98±0.26)、Cav-3表达(1.04±0.03)相比,B、C、D组细胞凋亡率(28.22±4.49、22.45±3.69、15.88±3.27)%、JNK(1.68±0.11、1.32±0.18、1.13±0.14)、P38 MAPK(2.47±0.71、1.77±0.35、1.49±0.05)、CK-MB(16.55±2.16、12.63±1.98、5.27±0.61)μg/L、BNP(48.92±5.67、33.78±4.11、27.55±3.84)ng/L、TNF-α(463.71±24.81、335.71±36.71、214.78±22.53)ng/L、IL-6(78.57±6.36、63.71±5.66、52.47±5.47)ng/L表达均升高,而LVEF(49.38±5.27、55.47±5.03、62.26±5.14)%、FS(24.36±2.17、30.43±3.29、33.57±2.72)%、PKCε表达(1.33±0.21、1.54±0.23、1.75±0.22)、Cav-3表达(0.47±0.06、0.76±0.05、0.85±0.04)均下调(F=113.020、67.657、219.539、206.222、227.977、88.455、6285.186、135.877、65.924、96.362、17.532、314.419,P<0.05);与B组相比,C、D组细胞凋亡率、JNK、P38 MAPK、CK-MB、BNP、TNF-α、IL-6表达均降低,LVEF、FS、PKCε、Cav-3表达均上调,且D组优于C组(P<0.05)。综上,二甲双胍对脓毒性心肌病具有一定的保护作用,其机制可能与抑制P38 MAPK/JNK信号通路的活化及上调PKCε、Cav-3表达有关。