甲基化PAX1在宫颈癌筛查和预后评估中的临床应用

目的:探究甲基化PAX1在宫颈癌筛查和预后评估中的临床应用。方法:选取2021年1月~2021年12月在蚌埠医学院第一附属医院接受治疗的150例收集宫颈脱落细胞患者的宫颈脱落细胞,研究采用了多种检测技术,包括PAX1基因、甲基化、薄层细胞学、高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)和HPV16/18检测,以阳性患者进行阴道镜下活检病理诊断为金标准,比较宫颈脱落细胞中不同检测方法学。结果:PAX1基因甲基化灵敏度、特异度分别为81.3%和96.6%,四种检测比较中PAX1具有最高特异度(96.63%),细胞学与HR-HPV检测特异度在17%~70%。细胞学(ASCUS+)的灵敏度为94.7%,明显高于PAX1基因甲基化检测,差异有统计学意义(P<0.05),ASCUS+的特异度为18.0%显著低于PAX1基因甲基化检测,差异有统计学意义(P<0.001)。结论:将细胞学和PAX1基因甲基化技术相结合,能够更好地预防宫颈癌,并且能够减轻年轻患者的焦虑。

miR-214-5p通过DNMT1介导的AXIN2基因DNA甲基化修饰在皮肤基底细胞癌中的作用机制

目的探讨皮肤基底细胞癌中轴抑制蛋白2(Axis inhibition protein 2,AXIN2)基因启动子甲基化对基因转录的影响及miR-214-5p通过靶向DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase1,DNMT1)对AXIN2甲基化率的调控机制。方法收集2022年1月-2023年6月在广州市皮肤病防治所就诊治疗的102例皮肤基底细胞癌(Cutaneous basal cell carcinoma,BCC)患者作为研究对象,提取癌组织和癌旁正常组织标本及基线资料。焦磷酸测序法检测AXIN2基因启动子区甲基化率。实时荧光定量PCR检测AXIN2、DNMT1基因mRNA和miR-214-5p的表达水平。将miR-214-5p模拟物(mimic)、抑制物(inhibitor)及其阴性对照(mimic NC和inhibitor NC)分别对基底细胞癌A431细胞进行转染,48 h后检测DNMT1基因mRNA表达水平和AXIN2基因甲基化率。结果BCC癌组织的AXIN2基因甲基化率显著高于癌旁正常组织(t=5.128,P<0.001),AXIN2基因mRNA相对表达水平显著低于癌旁正常组织(t=7.826,P<0.001),DNMT1基因mRNA表达水平显著高于癌旁正常组织(t=4.838,P<0.001),miR-214-5p表达水平显著低于癌旁正常组织(t=5.426,P<0.001)。BCC癌组织的AXIN2基因甲基化率与其mRNA表达水平呈负相关(r=-0.793,P<0.001),DNMT1基因mRNA水平与AXIN2基因甲基化率呈正相关(r=0.814,P<0.001),miR-214-5p表达水平与DNMT1基因mRNA水平呈负相关(r=-0.747,P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验结果证实,DNMT1是miR-214-5p的靶基因。细胞转染后,与mimic NC、inhibitor和inhibitor NC比较,mimic的DNMT1基因mRNA水平、AXIN2基因甲基化率显著降低(P<0.001);而inhibitor的DNMT1基因mRNA水平和AXIN2基因甲基化率相较于其他三组明显上升(P<0.001)。结论miR-214-5p可通过调控下游靶蛋白DNMT1表达,影响AXIN2基因的DNA甲基化率,调控AXIN2基因的表达水平,参与皮肤基底细胞癌的发生机制。

下调SETDB1通过SOX7甲基化抑制口腔癌上皮-间充质转化、侵袭和转移的机制探讨

目的:探讨SETDB1通过SOX7甲基化抑制口腔癌上皮-间充质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)、迁移和侵袭机制。方法:应用qRT-PCR和Western印迹法检测口腔癌KB细胞和口腔黏膜上皮ATCC细胞中SETDB1和SOX7 mRNA和蛋白表达水平。构建SETDB1 si-RNA,以脂质体介导法转染口腔癌KB细胞。siRNA-SETDB1为实验组(si-S),siRNA空载体为阴性对照组(si-N),未转染KB细胞为空白对照组(NC)。qRT-PCR和Western印迹法检测SETDB1 mRNA和蛋白表达水平,验证转染效果;焦磷酸测序检测SOX7甲基化水平。Western印迹法检测N-钙黏蛋白(N-cadherin)、Vimentin、β-catenin和Slug蛋白表达,MTT法检测细胞存活能力,流式细胞术检测细胞凋亡,划痕愈合实验检测细胞迁移能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力。采用SPSS 21.0软件包进行统计学分析。结果:Rt-qPCR和Western印迹法检测结果显示,si-S组SETDB1 mRNA和蛋白表达量显著下降(P<0.05)。焦磷酸测序检测结果显示,下调SETDB1可显著降低SOX7甲基化率,增加SOX7蛋白表达。Western印迹法检测结果显示,下调SETDB1可显著抑制口腔癌KB细胞中EMT相关蛋白N-cadherin、Vimentin、β-catenin和Slug的表达(P<0.05)。细胞功能学结果显示,下调SETDB1可显著抑制KB细胞的存活、迁移和侵袭能力。结论:下调SETDB1可通过调控SOX7甲基化水平,抑制口腔癌细胞EMT、迁移和侵袭,为口腔癌临床诊断和治疗提供新思路和靶点。

甲基化转移酶SETDB1对口腔鳞状癌细胞迁移侵袭能力的影响及其机制

目的观察甲基化转移酶SETDB1对口腔鳞状癌细胞迁移、侵袭能力的影响,并探讨其相关机制。方法以不同浓度(0、0.2、0.4、0.6、0.8μmol/L)甲基化转移酶抑制剂GSK3685032作用于口腔鳞状癌细胞CAL-27,MTT法测算细胞增殖活力,筛选得到GSK3685032最佳作用浓度为0.6μmol/L。将CAL-27细胞分为对照组与实验组,对照组加入有机溶剂DMSO进行处理,实验组加入0.6μmol/L的GSK3685032处理。采用RT-qPCR法检测细胞SETDB1 mRNA,Western blotting法检测细胞SETDB1蛋白,细胞划痕实验观察细胞迁移能力,Transwell小室侵袭实验观察细胞侵袭能力,焦磷酸测序检测细胞内SOX7甲基化水平。结果实验组细胞SETDB1 mRNA及蛋白表达均低于对照组(P均<0.05);实验组细胞迁移距离小于对照组,穿膜细胞数少于对照组(P均<0.05);实验组细胞内SOX7甲基化率小于对照组(P<0.05)。结论甲基化转移酶SETDB1可抑制口腔鳞状癌细胞的迁移、侵袭能力,其机制可能与下调细胞内SOX7甲基化水平有关。

半胱氨酸双加氧酶1基因启动子甲基化在肿瘤研究中的应用

半胱氨酸双加氧酶1(cysteine dioxygenase 1,CDO1)是一种肿瘤抑制基因(tumor suppressor gene,TSG),参与细胞增殖、分化、凋亡及铁死亡等一系列生理过程。DNA甲基化是人类肿瘤中表观遗传学修饰的主要方式之一,CDO1是一种与恶性肿瘤高度相关的甲基化基因(highly relevant methylation gene,HRMG),在多种人类癌症中被其甲基化启动子所沉默,甲基化的CDO1基因启动子是人类肿瘤中最常见的早期特异性诊断标志物之一。本文就CDO1生物学功能及其启动子DNA的甲基化在肿瘤中的作用及调控作一综述。

Si-SETDB1通过SPG20甲基化对肺腺癌细胞迁移侵袭的影响

目的:检测肺腺癌中SETDB1和SPG20甲基化水平,探究下调SETDB1对SPG20甲基化及A549细胞迁移和侵袭的影响。方法:选取60例肺腺癌组织和正常肺组织,qRT-PCR检测mR NA相对表达量;免疫组织化学法和Western blot检测蛋白表达量;基因甲基化水平应用焦磷酸测序法检测;构建并合成SETDB1的小干扰RNA,脂质体介导法转染细胞,qRT-PCR检测mR NA相对表达量、Wesrern blot检测蛋白表达、焦磷酸测序法检测基因甲基化、MTT检测细胞增殖活性、划痕愈合检测细胞迁移、Transwell小室实验检测细胞侵袭。结果:qRT-PCR结果显示肺腺癌组织中SPG20表达下调(P<0.05),而SETDB1表达上调(P<0.05);Western blot结果显示肺腺癌组织中SETDB1蛋白表达量显著高于正常肺组织,而SPG20蛋白在癌组织中呈低表达,低于正常肺组织。在癌组织中SPG20基因甲基化率显著高于正常肺组织,差异有统计学意义。SPG20甲基化水平与SETDB1表达呈正相关性;肺腺癌细胞中SETDB1呈高表达,而SPG20呈低表达;正常支气管上皮细胞中SETDB1呈低表达,SPG20则呈高表达。RNA干扰SETDB1可使A549细胞内SETDB1 mR NA和蛋白表达量显著降低,SPG20基因甲基化率明显下降,抑制了细胞的增殖活性、迁移和侵袭能力。结论:在肺腺癌中甲基转移酶SETDB1和SPG20甲基化存在相关性,SETDB1可能是SPG20发生甲基化的催化酶。

SOX1和PAX1基因甲基化检测对宫颈高级别病变二次分流的价值

目的探讨SOX1和PAX1基因甲基化检测对宫颈高级别病变二次分流的价值。方法采集122例人乳头瘤病毒(HPV)阳性患者的宫颈脱落细胞,同时行液基薄层细胞学检查(TCT)和SOX1/PAX1基因甲基化检测。结果HPV联合TCT检测对宫颈上皮内瘤变(CIN)2级及以上(CIN2+)检出灵敏度为95.24%,特异度为23.75%。结合SOX1/PAX1基因甲基化检测二次分流后,对CIN2+检出灵敏度为83.33%,与HPV联合TCT检测差异无统计学意义(P=0.078);特异度为77.50%,明显高于HPV联合TCT检测(P<0.001)。CIN2+组SOX1/PAX1基因甲基化水平高于正常宫颈组织及CIN1组(P<0.001)。SOX1、PAX1基因甲基化对CIN2+诊断的截断值分别为-11.81、-11.98。结论SOX1/PAX1基因甲基化检测二次分流后,CIN2+检出的效能和准确性明显提升。

多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞SF-1对芳香化酶P450的影响及其甲基化的调节机制

目的:探讨多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞与正常对照组的SF-1mRNA表达及其甲基化差异性,并评价其临床意义。方法:随机选取2020年1月至2022年12月本院41例行IVF-ET的PCOS患者和72例因男方因素或输卵管因素行IVF-ET的对照组为研究对象,提取研究对象颗粒细胞,提取RNA,逆转录为cDNA进行荧光定量RT-PCR检测;行BSP法检测颗粒细胞DNA的甲基化水平。结果:与对照组卵巢颗粒细胞相比,PCOS患者CYP19和CYP19 PII的表达量显著降低(P < 0.05),虽然LRH1和SF1在组间无显著差异,但是其与CYP19及CYP19 PII的变化呈显著正相关(P < 0.001);SF-1基因在13个CpG位点在PCOS和对照组之间存在显著差异(P <0.05);结论:该实验初步探讨了PCOS患者颗粒细胞芳香化酶P450活性下降机制,也在一定程度上解释了多囊患者雄激素升高的机制。

SCNN1B在卵巢癌组织中的表达及启动子区甲基化水平

目的 检测SCNN1B基因在卵巢癌及正常卵巢组织中甲基化水平,并检测SCNN1B mRNA表达水平,探讨其与卵巢癌发生、发展关系。方法 收集2019年9月至2022年12月在北京佑安医院及石家庄市人民医院行手术治疗的卵巢癌患者62例为病例组,选取65例同期因宫颈癌、子宫肌瘤或盆腔脏器脱垂行全子宫双附件切除术患者的正常卵巢组织为对照组。焦磷酸测序检测SCNN1B基因启动子区甲基化水平,荧光定量PCR(RT-qPCR)检测SCNN1B基因mRNA的表达水平。结果 与正常卵巢组织比较,卵巢癌组织中SCNN1B基因启动子区甲基化水平显著增高,而SCNN1B基因mRNA表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。对SCNN1B基因启动子区的甲基化水平与SCNN1B基因mRNA表达水平在卵巢癌样本中的相关性分析表明,两者之间存在显著的负相关性(r=-0.692,P<0.01)。卵巢癌组织中SCNN1B基因启动子区甲基化水平、SCNN1B基因mRNA水平与患者FIGO分期相关,且还与淋巴结转移相关(P<0.05)。结论 高甲基化的SCNN1B基因启动子使SCNN1B表达沉默,可能参与卵巢癌癌变和进展。

DNA高甲基化介导FOXO1转录表达下调促进鼻咽癌细胞增殖和侵袭能力

目的:探索叉头盒O1(FOXO1)在鼻咽癌(NPC)中异常表达的分子机制,及其对NPC细胞恶性生物学行为的影响。方法:采用GEO数据集分析NPC中FOXO1表达水平,采用R4.2.1软件进行基因集富集分析。构建FOXO1过表达的NPC细胞系5-8F、HONE1(FOXO1-5-8F、Ctrl-5-8F、FOXO1-HONE1、Ctrl-HONE1)。分别通过CCK-8法、划痕实验、Transwell侵袭实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力,流式细胞术分析细胞周期。通过重亚硫酸氢盐基因测序技术进行DNA甲基化测序。结果:FOXO1 mRNA在NPC细胞和组织中表达下调。FOXO1过表达组的细胞增殖能力和细胞迁移能力明显低于对照组(P<0.05),相同时间内,空白对照组的细胞侵袭数量高于FOXO1过表达组(P<0.05),FOXO1过表达抑制细胞周期(P<0.05)。在NPC组织中,FOXO1 DNA启动子区域存在甲基化位点,其甲基化水平明显高于非癌组织(P<0.05)。结论:NPC中FOXO1基因DNA高甲基化导致其转录下调,由此促进肿瘤细胞的增殖和侵袭。FOXO1可能是NPC的肿瘤抑制基因。

PAX1甲基化与p16/Ki-67联合检测提高宫颈癌非典型鳞状细胞的诊断效能

目的 比较配对盒家族基因1(paired boxed gene 1,PAXl)甲基化与p16/Ki-67双染单独及联合检测在薄层液基细胞学检查(thinprep cytologic test, TCT)为意义不明的非典型鳞状细胞(atypical squamous cells of undetermined significance, ASC-US)及低级别鳞状上皮内病变(low-grade squamous intraepithelial lesion, LSIL)人群中的诊断效能。方法 选择郑州大学第一附属医院2021-2022年247例TCT结果为ASC-US和LSIL患者,以阴道镜下病理结果为金标准,敏感度、特异性、准确度与ROC曲线下面积(area under the subject curve, AUC)为评价指标,比较PAX1甲基化和p16/Ki-67双染单独及联合检测的检验效能。结果 PAX1甲基化与p16/Ki-67双染的阳性率随着阴道镜下病理结果的严重程度而增加,PAX1甲基化和p16/Ki-67联合检测在TCT为ASC-US人群中的敏感度为91.25%、特异度为97.72%、准确度为95.51%,优于甲基化、p16/Ki-67双染单独检测,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 PAX1甲基化和p16/Ki-67双染联合检测可以提高TCT结果为ASC-US患者的诊断效能。

DNA甲基化修饰对金钱鱼卵巢Cyp17a1表达水平的影响

【目的】分析DNA甲基化修饰对金钱鱼(Scatophagus argus)卵巢Cyp17a1表达的影响,进一步认识卵巢发育成熟相关基因表达的调控机制。【方法】分别取卵巢发育III、IV期的金钱鱼,以及投喂添加0(对照)、50、100μg/g雌二醇饲料30 d的2龄雌鱼,用MethPrimer软件分析其Cyp17a1基因CpG二核苷酸位点分布特征,并预测CpG岛;采用亚硫酸氢盐测序法检测不同发育时期卵巢以及投喂雌二醇个体卵巢中的Cyp17a1的DNA甲基化修饰水平,并用实时荧光定量PCR分析Cyp17a1基因表达水平。【结果】金钱鱼Cyp17a1翻译起始位点2000 bp后无CpG岛,取第1外显子含有5个CpG位点(翻译起始位点后106、116、129、148和203 bp处)的区域用于DNA甲基化水平检测。金钱鱼III期卵巢Cyp17a1外显子1的DNA甲基化修饰水平显著高于IV期卵巢(P<0.05),与其mRNA表达水平呈负相关。116、129和203 bp处DNA甲基化存在发育时期差异,但106和148 bp处差异不显著(P>0.05)。投喂雌二醇后,金钱鱼卵巢Cyp17a1 mRNA表达水平和第1外显子CpG富集区域整体DNA甲基化修饰水平无显著变化(P>0.05),但雌激素处理雌鱼翻译起始位点后148、203 bp处甲基化水平明显上升(P<0.05)。【结论】金钱鱼卵巢Cyp17a1第一个外显子CpG富集区的整体甲基化水平与基因表达呈负相关,饲料E2可上调Cyp17a1第一个外显子148、205 bp处甲基化水平,表明甲基化修饰参与金钱鱼Cyp17a1的表达调控。

ABCA1 DNA启动子甲基化水平与早发急性冠脉综合征及其病变严重程度的关系

目的探讨三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1(ABCA1)DNA启动子甲基化水平与早发急性冠脉综合征(pACS)及其病变严重程度的关系。方法收集武警特色医学中心心内科2019年5-12月住院的90例早发急性冠脉综合征患者为pACS组,选取同期本院体检中心的88名健康体检者为对照组。使用焦磷酸测序法测定两组外周血ABCA1 DNA甲基化水平,比较两组血脂、血糖等生化指标及血清炎症标记物的浓度,并采用logistic回归分析影响pACS发病的危险因素。结果pACS组体重指数(BMI)、糖化血红蛋白(HbA1c)、低密度脂蛋白(LDL)、腰围、平均ABCA1 DNA甲基化水平以及炎症标记物白介素-1β(IL-1β)、C反应蛋白(CRP)和中性粒细胞胞外核酸网循环标志物(cfDNA/NETs)均高于对照组(P<0.05),而高密度脂蛋白(HDL-C)水平及ABCA1蛋白含量低于对照组(P<0.05)。Logistic回归分析发现,ABCA1 DNA甲基化水平(OR=7.413,95%CI:2.070~26.554)、HbA1c(OR=3.646,95%CI:1.008~13.182)、LDL(OR=15.690,95%CI:1.123~69.233)、cfDNA/NETs(OR=1.892,95%CI:1.374~2.604)及IL-1β(OR=1.177,95%CI:1.011~1.370)是pACS发生的独立危险因素,而HDL-C(OR=0.107,95%CI:0.025~0.398)是pACS的保护性因素。此外,研究表明ABCA1 DNA甲基化水平与pACS患者冠脉Gensini评分呈正相关(r=0.648,P<0.001)。结论ABCA1 DNA启动子甲基化水平是pACS发生的独立危险因素且与冠脉病变程度有关。因此,血清ABCA1-A启动子甲基化水平或许可以作为预测pACS发生风险的生物标志物而被临床应用。

HIST1H4F基因甲基化在三阴性乳腺癌中的预后价值

目的探讨HIST1H4F基因甲基化在三阴性乳腺癌中的意义。方法收集31例乳腺癌新鲜的癌组织标本及正常乳腺组织标本,提取DNA后使用亚硫酸盐进行甲基化转化处理,荧光定量PCR进行HIST1H4F基因甲基化检测,分析癌组织标本和正常乳腺组织中的HIST1H4F基因甲基化差异情况,并分析三阴性乳腺癌的HIST1H4F基因甲基化情况。同时收集37例三阴性乳腺癌的石蜡标本,提取DNA后同样方法处理再进行HIST1H4F基因甲基化检测,分析HIST1H4F基因甲基化与三阴性乳腺癌预后的关系。结果新鲜组织标本中周围正常乳腺组织和癌组织中HIST1H4F甲基化阳性率均为74.2%(23/31),两者的HIST1H4F甲基化阳性率无明显区别(χ^(2)=0000,P=1.000),分析发现三阴性乳腺癌组织中HIST1H4F甲基化阳性率高于非三阴性乳腺癌(93.8%vs.53.3%,P=0.015),HIST1H4F甲基化阳性乳腺癌的组织学分级Ⅲ级和ER阴性的乳腺癌中比率高于HIST1H4F甲基化阴性乳腺癌(60.9%vs.12.5%,P=0.037;69.6%vs.25.0%,P=0.043)。在三阴性乳腺癌的石蜡组织标本进行HIST1H4F甲基化检测,发现HIST1H4F甲基化阳性率为27.0%,且HIST1H4F甲基化阳性组和阴性组的DFS(50.0%vs.66.7%,χ^(2)=1.141,P=0.285)和OS(90.0%vs.96.3%,χ^(2)=1.635,P=0.201)在统计学上均无明显区别。结论在新鲜组织标本中三阴性乳腺癌中检测HIST1H4F基因甲基化阳性率高,HIST1H4F基因甲基化阳性乳腺癌的组织学Ⅲ级和ER阴性比率高,而在三阴乳腺癌石蜡组织标本中检测的HIST1H4F甲基化阳性率较低,尚不能确定HIST1H4F甲基化与三阴性乳腺癌预后是否相关,仍有待于进一步研究。

LRRTM1基因甲基化是胰腺癌的潜在诊断和预后标志物

目的探讨LRRTM1基因在胰腺癌中的表观遗传调控机制及其甲基化作为诊断和预后标志物的可能性。方法应用半定量RT-PCR与甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)技术检测6株胰腺癌细胞系中LRRTM1的表达及启动子区甲基化情况,应用MSP在101例癌前病变样本和277例胰腺癌组织中检测LRRTM1启动子区甲基化情况,并分析LRRTM1甲基化与临床病理因素之间及胰腺癌患者总生存期的关系。结果LRRTM1在Capan1、Panc3.11、AsPC1和PANC-28细胞中缺失表达,其MSP结果为完全甲基化状态,在Capan2和CFpac1中正常表达,MSP结果为未甲基化状态。应用去甲基化药物5-aza-dc处理细胞后,LRRTM1在Capan1、Panc3.11、AsPC1和PANC-28细胞恢复表达,在Capan2和CFpac1细胞中表达未改变。表明LRRTM1基因在胰腺癌中的表达受甲基化调控。在16.83%(17/101)的癌前病变样本和52.35%(145/277)的原发性胰腺癌中,LRRTM1发生甲基化,且LRRTM1甲基化与患者的年龄相关(P<0.05)。在获得随访信息的232例胰腺癌组织样本中发现LRRTM1甲基化与胰腺癌患者总生存期呈负相关。结论LRRTM1基因在胰腺癌组织中频繁发生甲基化,其表达受启动子区甲基化调控,LRRTM1甲基化是胰腺癌潜在的诊断和预后标志物。

肺部结节或肿块患者肺泡灌洗液SHOX2和RASSF1A基因甲基化在肺癌诊断中的价值

目的通过肺组织活检或手术后病检结果来验证两基因甲基化指标检验肺部良、恶性结节诊断效能。方法进行前瞻性研究,收集2019年3月至2020年3月在云南省第三人民医院99例诊断为肺部结节、肿块的患者,行支气管镜检查收集支气管肺泡灌洗液(BALF)样本后,进行定期随访、肺穿刺活检、手术后病检。结果收集的99例肺部结节、肿块患者,经病理诊断后分为肺癌组(n=50)和良性肺疾病组(n=49)。肺癌组年龄(62.64±9.71)岁,良性肺疾病组年龄(60.48±13.69)岁,2组指标差异具有统计学意义(P=0.032);在肺癌的诊断过程中,发现SHOX2和RASSF1A基因任一阳性诊断肺癌的灵敏度分别为72%和58%,特异度分别为92.3%和95.9%。而这2个基因的联合检测在肺癌的诊断中表现出了更高的灵敏度,为0.84,远高于良性疾病组的0.102(P<0.001)。ROC曲线分析显示2个基因甲基化联合时灵敏度可提高至84%。结论肺泡灌洗液SHOX2和RASS1A基因甲基化检验对存在肺部结节或肿块影像表现的肺癌患者诊断具有良好的预测价值,在影像学和组织学诊断不明时,SHOX2和RASSF1A联合检验可以作为肺癌早期诊断的一个重要补充工具。

Ca-Al-LDHs固体碱催化羟甲基化反应制备2-硝基-2-甲基-1-丙醇的研究

采用共沉淀法制备了一系列Ca-Al-LDHs固体碱催化剂用于非均相催化合成2-硝基-2-甲基-1-丙醇。利用XRD、SEM、XPS、CO_(2)-TPD、FT-IR、BET等分析手段对Ca-Al-LDHs的结构特性、金属价态、碱性强度与催化性能构效关系进行表征,通过2-硝基丙烷与甲醛羟甲基化反应评价了Ca-Al-LDHs固体碱催化剂的催化性能,并对2-硝基-2-甲基-1-丙醇的制备工艺进行了优化。结果表明,所制备的固体碱催化剂表面存在大量强碱性活性位点,并且存在一种新的晶格结构(Ca12Al14O33),该结构的存在提高了该催化剂对羟甲基化反应的催化性能;在温度为70℃、反应时间为2 h、n(甲醛)∶n(2-硝基丙烷)=2∶1、m(催化剂)∶m(甲醛)=3∶10的反应条件下,2-硝基丙烷的转化率为96.2%,2-硝基-2-甲基-1-丙醇选择性为99%。催化剂重复使用20次后,产品收率仍能达到60%以上。

急性脑出血患者血清E盒锌指结合蛋白1及DNA甲基化转移酶1与神经功能缺损和预后的相关性分析

目的探讨急性脑出血(ACH)患者血清E盒锌指结合蛋白1(ZEB1)、DNA甲基化转移酶1(DNMTl)与神经功能缺损、预后的关系。方法选取2019年7月—2022年7月本院收治的105例ACH患者为ACH组,依据ACH患者入院时美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分将其分为轻度组(n=34)、中度组(n=41)、重度组(n=30)。根据改良Rankin量表(mRS)评分将ACH患者分为预后良好组(n=65)和预后不良组(n=40)。另纳入同期105例体检健康者为对照组。选取2021年7月—2022年7月本院诊治的45例ACH患者对构建的ACH预后模型的受试者工作特征(ROC)曲线进行验证。采用酶联免疫吸附试验检测血清ZEB1、DNMT1水平;采用Spearman法分析ACH患者ZEB1、DNMT1水平与NIHSS评分的关系;采用多因素Logistic回归模型分析ACH患者预后的影响因素,采用ROC曲线评估血清ZEB1、DNMT1水平对ACH患者预后的预测价值。结果与对照组相比,ACH组血清ZEB1、DNMT1水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与轻度组相比,中度组和重度组ACH患者血清ZEB1、DNMT1、NIHSS评分均升高,差异有统计学意义(P<0.05);与中度组相比,重度组ACH患者血清ZEB1、DNMT1、NIHSS评分均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman分析结果显示,ACH患者血清ZEB1、DNMT1水平与NIHSS评分均呈正相关(r=0.569、0.763,P均<0.001)。单因素分析结果显示,与预后良好组比较,预后不良组患者NIHSS评分、血肿体积、ZEB1及DNMT1水平均升高或增大,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,ZEB1、DNMT1、NIHSS评分、血肿体积增大是ACH患者预后不良的危险因素(P<0.05)。血清ZEB1、DNMT1预测ACH患者预后的曲线下面积(AUC)分别为0.834、0.854,ZEB1、DNMT1联合预测ACH患者预后的AUC为0.944,灵敏度为95.0%,特异度为86.2%。以验证组人群对预测预后的ROC曲线进行验证,结果显示AUC为0.903(95%CI:0.854~0.951),提示预后预测曲线具有较好的区分度。结论ACH患者血清ZEB1、DNMT1水平较高,二者均与ACH患者神经功能缺损、预后显著相关,且血清ZEB1、DNMT1联合可能更有利于临床评估ACH患者预后情况。

RasGRP1启动子区甲基化对脂多糖诱导人T淋巴细胞炎症的作用及机制

目的探讨RAS鸟苷酸释放蛋白1(RasGRP1)启动子区甲基化对脂多糖(LPS)诱导人T淋巴细胞炎症的作用及机制。方法人T淋巴细胞白血病细胞JurkatE6-1培养至对数生长期,分为对照(完全培养基,C)组、1 mg/L(低浓度)LPS(L1)组、10 mg/L(高浓度)LPS(L2)组及10μmol/L甲基化转移酶抑制剂5-Aza-2′-脱氧胞苷+10 mg/L LPS(LA)组,干预5 d,置于荧光显微镜下观察细胞形态变化;离心收集细胞、留取上清液,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和比色法检测各组细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)浓度及乳酸脱氢酶(LDH)活性,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中RasGRP1、细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2、TNF-α、IL-6、DNA甲基转移酶(DNMT)1、DNMT3a mRNA的表达,采用Western blotting法检测各组细胞RasGRP1、ERK1/2及p-ERK1/2蛋白的表达,采用甲基化特异性PCR(MSP)法和琼脂糖凝胶电泳检测RasGRP1启动子区甲基化状态。结果光学显微镜结果显示,C组JurkatE6-1细胞生长状态良好,L1组、L2组细胞数量明显减少,细胞形态趋于碎片化,死亡细胞逐渐增加,随LPS浓度增加而增加;LA组较L2组细胞数量及形态明显好转;与C组比较,L1组JurkatE6-1细胞炎症因子表达升高(P<0.05),细胞RasGRP1、p-ERK1/2表达升高(P<0.05),DNMT1和DNMT3a mRNA表达无差异(P>0.05),RasGRP1启动子区未检测到甲基化表达;与L1组比较,L2组细胞炎症因子表达升高(P<0.05),细胞RasGRP1、p-ERK1/2表达降低(P<0.05),DNMT1和DNMT3a mRNA表达升高(P<0.05),RasGRP1启动子区呈现高甲基化表达;与L2组比较,LA组细胞炎症因子表达降低(P<0.05),细胞RasGRP1、p-ERK1/2表达升高(P<0.05),DNMT1和DNMT3a mRNA表达降低(P<0.05),RasGRP1启动子区未检测到甲基化表达;各组间ERK1/2总量比较无差异(P>0.05)。结论抑制RasGRP1启动子区高甲基化可减轻LPS诱导的人T淋巴细胞炎症损伤,其机制可能是与调控下游ERK信号通路有关。

阿帕替尼靶向治疗联合TACE对晚期原发性肝癌患者的疗效及外周血RASSF1A基因甲基化的影响

目的分析阿帕替尼靶向治疗联合肝动脉化疗栓塞术(TACE)治疗晚期原发性肝癌患者疗效及对外周血Ras相关区域家族1A(RASSF1A)基因甲基化的影响。方法64例晚期肝细胞癌(HCC)患者分为单一组(n=32)与联合组(n=32),单一组行TACE治疗,联合组行阿帕替尼靶向治疗联合TACE治疗,两组患者均行标准疗程TACE治疗,于治疗1个月(1 mo)及3个月(3 mo)评估临床疗效,比较治疗前后肝功能[白蛋白(ALB)、总胆红素(TBIL)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)]、血清标志物[甲胎蛋白(AFP)、血管内皮生长因子(VEGF)、半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶8(Caspase-8)]、外周血RASSF1A基因甲基化、不良反应及TACE抵抗发生率。结果单一组治疗3 mo时的客观缓解率(ORR)较治疗1 mo时下降(P<0.05),且低于联合组(P<0.05);两组患者治疗3 mo时的ALT、AST均较治疗前下降(P<0.05),且联合组低于单一组(P<0.05),两组患者治疗3 mo时的AFP均较治疗前显著降低(P<0.05);联合组治疗3 mo时的VEGF较治疗前降低(P<0.05)、Caspase-8较治疗前升高(P<0.05),联合组治疗3 mo时AFP、VEGF低于单一组(P<0.05),Caspase-8高于单一组(P<0.05);联合组治疗3 mo时RASSF1A基因甲基化阳性率明显低于治疗前(P<0.05),而单一组组内比较差异无统计学意义(P>0.05);联合组手足综合征、高血压发生率高于单一组(P<0.05),TACE抵抗发生率略低于单一组、但差异无统计学意义(P>0.05)。结论阿帕替尼靶向治疗联合TACE对晚期HCC效果及安全性良好,且对减少RASSF1A基因甲基化有利。