小檗碱与梓醇及其配伍对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞葡萄糖转运子4蛋白及C-Cb1相关蛋白表达的影响

目的观察梓醇与小檗碱及其配伍对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗及这一过程中葡萄糖转运子4(Glut4)和C-Cb1相关蛋白(CAP)表达的影响。方法采用高糖联合高胰岛素诱导3T3-L1脂肪细胞产生胰岛素抵抗(IR),分别给予小檗碱、梓醇、小檗碱+梓醇、盐酸罗格列酮进行干预,以葡萄糖氧化酶法检测培养液中葡萄糖消耗量,以Western Blotting法检测Glut4和CAP蛋白的表达。结果与模型组相比,小檗碱能增加培养液中葡萄糖的消耗,但对Glut4蛋白的表达无影响;梓醇、小檗碱+梓醇均能显著增加培养液中葡萄糖的消耗,并使细胞中Glut4蛋白的表达增强,且小檗碱+梓醇组的效应优于梓醇组及小檗碱组;与模型组相比,小檗碱与梓醇及其配伍对CAP的表达没有显著性影响。结论小檗碱、梓醇及其配伍能改善IR 3T3-L1脂肪细胞的胰岛素活性,其作用机制与罗格列酮不同。

脂筏蛋白与Cb1相关蛋白在葡萄糖转运中的信号转导机制

目前发现至少有两条胰岛素刺激葡萄糖转运蛋白4易位的信号转导通路:PI3K途径和Cb1相关蛋白(CAP)/Cb l途径。在CAP/Cb l途径中,CAP是关键性信号分子,这一信号途径依赖于脂筏上的特定蛋白共同参与完成。脂筏蛋白是存在于脂质筏上的一类特殊蛋白,包括小窝蛋白、浮舰蛋白等,有特殊的结构和功能,参与葡萄糖转运中的信号传递。

嵌合分子CblN/Grb2构建及其原核表达

目的构建CblN/Grb2嵌合分子,表达和纯化GST-CblN/Grb2融合蛋白,并考察嵌合分子CblN/Grb2在体外是否具有泛素连接酶活性。方法提取SKBR-3细胞的总RNA并反转录为cDNA,作为模板用PCR扩增Grb2基因的SH2片段;含有人全长CblcDNA的质粒pEFHACbl作为模板扩增Cbl基因N-端(CblN);用重叠延伸PCR方法,在CblN内部SH2两端引入BamHⅠ和EcoRV酶切位点并克隆入pcDNA3·1(+)。再以Grb2基因的SH2置换CblN的SH2即成为pcDNA3·1(+)-CblN/Grb2;以其为模板,通过PCR方法扩增CblN/Grb2并将其亚克隆至表达载体pGEX-4T-2,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达GST-CblN/Grb2融合蛋白并用GlutathioneSepharose4B进行纯化;通过体外泛素化实验检测GST-CblN/Grb2是否具有泛素连接酶活性。结果成功构建了pGEX-4T-2-CblN/Grb2融合表达载体;在大肠杆菌DH5α中表达了GST-CblN/Grb2融合蛋白并获得了纯化蛋白;体外泛素化实验表明GST-CblN/Grb2具有泛素连接酶活性。结论GST-CblN/Grb2的表达、纯化及其体外活性的鉴定为进一步研究该嵌合泛素连接酶对HER2阳性肿瘤细胞生长的影响奠定了基础。

泛素系统在免疫信号转导过程中的作用研究进展

泛素(Ubiquitin)系统是目前已知最重要且有高度选择性的蛋白质降解体系。近来许多研究发现该系统在免疫信号转导过程中发挥重要的调控功能。泛素系统可以通过识别某些酪氨酸磷酸化标记的免疫细胞膜受体使其降解,从而终止免疫信号转导。另外,在免疫系统重要转录因子NF-κB活化的不同阶段也有泛素系统参与。通过作用于免疫信号转导过程的上述环节,泛素系统调控免疫应答及炎症反应,本文拟就有关内容作一综述。

Ghrelin对脂肪细胞糖代谢及胰岛素敏感性的影响

目的观察Ghrelin对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖代谢和胰岛素敏感性的影响,并探讨其机制。方法体外培养3T3-L1前脂肪细胞,诱导分化为成熟的脂肪细胞,然后加入不同浓度Ghrelin作用24h,采用2-脱氧-3H-D葡萄糖摄入法,测定葡萄糖转运率;RT-PCR检测不同浓度Ghrelin作用24h后CAPmRNA的表达。结果10-9mol/LGhrelin作用24h,对基础状态及胰岛素刺激下,SW872脂肪细胞葡萄糖摄取率无影响;10-8~10-6mol/LGhrelin作用24h使基础状态及胰岛素刺激下SW872脂肪细胞葡萄糖摄取率分别增加30%vs28.6%、42.3%vs38.8%、48%vs48.4%。10-9mol/LGhrelin作用24h,对脂肪细胞CAPmRNA的表达无影响;随着Ghrelin浓度的增加,可促进CAPmRNA的表达。结论Ghrelin通过cb1/CAP信号途径促进3T3-L1脂肪细胞葡萄糖的转运,从而增加脂肪细胞胰岛素的敏感性。

匙羹藤提取物干预KKAy小鼠脂肪组织胰岛素抵抗的实验研究

目的:探讨匙羹藤(GS)改善KKAy小鼠脂肪组织胰岛素抵抗(IR)的作用机制。方法:KKAy小鼠分为模型组(DM)和GS组,C57BL/6J小鼠为正常组(NC),给药8周后测定血清胰岛素(Fins)、胰岛素敏感指数(ISI)、过氧化物酶增殖体受体-γ(PPAR-γ)、PI3κ-p85、Cb1衔接蛋白(CAP)、葡萄糖转运蛋白4(GluT-4)mRNA水平。结果:与DM比较,FPG、Fins降低,ISI升高,PPAR-γmRNA、PI3κ-p85mRNA、CAPmRNA、GluT-4 mRNA表达量升高。结论:GS可上调脂肪组织PPAR-γ、PI3κ-p85、CAP、GluT-4mRNA的表达量,改善IR。